《低压层析系统》PPT课件.ppt

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1、7/30/2023,1,中低压层析系统,主讲人：彭元鸿,7/30/2023,2,中低压层析系统,流量 输出流量：1-6800 ml/h波长 220、254、280、340nm定时范围1s-24h 收集容量12ml100温度范围0-30配置 蠕动泵、三支层析柱、（仪器车）层析柜、紫外检测仪、自动部分收集器、电脑采集器。（电脑自配）,7/30/2023,3,中低压层析系统,恒流泵层析柱紫外监测仪分布收集器核酸蛋白检测系统,7/30/2023,4,层析法,层析法 是目前广泛应用的一种分离技术，是生物化学、分子生物学其 它学科领域有效的分离分析工具之一。层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技

2、术。所有的层析系统都由两个相组成：一是固定相，它或者是固体物质或者是固定于固体物质上的成分；另一是流动相，即可以流动的物质，如水和各种溶媒。当待分离的混合物随溶媒（流动相）通过固定相时，由于各组份的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量对比）不同，而且随溶媒向前移动，各组份不断地在两相中进行再分配。与固定相相互作用力越弱的组份，随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移动的速度快。反之，与固定相相互作用越强的组份，向前移动速度越慢。分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组份，从而达到将各组份分离的目的。,7/30/2023,5,层析法,7/30

3、/2023,6,层析法,吸附层析 是以吸附剂为固定相，根据待分离物与吸附剂之间吸附力不同而达到分离目的的一种层析技术。分配层析 是根据在一个有两相同时存在的溶剂系统中，不同物质的分配系数不同而达到分离目的的一种层析技术。凝胶过滤层析 是以具有网状结构的凝胶颗粒作为固定相，根据物质的分子大小进行分离的一种层析技术。离子交换层析 是以离子交换剂为固定相，根据物质的带电性质不同而进行分离的一种层析技术。亲和层析 是根据生物大分子和配体之间的特异性亲和力(如酶和抑制剂、抗体和抗原、激素和受体等)，将某种配体连接在载体上作为固定相，而对能与配体特异性结合的生物大分子进行分离的一种层析技术。亲和层析是分离

4、生物大分子最为有效的层析技术，具有很高分辨率。,7/30/2023,7,层析柱分类,层析柱产品品种:1、普通层析柱（柱内压增加1-2巴）2、中压特制玻璃层析柱(带转换接头)（柱内压增加5-7巴）3、高压水冷夹套层析柱(带转换接头)（柱内压增加5巴左右）4、大型有机玻璃柱（带分布系统）（柱内压小于0.5巴）5、有机玻璃层析柱(带转换接头)（柱内压小于0.5巴）6、有机玻璃层析柱(带转换接头)（柱内压增加2-3巴）,层析柱 是柱色谱中的主体之一，一般用玻璃管或有机玻璃管。,7/30/2023,8,层析柱,7/30/2023,9,层析柱规格（上海沪西）,7/30/2023,10,BT-100恒流泵,

5、7/30/2023,11,HD-5电脑紫外监测仪-1,7/30/2023,12,HD-5电脑紫外监测仪,HD-5电脑紫外检测仪-2,7/30/2023,13,HD-5电脑紫外监测仪,HD-5电脑紫外检测仪-3,HD-5电脑紫外检测仪是应用于液相色谱中具有紫外吸收物质（蛋白、核酸、多肽、酶）的检出仪器。该仪器与层析柱、恒流泵、部分收集器及电脑或记录仪配套，可组成一个完整的液相色谱分离分析装置。在柱层析分离分析过程中，洗脱液流过该仪器样品池，电脑或记录仪即可自动绘制出样品分离的图谱（吸受峰或透过峰），同时可检测出所需样品在部分收集器试管中的分布情况，并随时监测柱层析过程，特别是在摸索实验过程中，及

6、时改变洗脱条件，以便迅速取得最佳实验方案。,7/30/2023,14,HD-5电脑紫外监测仪,HD-5电脑紫外检测仪-4,主要技术指标：1.检测波长：220 nm 254 nm 280 nm 340 nm 2.流动式样品池：容积100 ul 3.最大流量：10 ml/min（特殊需要可另配）4.配接记录仪信号：0-10mV5.可直接连接电脑检测绘制样品分离图谱6 使用环境温度：0-30C7.工作时间：连续8.电源：220 AC 20 W9.保险丝：BGXP-1 1 A,7/30/2023,15,HD-5电脑紫外监测仪,HD-5电脑紫外检测仪-5,使用方法：一、校对仪器工作状态1.选定检测波长：

7、从有机玻璃盒中取出干涉滤光片（250nm或280nm），插入仪器正面“滤光片”下方小长方孔内，并使其插入到底部位置（插入时应注意使干涉滤光片侧面有一直径为3mm的半球形凹槽朝上）。2按下“电源开关”（在仪器后背板上），仪器预热20分钟，以便得到较好的稳定性。3.校对TA a）.按下按键开关“”键，“透过率T”指示灯亮。调节“调T”旋钮（顺时针调节透过率增大），使数字显示100，此时透过率T为100%。b).按下按键开关“1A”键，“吸光度A”指示灯亮，调节“A调零”旋钮，使数字显示000，此时吸光度A为零。,7/30/2023,16,HD-5电脑紫外监测仪,HD-5电脑紫外检测仪-6,1.连接

8、检测仪和记录仪：连接线有金属插头的一端接在检测仪后背板“接记录仪”插口上，（此插口输出信号可同时输出给部分收集器作为控制信号）另一端“黑”“红”两个接线叉分别接在记录仪“L”“H”两个输入插座上。2.选择系统最佳工作状态。a).校对记录仪零位b).记录仪“记录纸速度“选择2cm/h档c).记录仪输入“量程”选择10 mv档d).恒流泵流速视层析柱大小选择110 ml/min3.确定基线：调节“调T”旋钮，确定基线位置。为防止系统出现负漂移，基线通常调节在大于零的位置上，如记录仪满量程的十分之一。读取A值时注意扣除此数值。,4.确定好基线位置后，即可上样（特别注意上样后切勿再改变基线位置）。当洗

9、脱样品流过检测仪时，记录仪即可绘制出样品吸光度A随时间h变化的图谱。5.按键开关2A至0.05A每一档均表示记录仪满量程读数。如按下“2A”档，记录仪记录笔指在满量程位置，此时吸光度为2A，记录笔指在满量程50%的位置，吸光度即为1A；如按下“0.5A”档，记录仪记录笔指在满量程位置，此时吸光度为0.5A，记录笔指在满量程50%的位置，吸光度即为0.25A。选取吸光度量程视样品浓度而定，通常选取“1A”档，此档既便于读数，也能满足一般实验需要。,二、配接记录仪检测绘制样品分离图谱,7/30/2023,17,HD-5电脑紫外监测仪,HD-5电脑紫外检测仪-7,1 将仪器后背板“接电脑”插口与电脑

10、COM1串行口用随机配置的连接线相接。2.按使用方法“一、”校对仪器工作状态。3.将吸光度量程2A0.05A置任意档（勿置于T档）。4.层析系统准备就绪后开启电脑,插入光盘，待自动出现“核酸蛋白检测系统”界面后，按以下步骤操作：选择“直接运行或本机安装”/检测操作/采集COM1/保存（默认文件名为当前日期）/洗脱谱图选择/吸光度（默认状态为1A）/记录速度（默认状态为10个小时）。,三、直接与电脑连接检测、绘制、打印、保存样品分离图谱及计算有关数据。,7/30/2023,18,HD-5电脑紫外监测仪,HD-5电脑紫外检测仪-8,三、直接与电脑连接检测、绘制、打印、保存样品分离图谱及计算有关数据

11、。,5.用键盘“Home（放大）”和“End（缩小）”键调节洗脱谱图在电脑屏幕上的大小。6.确定基线：调节“调T”旋钮，确定基线位置。为防止系统出现负漂移，基线通常调节在大于零的位置上，如满量程的十分之一。读取A值时注意扣除此数值。7.确定好基线位置后，即可上样（特别注意上样后切勿再改变基线位置）。当洗脱样品流过检测仪时，电脑即可绘制出样品吸光度A随时间h变化的图谱。8.实验结束：点击检测操作/停止COM1采集/确定。,7/30/2023,19,HD-5电脑紫外监测仪,HD-5电脑紫外检测仪-9,三、直接与电脑连接检测、绘制、打印、保存样品分离图谱及计算有关数据。,7/30/2023,20,H

12、D-5电脑紫外监测仪,HD-5电脑紫外检测仪-10,三、直接与电脑连接检测、绘制、打印、保存样品分离图谱及计算有关数据。,e)单击工具栏 按钮，可计算所选收集峰的相关数据。方法如下：,用纵向两根棕色线确定收集范围：点击左边一根棕色线，移至收集起始点，点击；点击右边一根棕色线，移至收集结束点，点击。用纵向两根绿色线确定收集峰峰宽：点击左边一根绿色线，移至收集峰的起始点，点击；点击右边一根绿色线，移至收集峰的结束点，点击。用横坐标上一根紫色线确定收集峰的基线：点击紫色线，移至收集峰基线，点击。完成上述选择后，界面右上方将显示收集峰的相关数据。10.双击谱图上任意一点，可显示该点A值或T%值。11.在菜单“设置”中，可选择实验日期是否打印。12.在菜单“窗口”中，可选择二个层析谱图的排列方式。,7/30/2023,21,分布收集器,7/30/2023,22,分布收集器,7/30/2023,23,分布收集器,7/30/2023,24,中低压层析系统,The End!,