肿瘤免疫治疗新策略与临床应用.ppt

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1、肿瘤免疫治疗新策略与临床应用,解放军总医院 史军,目录,肿瘤细胞免疫治疗及iAPA基础国外细胞治疗临床试验概述iAPA免疫细胞临床治疗流程及方案典型病例报告,肿瘤细胞免疫治疗及iAPA基础,肿瘤免疫细胞治疗概述常规免疫细胞技术应用：DC/CIK/CTL免疫细胞治疗新策略：iAPA-细胞治疗应用,肿瘤免疫细胞治疗概述,免疫细胞治疗第四大肿瘤治疗模式二十一世纪是细胞治疗世纪，现在已有许多方法进入临床。2010年4月29日，美国FDA 批准上市了全球第一个免疫细胞治疗产品（Provenge）,免疫细胞治疗模式图,常规免疫细胞治疗技术,树突状细胞免疫治疗（Dendritic Cells,DC）细胞因子

2、诱导的杀伤细胞免疫治疗（Cytokine-induced killer cell,CIK）树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞免疫治疗（DC-CIK）自然杀伤细胞免疫治疗（Natural killer cell,NK）,NK细胞,属淋巴细胞谱系，但有别于T细胞、B细胞的一类非特异性免疫细胞。其无须预先接触抗原即可杀伤靶细胞(如病毒感染的宿主细胞和某些肿瘤细胞)，且其杀伤效应无MHC限制性。杀伤介质 主要有穿孔素、NK细胞毒因子和TNF等。,细胞毒T细胞（cytotoxic T cell）：消灭受感染的细胞。这些细胞的功能就像一个“杀手”或细胞毒素那样，因为它们可以对产生特殊抗原反应的目标细胞进

3、行杀灭。细胞毒T细胞的主要表面标志是CD8.辅助T细胞（helper T cell）在免疫反应中扮演中间过程的角色：它可以增生扩散来激活其它类型的产生直接免疫反应的免疫细胞。辅助T细胞的主要表面标志是CD4。T细胞调控或“辅助”其它淋巴细胞发挥功能。它们是已知的HIV病毒的目标细胞，在艾滋病发病时会急剧减少。调节/抑制T细胞（regulatory/suppressor T cell）：负责调节机体免疫反应。通常起着维持自身耐受和避免免疫反应过度损伤机体的重要作用。调节/抑制T细胞有很多种，目前研究最活跃的是CD25+CD4+T细胞。记忆T细胞（memory T cell）：在再次免疫应答中起重

4、要作用。记忆T细胞由于暂时没有非常特异的表面标志，目前还有很多未知之处。,T淋巴细胞,LAK细胞,严格来说，LAK细胞并非是一个独立的淋巴群或亚群，而是NK细胞或T细胞体外培养时，在高剂量IL-2等细胞因子诱导下成为能够杀伤NK不敏感肿瘤细胞的杀伤细胞，称为淋巴因子激活的杀伤细胞（lymphokine activated killer cells,LAK）。,树突状细胞免疫治疗,树突状细胞(dendritic cells，DCs)发现：1973年Steiman和Cohn首次从脾脏中分离出来功能：它是机体功能最强的专职抗原递呈细胞(Antigen presenting cells,APC)，它能

5、高效地摄取、加工处理和递呈抗原。,DC刺激免疫反应的特点DC是人体内功能最强的专职抗原递呈细胞具有活化T细胞的功能。可致敏辅助T细胞的多种细胞因子，显著刺激初始型T细胞增殖。帮助重建肿瘤患者对肿瘤细胞的免疫监视功能。,细胞因子诱导的杀伤细胞免疫治疗,细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer,CIK）兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点是新一代抗肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案作用机理对肿瘤细胞和病毒感染细胞的直接杀伤释放的大量炎性细胞因子具有抑瘤杀瘤活性诱导肿瘤细胞的凋亡,T cell,Mature DC,Anti-tumorRespon

6、se,Antigen Presentationwith Plenty of Co-stimulatory Signals,APC,DCs的抗原呈递:第一信号:MHC I/II-antigenic peptides 第二信号:共刺激分子 第三信号:细胞因子,树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞免疫治疗（DC-CIK）,GM-CSF进行动员，血细胞分离机分离肿瘤患者外周血PBMC 200ml(39109),体外诱导DC-CIK细胞,自体回输DC-CIK细胞给患者,清除肿瘤细胞，延长病人生存期。,以DC/CIK技术治疗肺癌、胃癌等 癌症患者，取得了良好的治疗效果，在此过程中也在不断探索提高DC细胞递

7、呈能力及CIK活性的技术.,细胞免疫治疗相关文献报道,Randomized Study of Autologous Cytokine-Induced KillerCell Immunotherapy in Metastatic Renal CarcinomaLiang Liu,Weihong Zhang,Xiuying Qi,Hui Li,Jinpu Yu,Sheng Wei,Xishan Hao,and Xiubao Ren,Results:The 3-year PFS and OS in arm 1 were 18%and 61%,as compared with 12%and 23%in

8、arm 2(P 1/4 0.031 and 0.001,respectively).The median PFS and OS in arm 1 were significantly longerthanthoseinarm2(PFS,12vs.8months,P1/40.024;OS,46vs.19months,P0.001).Multivariateanalysesindicated that the cycle count of CIK cell immunotherapy as a continuous variable was significantlyassociated with

9、 prolonged PFS HR 1/4 0.88;95%confidence interval(CI),0.84-0.93;P 0.001 and OS(HR 1/4 0.58;95%CI,0.480.69;P 0.001)in arm 1.Conclusion:ThedatasuggestedthatCIKcellimmunotherapycouldimprovetheprognosisofmetastaticclearcellRCC,andincreasedcyclecountofCIKcelltreatmentcouldfurtherenhancethebeneficialeffec

10、ts.Clin Cancer Res;18(6);17519.2012 AACR.,原方案有待改进之处,DC的成熟度低，不能有效突破机体对自身肿瘤的免疫耐受DC对抗原的呈递功能有待提高肿瘤抗原对杀伤T细胞的特异性活化作用欠佳,机体针对自体肿瘤存在免疫耐受，限制了DC疫苗的效果,肿瘤相关抗原摄取提呈能力弱,困扰传统免疫治疗在临床中应用的瓶颈,效应细胞特异性及杀伤活性较弱,（-）,（-）,（-）,肿瘤逃避免疫攻击的机制,肿瘤细胞的抗原性弱,MHC分子表达下降 或缺失,第二信号系统下降或缺失肿瘤细胞诱导产生免疫抑制因子或细胞,如 Ts、Mo、M、TGF、IL10,CD200肿瘤细胞表达FasL,诱导

11、T细胞凋亡放疗、化疗等因素损伤免疫细胞功能,SOCS1 是维持机体免疫耐受的重要分子,Si-Yi Chen et al.发现：SOCS1(Suppressor of Cytokine Signaling 1)是一种重要的免疫负调节因子(antigen presentation attenuator,APA)，对DC细胞的抗原呈递起负调节作用，限制抗原呈递的时间和强度，从而限制自体抗肿瘤免疫反应。该研究第一次提出了抑制免疫负调控因子来增强DC疫苗的概念,Nature Biotechnol.2004;22:1521-2评述：Nature Biotechnol.2004;22:1546-53 J.C

12、lin.Invest.2006;116:90100,STAT,SOCS1,JAK,Cytokine,IFN,IFN,IL-2,IL-3,IL-4,IL-6,IL-12,IL-7,IL-15,M-CSF,etc.,LPS,MyD88,TRAF6,IKK,IKK,RelA,p50,IB,IKK,IRAK,Mal,SOCS1,TLR 配体,通过抑制SOCS1功能，增强抗原特异性免疫反应,抑制某个关键性的APA分子,如SOCS1,对于打破整体水平的免疫耐受是必须的.第一次提出抑制免疫负调节因子来提高DC疫苗的策略，公司拥有该项技术的专利.,Nature Biotech.22:1546,2004;JCI

13、.116:90,2006;Nature Medicine 14:258,2008,TAA,s-Flagellin,SOCS1-siRNA:解除DC免疫耐受(persistent and enhanced Signals 2/3),肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen,TAA)intracellular Survivin(T cells)surface MUC1(T cells and Ab),分泌型FliC:TLR5 ligand auto-and paracrine activation of APCs(enhanced Signals 2/3),siSOCS1-T

14、T,iAPA-免疫细胞,与传统免疫细胞治疗相比，iAPA技术的优势,结构新颖：iAPA因子包含抑制SOCS1的siRNA、肿瘤抗原（Survivin,muc1）和鞭毛蛋白。机制新颖：iAPA技术不但针对性增强DC免疫活性，而且去除了免疫负性调控因素，从而更有效的增强了免疫效应。创新靶点：iAPA技术作用的靶点独创性针对免疫活化通络上的关键性分子iAPA分子-SOCS1,27,28,2023年7月29日星期六,iAPA技术完全打破了传统的免疫治疗理念与方法，代表了免疫学理论的一场新的革命，为国际首创、世界一流。许多研究成果已分别发表在国际一流权威杂志，包括Nature biotechnology

15、、Nature medicine与JCI等。,基础研究：国际首创世界一流为国际医学界所公认,Silencing of SOCS1 enhances antigen presentation by dendritic cells and antigen-specific anti-tumor immunity.Nat Biotechnol.2004 Dec;22(12):1546-53.Keeping DCs awake by putting SOCS1 to sleep.Trends Immunol.2005 Apr;26(4):177-9.Knocking the SOCS1 off den

16、dritic cells.Nat Biotechnol.2004 Dec;22(12):1521-2.An alternative and effective HIV vaccination approach based on inhibition of antigen presentation attenuators in dendritic cells.PLoS Med.2006 Jan;3(1):e11.New approaches to vaccine adjuvants:inhibiting the inhibitor.PLoS Med.2006 Jan;3(1):e57.SOCS1

17、 restricts dendritic cells ability to break self tolerance and induce antitumor immunity by regulating IL-12 production and signaling.J Clin Invest.2006 Jan;116(1):90-100.Dendritic cell-based tumor vaccines and antigen presentation attenuators.Mol Ther.2006 May;13(5):850-8.Suppressor of cytokine sig

18、naling 1 inhibition strategy to enhance anti-HIV vaccination.Expert Rev Vaccines.2006 Aug;5(4):495-503.SOCS1 downregulation in dendritic cells promotes memory T-cell responses.Vaccine.2008 Feb20;26(8):1128-35.Human suppressor of cytokine signaling 1 controls immunostimulatory activity of monocyte-de

19、rived dendritic cells.Cancer Res.2009 Oct 15;69(20):8076-84.A20 is an antigen presentation attenuator,and its inhibition overcomes regulatory Tcell-mediated suppression.Nat Med.2008 Mar;14(3):258-65.A Th1-inducing Adenoviral Vaccine for Boosting Adoptively Transferred T Cells.Mol Ther.2010 Oct 19.IR

20、AK-M removal counteracts dendritic cell vaccine deficits in migration and longevity.J Immunol.2010 Oct 1;185(7):4223-32.Twist-2 Controls Myeloid Lineage Development and Function.PloS Biology,2008 Dec;6(12):2786-2800.,iAPA技术临床前安全性评价资料,iAPA技术临床前安全性评价资料,SOCS1-siRNA DC突破小鼠对自身免疫耐受，明显提高抗肿瘤效果,动物试验研究：siRNA-

21、SOCS1-DC对弱免疫源性的B16荷瘤小鼠肿瘤生长具有很强的抑制作用（图A），同时可以显著地延长了B-16荷瘤小鼠的生存期（图B），显著优于常规DC治疗方法,J.Clin.Invest.2006;116:90100,临床前研究-有效性评价,HLA-A2.1转基因小鼠中增强的肿瘤抗原特异CTL反应,临床前研究-有效性评价,国外细胞治疗临床试验概述,2009年-至今,临床实验中常出现的癌症,2010年4月29日，美国FDA 批准上市了全球第一个免疫细胞治疗产品（Provenge）,iAPA免疫细胞与Provenge的比较,单病种管理方案,适应症禁忌症治疗检查项目治疗方法及流程质控疗效评估疗程伴随

22、反应与放化疗关系随访,适应症,肿瘤临床确诊，血象正常或者趋于正常（WBC4109）重要生命器官功能正常预期生存期大于3个月无严重病毒、细菌感染非妊娠、哺乳期患者无生物制品过敏史患者治疗前需签署知情同意书,禁忌症,严重自身免疫性疾病患者心、肺、肝、脾等主要器官功能明显低下者IL-2等细胞因子过敏患者HIV阳性患者4周内进行过其他免疫治疗的患者妊娠或哺乳期妇女明确感染或发热患者,治疗前检查项目,治疗前检查项目实验室检查：完备血尿便常规及生化、肝功能、肾功能、血糖、血脂、电解质、凝血四项及传染病（HIV、乙肝三系、梅毒抗体、丙肝抗体）指标检查心电图、胸片、腹部（肝胆胰脾肾）彩超及疾病特异性检查项目生

23、活质量评分表（KPS评分）,治疗后检查项目,必检项目：血尿便常规、生化、心电图、疾病特异性检查指标及KPS评分其余检查项目根据患者情况、病种由其主治医师而定,KPS评分表,免疫细胞治疗方法,2周内给药总量iAPA-CTL 11010以上；iAPA-DC 1108以上给药方式以静脉滴注为主，也可选择淋巴结区域皮下注射、腔内注射,治疗流程,术前安全性检查（传染病指标及凝血酶谱相关检查）填写申请表审核合格，制备细胞细胞回输填报伴随反应表随访,质控,iAPA-DC的检测 质检项目：细胞数量；细胞存活率；DC细胞表型分析；细菌检测；真菌检测及内毒素检测iAPA-T 的检测 质检项目：细胞数量；细胞存活率

24、；T细胞表型分析；细菌检测；真菌检测及内毒素检测,疗效评估,回输前、后患者外周血细胞免疫功能检测：CD3、CD4、CD8等，细胞因子水平测定（IL-2、IL-10等）回输前、后患者KPS评分及体重等变化回输前、后（3个月左右）肿瘤影像学变化，及肿瘤标记物等相关指标的动态监测患者治疗前后生命体征与生存质量、生存期长短的动态监测；细胞回输前后患者不良反应的观察,疗程,每个疗程一般为15-20天；可视病情1-3个月后进行第二个疗程,伴随反应,常见的为寒战、乏力、发热、背痛、恶心、关节痛等处理：给予物理降温、药物及对症治疗，一般即可好转。如果仍为好转，可行血常规、C反应蛋白及血培养等进一步治疗填写不良

25、事件表,与放、化疗关系,放化疗结束后，白细胞数量恢复至4109以上方可行生物治疗；,随访,随访时间：细胞输注后第一周、第二周、一个月、二个月、三个月、六个月、十二个月和两年随访方式：有条件的患者，随访医生应将患者请回治疗中心进行系统的复诊；受条件所限不能来治疗中心复诊时，可按患者方便选择就近医院，按要求进行复诊，并将复诊资料寄回通过电话或电子邮件进行的随诊，也应要求患者进行系统的医学检查和评估，逐项记录；不得有漏项，否则不得作为随访资料随访病例的检查资料，应于免疫细胞治疗前的临床检查保持一致随访记录：采用随访记录单模式统一记录,前瞻性临床方案的设计,前列腺癌（北京大学附属首钢医院）肺癌（云南省

26、肿瘤医院）胆管癌（南京医科大学附属第二医院）子宫内膜癌（南京医科大学附属第二医院）结直肠癌（浙江省第一人民医院）,临床资料(典型病例）,iAPA DC/T细胞治疗激活了肿瘤抗原特异性的T细胞反应,iAPA DC/T细胞治疗诱导了肿瘤抗原特异性的血清抗体的产生,南京医科大学治疗病例,iAPA技术治疗淋巴瘤病人的病例报告,患者 女 48岁 淋巴瘤免疫治疗后PET/CT 示锁骨上、纵隔、双侧肺门部多发代谢活跃的淋巴结，代谢活性明显降低。,61,前列腺癌患者，伴有全身多发性骨转移。该患者术后接受iAPA技术治疗期间，没有接受其他任何治疗，治疗前后前列腺癌肿瘤标志物PSA检测结果显示，PSA值由最高的9

27、40.9降为0.86。骨转移消失。,iAPA技术治疗前列腺癌病人的病例报告,iAPA-免疫细胞治疗结肠癌肺转移病人的病例报告,62,治疗前后细胞免疫表型(CD),iAPA免疫细胞治疗结肠癌肺转移病人的病例报告,63,褚：男，58岁。2007年11月于外院行乙状结肠癌根治术，后给与4个周期乐沙定+希罗达方案化疗。患者2008年2月肠镜提示复发，在复旦大学肿瘤医院二次手术，术后检查未见转移，原方案化疗6疗程。2008年8月行PET-CT发现右肺伴纵膈及双侧肺门淋巴结转移。于2008年8月到2008年12月行10个疗程的伊立替康+亚叶酸钙+氟尿嘧啶方案联合化疗，效果不佳。2009年1月起入院进行iAPA疫苗生物免疫治疗。已治疗二个疗程。PET-CT示肺转移灶消失；外周血细胞免疫表型显示，活化性T细胞明显增多，而调节性Treg细胞显著降低。目前患者免疫治疗后无反复、无转移已近5个月，自觉生活质量明显提高。,