药物鉴别试验授课幻灯.ppt

《药物鉴别试验授课幻灯.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《药物鉴别试验授课幻灯.ppt（45页珍藏版）》请在三一办公上搜索。

1、1,第二章 药物的鉴别试验,2/45,一、鉴别的定义 Identification,中国药典2010年版定义鉴别项下规定的试验方法，仅反映该药品某些物理、化学或生物学等性质的特征，不完全代表对该药品化学结构的确证。注意：鉴别试验方法仅证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物，而非对未知物进行定性分析。,3/45,药品质量检验工作中的首项任务,含量测定方法相同，采用中性乙醇溶解供试品后，用0.1mol/l的NaOH进行滴定，酚酞为指示剂指示终点。,4/45,二、鉴别试验的项目,性状（Description)一般鉴别试验（general identification test）专属鉴别试验

2、（specific identification test）,5/45,（一）性状,药物的性状（description）反映了药物特有的物理性质，一般包括外观、溶解度和物理常数等。1.外观：指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。2.溶解度：药典采用“极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述药品在不同溶剂中的溶解性能。,6/45,7/45,（一）性状,3.物理常数:不仅对药品具有鉴别意义，也反映了该药品的纯杂程度。药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。,（1）熔点：固体液体的温度,8/45,

3、（一）性状,（2）比旋度:在一定波长与温度下，偏振光透过长1dm且每1 ml中含有旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度称为比旋度。是反映手性药物特性及其纯度的主要指标，用于鉴别药品、含量测定。,附录VIE 旋光度测定法,9/45,已知比旋度，如何求算物质含量？药物分析实验指导P170，葡萄糖含量测定,为比旋度；为旋光度；l为光程长短（dm）；c为每100ml中含有干燥品物质重量（g）,10/45,（一）性状,（3）吸收系数：在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。,有两种表示方式：摩尔吸收系数和百分吸收系数。后者是中国药典收载的方法，它是指在一定

4、波长下，溶液浓度为1（W/V)，厚度为l cm时的吸收度，用 表示，用于考查药品的质量，定量分析。,11/45,几种常见喹诺酮类药物的紫外吸收特征,由吡啶酮酸并联苯环、吡啶环或嘧啶环等芳香环组成的化合物,12/45,(二)一般鉴别试验（general identification test）,依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪。无机药物：药物中的阴离子和阳离子的特殊反应；有机药物：典型的官能团反应。一般鉴别试验只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药物。通常一般鉴别试验不适用于数种化学药物的混合物鉴别或在有干扰物质存在时鉴别。,13/45,一般鉴别试验项目

5、,丙二酰脲类：苯巴比妥 芳香第一胺类：对乙酰氨基酚 托烷生物碱类：硫酸阿托品 有机酸盐：阿司匹林 无机金属盐类：钠盐 无机酸盐：氯化物 有机氟化物类：氟康唑,14/45,水杨酸盐（Salicylates）的鉴别试验,方法1：取水杨酸供试品的水溶液，加三氯化铁试液1滴，即显紫色。原理 本品在中性或弱酸性条件下，和三氯化铁试液生成配位化合物。,方法2：取供试品溶液，加稀盐酸，即析出白色水杨酸沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。,15/45,（三）专属鉴别试验（specific identification test）,证实某一种药物的依据，它是根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性不

6、同，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。注意与一般鉴别试验的区别共性中找寻个性差异,16/45,加碳酸钠试液煮沸后放冷，加过量稀硫酸，析出白色沉淀，并有醋酸臭味,+H2SO4,CH3COOH,17/45,三、鉴别方法,药物的鉴别方法要求专属性强，重现性好，灵敏度高，以及操作简便、快速等对于化学药物，常用鉴别方法有化学法，光谱法，色谱法和生物学法。对于中药材及其制剂等，还有显微鉴别法和特征图谱或指纹图谱。,18/45,（一）化学鉴别法,原则：反应迅速、现象明显，具有明确的原理常用方法：呈色反应鉴别沉淀生成反应鉴别荧光反应鉴别气体生成反应鉴别使试剂褪色鉴别测生成物熔点,19/45,1.

7、呈色反应鉴别法：,系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。在鉴别试验中最为常用的反应类型有：（1）三氯化铁呈色反应：一般都含有酚羟基或水解后产生酚羟基；（2）异羟酸铁反应：一般多为芳酸及其脂类、酰胺类；,20/45,（3）茚三酮呈色反应：氨基酸及氨基糖苷；（4）重氮化一偶合显色反应：一般都有芳伯氨基或能产生芳伯氨基；,1.呈色反应鉴别法：,21/45,2.沉淀生成反应鉴别法：,系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成不同颜色和具有特殊形状的沉淀。常用的沉淀反应有：（1）与重金属离子的沉淀反应：在一定条件下，药物和重金属离子反应，生

8、成不同形式的沉淀；（2）与硫氰化铬胺（雷氏盐）的沉淀反应：这类药物多为生物碱及其盐和具有芳香环的有机碱及其盐；,22/45,3.荧光反应鉴别法,常用的荧光发射形式有以下类型：（1）药物本身（2）药物溶液加硫酸使呈酸性后（3）药物和溴反应后（4）药物和间苯二酚反应后在可见光下发射荧光；,23/45,4.气体生成反应鉴别法,胺类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物：经强碱处理后，加热，产生氨气；含硫的药物：可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体；含碘有机药物：经直火加热，可生成紫色碘蒸气；含醋酸酯和乙酰胺类药物：经硫酸水解后，加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。,24/45,例：葡萄糖的鉴别呈色反应,取本品约

9、0.2g，加水5ml溶解后，缓缓滴入微温的碱性酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜的红色沉淀,25/45,（二）光谱鉴别法,1.红外光谱法专属性强、应用较广（固体、液体、气体样品）主要用于组分单一、结构明确的原料药，特别适合于结构复杂、细微差别同类药物，如磺胺类、甾体激素类和抗生素类药品。鉴别方法：中国药典和BP均采用标准图谱对照法；USP采用对照品法。,26/45,27/45,试样制备方法压片法、糊法、膜法、溶液法应用光谱图对照时应注意的问题：（1）固体药物晶型（2）供试片制备条件（3）CO2和水汽等大气干扰（4）仪器间分辨率及操作条件的影响（5）多组分药物与多晶型现象（6）制剂鉴别,2.红外光谱

10、法,28/45,2.紫外光谱法,光谱简单，专属性差。常用的方法有：（1）测定最大吸收波长或同时测定最小吸收波长；（2）规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度；（3）规定吸收波长和吸收系数法；（4）规定吸收波长和吸收度比值法；（5）经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。以上方法可以单个应用，也可几个结合起来使用，以提高方法的专属性。,29/45,示例一 取色甘酸钠，加磷酸盐缓冲液（pH7.4）溶解并稀释成每1ml中约含10g的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录IV A）测定，在238nm与326nm波长处有最大吸收。,对比吸收光谱特征参数,30/45,示例二 取对氨基水杨酸钠250m

11、g，加1mol/L氢氧化钠溶液3ml，溶解后转移至500ml量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。精密吸取5ml溶液置于内含pH 7磷酸盐缓冲液12.5ml的250ml量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，即为供试品溶液。另配制相同浓度缓冲溶液的空白对照液。于2652nm和2952nm波长处测定吸收度A265和A295，规定A265/A295的值应在1.501.56之间。,对比规定吸收波长的吸收度比值,31/45,示例三 USP(30)采用对照品法，将样品与对照品按同法处理，在200400nm波长范围内扫描两溶液，要求在相同的波长处有最大吸收、最小吸收和相同的吸收系数，或吸收比在规定的限度内。阿替洛尔的紫外光

12、谱鉴别：“本品50g/ml甲醇溶液显示的紫外光谱图与相同条件下测得的USP阿替洛尔参考标准品的紫外光谱图一致”,对比吸收光谱一致性,32/45,（三）色谱鉴别法,利用不同物质在不同色谱条件下，产生各自的特征色谱行为（Rf值或保留时间）进行鉴别试验。采用与对照品（或经确证的已知药品）在相同的条件下进行色谱分离，并进行比较鉴别。,33/45,1.薄层色谱法,ChP2010中对TLC鉴别法的要求,对照品 供试品,对照品混合供试品,供试品 结构类似品,供试品混合结构类似品,比移值+颜色综合考虑一致性实验中考虑：供试品/对照品；薄层板；展开剂；显色剂,34/45,2.HPLC和GC法,一般规定按供试品含

13、量测定项下的色谱条件进行试验。要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致。内标法时，要求药物与内标物峰的保留时间比值也应相同。,35/45,阿司匹林和阿司匹林片,阿司匹林-原料药鉴别：酚羟基显色/酯键水解/红外光谱阿司匹林片-制剂鉴别：,36/45,（四）显微鉴别法,主要用于中药及其制剂的鉴别综合药用植物学与生药学知识实现,（五）生物学法,主要用于抗生素、生化药物及中药的鉴别利用药效学和分子生物学等有关技术来鉴定药物品质的一种方法,37/45,（六）指纹图谱与特征图谱鉴别法,通过对所得到的能够体现中药整体特性的图谱识别，提供一种能够比较全面的控制中药质量的方法，从化学物质基础的角度保证中药制剂的

14、稳定和可靠分析方法建立指纹图谱认证方法验证数据处理与分析,38/45,虎杖药材对照指纹图谱,39/45,22批不同来源虎杖样品经校正后的匹配图,40/45,四、鉴别试验的条件及方法验证,溶液的浓度溶液的温度溶液的酸碱度干扰成分的存在试验时间,41/45,方法验证,专属性：在其他成分存在的情况下，采用的鉴别方法能否正确的鉴别出被测物质的特性；一般选择采用两种以上不同类型的方法耐用性：测定条件发生微小变动时，测定结果受到的影响程度,42/45,例：复方硝酸咪康唑与盐酸小檗碱软膏剂鉴别项（TLC法）,两个主药，硝酸咪康唑/盐酸小檗碱简单的角度：一个展开系统完成二者的鉴别，一块薄层板上点样四个点验证的

15、专属性：结构类似物的分离耐用性：展开剂比例的调整,43/45,小结,鉴别的定义鉴别试验的项目性状一般鉴别试验专属鉴别试验鉴别方法化学/光谱/色谱/显微/生物学/指纹图谱鉴别条件与方法验证专属性/耐用性,44/45,练习题,在鉴别试验项目中可以反映药物的纯度，又可以用于药物鉴别的中药指标是A 溶解度B 专属性反应C 物理常数D 沉淀反应E 外观中国药典采用红外光谱法鉴别药物时，一般采用A 峰面积法B 峰高法C 光谱解析法D 内标法E 标准图谱对照法下列哪种鉴别方法专属性最强A UVB IRC HPLCD TLCE GC芳香第一胺类药物鉴别试验使用的试剂有（多选）A 稀盐酸B 稀硝酸C 亚硝酸钠D-萘酚E 硝酸银,45/45,思考题,一般鉴别试验与专属鉴别试验的区别？常用的光谱分析法与色谱分析法的应用注意点？,