【大学实验】动物组织石蜡切片制作.ppt
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1、动物组织石蜡切片制作,http:/,实验目的,制作实验动物的组织切片并染色,掌握动物组织制片技术,http:/,实验用品,1动物的组织。2器材和仪器:切片机、展片仪、毛笔、载玻片、盖玻片、烤箱、显微镜。3试剂:60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯、石蜡、中性树胶。,http:/,方案一:病理石蜡切片的制作,(一)石蜡组织块制作1取材。2固定。3脱水、透明及浸蜡(具体步骤见表)。4包埋,http:/,http:/,注意事项,一般实质性脏器的组织及肿瘤组织应把最大切面朝下包埋;食管、胃、肠等组织须将管壁横断面朝下包埋,若在同一蜡块中包埋数块管壁组织时,应平行
2、横埋且黏膜面(内膜)的方向应一致,以便切片及观察。同一蜡块包埋多个组织块时,组织的性质应相同,方向要一致,不能把大小、厚薄差别悬殊的组织包埋在一起,组织块间的距离不能太大。皮肤、骨等难切组织及需要连续切片的组织都应单独包埋。神经、脊髓及需要定向包埋的组织应注意组织块的相互关系。包埋(尤其在室温较低的情况下)操作应迅速,防止组织块变凉、蜡液凝结及出现气泡,组织块与蜡液不能很好凝固定在一起,导致组织与蜡分离。遇有管腔或空洞标本与小标本同埋一个蜡块时,不能将小标本放入其他标本的管腔或空洞内。,http:/,(二)石蜡切片制作,用切片机将石蜡包埋的组织块(蜡块)制成适宜厚度的切片,是目前在病理学科中最
3、常用的一种制片方法。切片厚度为一般46m。【切片前的准备】1、修切蜡块 切片前应先修块,即切去组织周围过多的石蜡,一般留下约2mm宽度的蜡边为宜。注意蜡块不能留得太窄,在切片时易损坏组织;蜡边不能留得太多,否则影响展片。室温过高时,可将修好的蜡块放到冰箱中冷却一定时间。2、切片用品准备(1)切片刀:预先磨好切片刀备用或切片前更换新的一次性切片。(2)载物片:载物片经清洁液、95%乙醇处理后备用。(3)展片仪:加入温水,接通电源,调整温度。(4)其他用品:准备好毛笔、记号笔、镊子、冰块等。,http:/,【切片制作过程】以使用旋转式切片机石蜡切片为例:1将切片刀装在刀架上,后将蜡块装在切片机固定
4、装置上。调整蜡块与刀至合适位置(刀刃与蜡块切面呈5夹角)旋转式切片机切取组织,是由下向上切,为得到完整的切片,防止组织出现刀纹裂缝,应将组织硬脆难切的部分放在上端(如皮肤组织,应将表皮部分向上。而胃肠等组织,应将浆膜面朝上)。2左手执手笔,右手旋转切片机旋转轮。先粗切标本,直到暴露出组织最大切面(但对小标本不要修切得太多,以免将整个组织块修切掉)。再连续旋转切出蜡带,左手持毛笔将蜡片带下端轻轻托起,右手用镊子夹起蜡带上端,正面向上放入展片仪水盒内,展片温度根据使用的石蜡熔点进行调整,一般水温为45左右,待蜡片带中的组织展平后,即可进行分片和捞片。对于展片困难的切片经30%的乙醇初展后,再用载玻
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