《细菌细胞结构》PPT课件.ppt
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1、六、细菌细胞结构,一般构造:如细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体、核糖体等,是所有细菌都有的构造特殊构造:主要有鞭毛、菌毛、性菌毛、荚膜和芽孢等,并非所有细菌都有的构造,Schematic diagram of a typical procaryotic cell.Minimally,a procaryote is composed of a cell wall and plasma membrane that surrounds its cytoplasm containing a chromosome,ribosomes,enzymes,several classes of RNA,and s
2、mall molecules(precursors).,(一)细胞壁cell wall:,细胞壁的观察方法:质壁分离染色 电镜观察,G与G-细菌cw的模式结构,共有组分肽聚糖特有组分G磷壁酸 G脂多糖,细胞壁是位于菌体的外层,内侧紧贴细胞膜的一层无色透明,坚韧而有弹性的结构。细胞壁约占细胞干重的10%-25%。,Electron micrograph of a G+cell wall.,Electron micrograph of a G-cell wall.,细胞壁cell wall:,Gram Positive,Gram Negative,概念:肽聚糖是由N-乙酰胞壁酸(NAM)和N-乙酰
3、葡糖胺(NAG)以及短肽链(主要是四肽)组成的亚单位聚合而成的大分子聚合物。,(1)CW的基本骨架肽聚糖(共有成分),G+菌肽聚糖单体,A comparison of L and D amino acids.Note that while the structure is identical,it is impossible to superimpose them.,肽聚糖网格状结构,NAG与NAM残基以-1,4糖苷键交替连接,形成聚糖的骨架(主链);一组相同的短肽侧链接于NAM上;相连主链上的短肽侧链通过一条肽桥、或直接相连,从而形成网状分子结构。,肽聚糖单体网状结构,G+菌肽聚糖单体,G菌
4、肽聚糖单体,Schematic diagram of the peptidoglycan sheet of Staphylococcus aureus.G=N-acetyl-glucosamine;M=N-acetyl-muramic acid;L-ala=L-alanine;D-ala=D-alanine;D-glu=D-glutamic acid;L-lys=L-lysine.This is one type of murein found in Gram-positive bacteria.Compared to the E.coli peptidoglycan there is L-l
5、ys in place of DAP(diaminopimelic acid)in the tetrapeptide.The free amino group of L-lys is substituted with a glycine pentapeptide(gly-gly-gly-gly-gly-)which then becomes an interpeptide bridge forming a link with a carboxy group from D-ala in an adjacent tetrapeptide side chain.Gram-positive pepti
6、doglycans differ from species to species,mainly in regards to the amino acids in the third position of the tetrapeptide side chain and in the amino acid composition of the interpeptide bridge.,肽聚糖的特点:,1)为原核生物所特有(古细菌例外)2)D-型氨基酸和DAP在真核细胞中未发现 3)个别菌中DAP(二氨基庚二酸)可为Lys 代替,革兰氏阳性细菌与阴性细菌肽桥的类型,注:第四型肽桥为Coryneba
7、cterium poinsettiae(猩猩木棒杆菌)所特有,(2)G+菌的细胞壁,细胞壁厚度 较厚,20-30nm细胞壁分层 不分层肽聚糖含量 含量高(30-70)肽聚糖层数 层数多交联度 交联度高磷壁酸 有脂多糖 无DAP 无,磷壁酸teichoic acid(垣酸),占壁干重40-50%。是以磷酸多元醇分子的重复结构单位为主链(骨架)的阴离子多聚物。在多数情况下,磷壁酸分子中的磷酸多元醇是磷酸甘油,或磷酸核糖醇,因此,根据主链组成不同可以将磷壁酸分为两大类:,磷酸甘油型磷壁酸核糖醇型磷壁酸,磷酸甘油型磷壁酸,根据结合部位的不同分为:壁磷壁酸:含量多,通过共价键与肽聚糖分子结合,并延伸到肽
8、聚糖分子表面,带有负电荷。膜磷壁酸:与菌细胞原生质膜的脂类结合。,磷壁酸的功能,协助肽聚糖加固细胞壁;增强细胞膜的稳定性;提高膜结合酶的能力(使细胞壁形成负电荷环 境,以利于吸附镁离子,维持酶活)构成噬菌体的吸附位点;形成表面抗原决定簇的主要成分。保证某些革兰氏阳性致病菌与其宿主间的粘连,如双歧杆菌可通过磷壁酸与肠上皮细胞表面受体结合等。,(3)G的细胞壁,细胞壁厚度 较薄10-15nm细胞壁分层 分层:外壁层 6-10nm 内壁层2-3nm肽聚糖含量 只占组分的5-10%肽聚糖层数 低,一般1-2层肽聚糖交联度 较低磷壁酸 少(在外膜层,5)脂多糖 无 抗原决定因子 O-抗原,蛋白质,Mur
9、amic acid subunit of the peptidoglycan of Escherichia.coli.This is the type of peptidoglycan found in most Gram-negative bacteria.The glycan backbone is a repeat polymer of two amino sugars,N-acetylglucosamine(GlNAc)and N-acetylmuramic acid(MurNAc).Attached to the MurNAc is a tetrapeptide consisting
10、 of L-ala-D-glu-DAP-D-ala.In the polymeric form of the molecule,nearby tetrapeptide side chains may be linked to one another by an interpeptide bond between DAP on one chain and D-ala on the other.,Schematic illustration of the outer membrane,cell wall and plasma membrane of a Gram-negative bacteriu
11、m.Note the structure and arrangement of molecules that constitute the outer membrane.,脂多糖(LPS,lipopolysaccharide):,LPS分子一般都是由三部分(区段)组成,G-菌的脂多糖具毒性,且与细菌表面紧密结合,仅在菌体裂解时才被释放出来,故称为内毒素(endotoxin)。,注:Gal:galactose,半乳糖;Gln:N-acetylglucosamine;Rha:Rhamnose,鼠李糖;Abe:abequosea阿比可糖;Man:mannoheptose 甘露庚糖,LPS层的主要功能
12、,构成某些革兰氏阴性细菌致病物质内毒素的物质基础;起细菌自我保护作用,它可以阻止溶菌酶、抗生素和染料等侵入菌体,也可以阻止周质空间中的酶外漏;作为重要的抗原因子决定了革兰氏阴性菌抗原的多样性;是许多噬菌体吸附的受体。,(4)革兰氏阳性细菌与革兰氏阴性细菌细胞壁成分比较,Correlation of Grams stain with other properties of Bacteria,功能与真细菌相似,但不含真正的肽聚糖,而含假肽聚糖、糖蛋白或蛋白质。假肽聚糖:由N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰塔罗糖胺糖醛酸通过-1,3糖苷键交替连接而成。肽尾:由L-Glu、L-Ala和L-Lys3个L型氨基酸
13、组成。肽桥:由L-Glu 1个氨基酸组成。,古生菌细胞壁,(5)细胞壁的功能:,1、决定了革兰氏染色的性质;2、决定细菌的基本形态;3、决定细胞的抗膨压(保护细胞免受渗透压变化的破坏)4、决定对溶菌酶的敏感性;5、决定了对青霉素的抗性;6、为鞭毛运动提供支点;7、决定细胞的抗原性;8、决定细菌的毒性(致病性),革兰氏染色步骤及原理:,第一步:结晶紫使菌体着上紫色第二步:碘和结晶紫形成脂溶性大分子复合物,分子大,能被细胞壁阻留在细胞内。第三步:酒精脱色,细胞壁成分和构造不同,出现不同的反应。第四步:沙黄复染,增加脱色菌与背景的反差并区别于未脱色菌。,溶菌酶对细胞壁的作用,可切断NAM和NAG之间
14、的-1,4糖苷键,引起细菌裂解 对G菌,在EDTA存在下,受溶菌酶作用。溶菌酶处理后的菌细胞应保存在弱高渗()蔗糖液中。,在EDTA存在下,对G菌受溶菌酶作用的原因:G菌含有较多的LPS,LPS具有阻拦溶菌酶、抗生素、去污剂合某些染料等较大分子进入细胞。要维持LPS结构的稳定性,必须有足够的Ca2存在。如果用EDTA等螯合剂驱除Ca2合降低离子键强度,可使LPS解体,这时,内层的肽聚糖分子就会暴露出来,因而容易被溶菌酶水解。,青霉素对细菌细胞壁的作用,Penicillium与转肽酶结合,而使该酶失活,抑制了侧链末端的丙氨酸与五肽桥的连接,破坏了细菌细胞壁的完整性,因此,Penicillium仅
15、对正在生长着的细菌,且主要是对G+菌有效。,(6)周质空间(periplasmic space),又称壁膜空间。指位于细胞壁与细胞膜之间的狭窄间隙,革兰氏阳性细菌与阴性细菌均有。内中含有多种蛋白质,例如蛋白酶、核酸酶等各种解聚酶,运送某些物质进入细胞的结合蛋白,以及受体蛋白等。,Representative periplasmic proteins in E.coli.Binding proteins For amino acids(e.g.histadine,arginine)For sugars(e.g.glucose,maltose)For vitamins(e.g.thiamine,v
16、itamin B12)For ions(e.g.phosphate,sulfate)Biosynthetic enzymes For murein assembly(e.g.transglycosylases,carboxypeptidases,transpeptidases)Degradative enzymes phosphatases proteases Detoxifying enzymes Beta-lactamases(e.g.penicillinase)Aminoglycoside-phosphorylating enzymes,可通过渗透休克法(osmotic shock)或称
17、“冷休克”的方法释放。此法是根据突然改变渗透压并使细胞发生物理性裂解的原理。其主要步骤:将细菌放在用Tris缓冲液配制、含EDTA的20%蔗糖溶液中保温,使其发生质壁分离,接着快速地用4的0.005mol/L的MgCl2溶液稀释并降温,使细胞外膜突然破裂并释放周质蛋白。经离心即可从上清液中提取周质蛋白。,周质蛋白的获得,(7)细胞壁缺损型细菌,L型细菌(L-form of bacteria):细胞壁受损后仍能生长和分裂的细菌。专指那些实验室或宿主体内通过自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺损菌株。革兰氏阳性菌细胞壁缺失后,原生质仅被一层细胞膜包住原生质体(protoplast)。革兰氏阴性菌肽
18、聚糖层受损后尚有外膜保护原生质球(spheroplast)。长期进化过程中形成、适应自然环境的无CW的原核生物支原体,因含有独特的甾醇而具有一定的机械强度。,细菌L型呈高度多形性,大小不一。着色不匀,无论其原为革兰阳性或阴性菌,形成L型大多染成革兰阴性。,细菌L型的形态和染色性,蜡样芽胞杆菌L型的镜下形态(多形性),细菌L型生长缓慢,营养要求高,对渗透压敏感,普通营养基上不能生长,培养时必须用高渗的含血清的培养基。细菌L型在高渗的含血清的培养基上生长后形成三种类型的菌落。,细菌L型的培养特性和菌落形态,原生质体的特性与应用,革兰氏阳性菌最容易形成原生质体,这种原生质体除了对相应的噬菌体缺乏敏感
19、性、不能进行正常的鞭毛运动和细胞不能分裂外,仍保留正常细胞所具有的其它正常功能。不同菌种或菌株的原生质体易发生细胞融合,因而可用于杂交育种;另外,原生质体比正常细胞更易导入外源性遗传物质,因而有利于遗传学基本原理的研究。,(二)细胞膜(cytoplastic membrane),1972年Singer和Nicolson提出的细胞膜液态镶嵌模型,细胞膜的结构与化学组成,细胞膜液态镶嵌模型,Fluid mosaic model of a biological membrane.In aqueous environments membrane phospholipids arrange themse
20、lves in such a way that they spontaneously form a fluid bilayer.Membrane proteins,which may be structural or functional,may be permanently or transiently associated with one side or the other of the membrane,or even be permanently built into the bilayer,while other proteins span the bilayer and may
21、form transport channels through the membrane.,细胞膜的功能:,a)控制细胞内外物质(营养物质和代谢废 物)的运送、交换;b)维持细胞内正常渗透压的渗透屏障作用;c)合成细胞壁各种组分(LPS、肽聚糖、磷壁 酸)和荚膜物质等大分子的场所;d)参与能量代谢,在细菌中,电子传递链和ATP 合成酶均位于细胞膜;e)提供鞭毛的着生点并提供鞭毛运动所需能量。,Functions of the procaryotic plasma membrane1.Osmotic or permeability barrier 2.Location of transport
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