《生化实验2电泳》PPT课件.ppt
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1、实验3血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳(Cellulose acetate membrane electrophoresis of serum proteins),遵义医学院生物化学教研室 朱 欣 婷,实验思路,蛋白质的理化性质有哪些?,蛋白质的分离方法有哪些?,本次实验利用了哪个性质?,生物化学教研室 朱欣婷,1.掌握电泳法分离蛋白质的原理;2.掌握醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白的原理和方法;3.进一步熟悉721型分光光度计的使用,生物化学教研室 朱欣婷,分离蛋白质的方法,分离方法,沉淀法,层析法,电学法,生物化学教研室 朱欣婷,(一)电 泳 技 术(electrophoresis),电泳:带电粒子
2、在电场的作用下向着与其电性 相反的电极移动的现象。,电泳技术:指利用电泳现象对混合物进行分离分 析的技术。,生物化学教研室 朱欣婷,一、电泳的原理,以蛋白质为例:,H,OH,H,OH,pHpI pH=pI pHpI,生物化学教研室 朱欣婷,电泳速度:带电粒子在电场中运动时,单位电场强度内粒子运动的速度,以u表示,即,V粒子运动的速度 X电场强度Q粒子所带电荷 r粒子的半径介质的粘度,生物化学教研室 朱欣婷,二、影响电泳速度的因素,1.样品本身:,分子带电量:,分子形状:形状越小,与支持物介质摩擦越小,u越大。球形分子 纤维状分子,分子大小:,生物化学教研室 朱欣婷,Q越多,u越大;,分子小,r
3、越小,u越大;,2.缓冲溶液:,pH值:(pH-pI)越大,Q越多,u越大,离子强度(I):I越大,电动电势越小,u越小;I越小,电动电势越大,u越大,但样品易扩散。离子强度如果过低,缓冲液的缓冲容量小,不易维持pH恒定,选择离子强度时要两者兼顾,一般离子强度的选择范围在0.020.2之间。,生物化学教研室 朱欣婷,电场强度:电泳支持物上每厘米的电位降,也称电势梯度。,3.电场强度(X),X越大,u越快。支持物越短,X越大,u越快。,电场强度越大或支持物越短,电流将随之增加,产热也增加,影响分离效果。在进行高压电泳的时候必须用冷却装置,否则可引起蛋白质等样品发生热变性而无法分离。,生物化学教研
4、室 朱欣婷,4.支持介质:,目前常用的电泳支持物:纤维薄膜(玻璃纤维薄膜,醋酸纤维薄膜)凝胶(琼脂糖凝胶,聚丙烯酰胺凝胶),生物化学教研室 朱欣婷,负极,正极,表面带负电荷,带正电荷的水层携带粒子向负极移动,如果样品原本是移向负极的,则泳动的速度加快;如果样品原本是移向正极的,则泳动的速度减慢。,电渗作用:,电渗:在电场作用下液体对固体支持物相对移动的现象。,生物化学教研室 朱欣婷,以纸电泳为例:,(一)按支持物的物理性状不同,区带电泳可分为:1滤纸及其它纤维(如玻璃纤维、醋酸纤维、聚氯乙烯纤 维薄膜)电泳2粉末电泳:如纤维素粉、淀粉电泳;3凝胶电泳:如琼脂、琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳;4丝线
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