《糖化蛋白检测》PPT课件.ppt

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1、糖化蛋白的检测,Company Logo,糖化蛋白的定义,糖化蛋白：血液中的葡萄糖可以将糖基连接到氨基酸的残基上形成的物质，称糖化蛋白,葡萄糖 糖基,+,氨基酸 残基,葡萄糖 糖基 残基 氨基酸,注：1.反应中的蛋白质有很多种，如血红蛋白、清蛋白、晶状体蛋白及胶原蛋白等2.反应是一个缓慢、不可逆的非酶促反应3.该反应糖化蛋白的浓度主要用于评估血糖的控制效果，并不用于糖尿病的诊断,Company Logo,糖化蛋白分类,糖化血红蛋白,果糖胺,晚期糖基化终末产物,糖化血红蛋白,一.糖化血红蛋白的简介1.定义：糖化血红蛋白为血红蛋白两条链N端的颉氨酸与葡萄糖化合而成。2.主要来源：成人血红蛋白通常有

2、HbA(97%)、HbA2(2.5%)、HbF(0.5%)HbA的糖基化分类：,糖化HbA,%,HbA,两条链,两条链,+1,6 两磷酸果糖,+6 磷酸果糖,+丙酮酸,+葡萄糖,HbA1a1,HbA1a2,HbA1b,HbA1c,HbA0,不能与普通血红蛋白区分,在HbA1中主要的成分是HbA1c，约占80%,HbA1,6,3.糖化血红蛋白的影响因素：主要与血红蛋白和红细胞寿命时段内血糖平均 度有关 红细胞的寿命为120天，其半寿期为35天，测定的糖化血红蛋白，反应68周平均血糖降低：溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性持续性 低血糖症等。增高：可以了解糖尿病人在23个月的血糖控制情况不佳。此外

3、，用含葡萄糖的透析液作血透的慢性肾衰病人，地中海贫血和白血病病人亦增高,糖化血红蛋白的检测,二.糖化血红蛋白的检测 1.标本要求 采集静脉血，用EDTA、草酸盐和氟化物抗凝 肝素抗凝标本需要在2天内完成测定，且不适 用于某些方法的检测，故不推荐使用。全血标本可于4摄氏度储存一周，70摄氏度 可以保存18周以上，一般不推荐 20摄氏度 保存 标本要求不能溶血和脂血,糖化血红蛋白,2.检测方法：糖化血红蛋白检测方法很多，常用的有微柱法离子交换层析、亲和层析、高压液相、免疫凝集、离子捕获法、电泳法等。准确率最好的是高效液相层析法(HPLC)（1）阳离子交换色谱法 原理：糖化导致血红蛋白分子表面阳离子

4、丢失 在弱的阳离子交换剂中，例如Biorex70，同时伴有增加的离子浓度和（或）pH下降，糖化血红蛋白在非糖化血红蛋白前先洗脱。,糖化血红蛋白,（2）、电泳法 原理：相比于非糖化血红蛋白，因糖化而变化的总电荷和糖化血红蛋白的等电点变化是琼脂糖凝胶或者pH梯度5.06.5的凝胶等电聚焦电泳分离的基础。（3）、亲和层析法 原理：硼酸结合顺式-羟基。商品化的m-氨基苯硼酸琼脂糖共价结合的亲和柱已可用于微柱分析检测。将血样本中的血红蛋白加到层析柱后，所有的糖化血红蛋白与硼酸结合而非糖化血红蛋白通过层析柱可被测量。在加入高浓度也包含顺式-羟基的多羟基复合物，例如山梨醇后，糖化血红蛋白与硼酸的结合被替换而

5、从柱子上洗脱下来。,糖化血红蛋白控制标准,3.控制标准 糖化血红蛋白能够反映过去23个月血糖控制的平均水平，它不受偶尔一次血糖升高或降低的影响，因此对糖化血红蛋白进行测定，可以比较全面地了解过去一段时间的血糖控制水平 世界权威机构对于糖化血红蛋白有着明确的控制指标：ADA（美国糖尿病学会）建议糖化血红蛋白控制在小于7 IDF（国际糖尿病联盟）建议糖化血红蛋白控制标准为小于6.5。目前我国将糖尿病患者糖化血红蛋白的控制标准定为6.5以下。,糖化血红蛋白与血糖的控制情况,4%6%：血糖控制正常。6%7%：血糖控制比较理想。7%8%：血糖控制一般。8%9%：控制不理想，需加强血糖控制，多注意饮食结构

6、及运动，并在医生指导下调整治疗方案。9%：血糖控制很差，是慢性并发症发生发展的危险因素，可能引发糖尿病性肾病、动脉硬化、白内障等并发症，并有可能出现酮症酸中毒等急性合并症。,4.糖化血红蛋白测定的临床意义：1、是糖尿病患者血糖总体控制情况的指标 2有助于糖尿病慢性并发症的认识 3指导对血糖的调整 4对判断糖尿病的不同阶段有一定的意义 5区别应激性血糖增高和妊娠糖尿病(GDM)中的检测意义,果糖胺,一、果糖胺1.定义：果糖胺是血清葡萄糖与血清蛋白分子末端的氨基发生非酶促糖化反应，形成高分子的酮胺结构。2.主要来源：葡萄糖与其他蛋白（清蛋白、膜蛋白和晶状体）结合形成酮胺，而清蛋白是血清蛋白质中含量

7、最多的组分，所以测定果糖胺主要是测定糖化清蛋白。3.清蛋白的半寿期约20天，测定果糖胺只能反映23周血糖的情况,果糖胺,二、果糖胺的测定1.标本要求不溶血的血清标本，也可用肝素抗凝血浆。标本在28可保存一周，不推荐冰冻保存测定标本。2.测定方法果糖胺的测定方法有光度法、HPLC、以及单克隆抗体等常用的是：,果糖胺,果糖胺 eneaminol,碱性缓冲液,+,硝基四氮唑蓝,甲赞,生成的甲赞在530nm处的吸光度变化值与果糖胺的浓度成正比此方法的优点：快速、经济，已用于自动化分析，不受红细胞 寿命和血红蛋白异体的影响 缺点：受血浆总蛋白浓度的影响，白蛋白浓度1g/d,测量结果不可靠，同时受中度 溶

8、血，胆红素和维生素c干扰,果糖胺,3.参考范围 健康成人：205285umol/L 糖化清蛋白：191265umol/L4.测量的临床意义果糖胺(FRUCT)的测定反映糖化血清蛋白水平可了解患者过去12周内平均血糖的水平。增高则表明为糖尿病。,晚期糖基化终末产物,一、AGE简介1.定义葡萄糖与长寿蛋白（如胶原）连接形成的产物2.形成过程 葡萄糖与长寿蛋白（如胶原）连接，早期形成可逆的Schiff碱，后者经结构重排形成较稳定的酮胺化合物（Amadori产物），再经过脱水、氧化和缩合等反应，最后形成稳定的、不可逆的AGEs。,晚期糖基化终末产物,3.测定方法（1）放射免疫分析法 它检测AGEs的灵

9、敏度高，但对抗AGEs抗体纯度的要求很严格；（2）放射受体分析法 本方法的特异性、精确性和重复性均很好，但检测时须用较大量放射性同位素，易造成环境污染，故在普通实验室难以应用（3）荧光光谱法 AGEs在Ex370/Em440nm有特征性吸收光谱，荧光光谱分析是测定AGEs较常用的方法,19,4.AGE对机体的影响 糖基化反应在正常机体即缓慢进行，AGEs水平随年龄增长而缓慢增加。但在老化过程，特别是在糖尿病持续高血糖情况下，这一反应的速度显著加快，AGEs形成量明显增多。现已证实，AGEs在动脉粥样硬化、糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变、早老性痴呆（Alzheimer氏病）和老化性病变的发生中起重要作用5.临床意义作为DM的长期控制指标,Thank You!,