《分子生物工程》PPT课件.ppt
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1、复 习,单底物酶促反应动力学,米氏方程 efree S x efree P根据质量作用定律,P的生成速度可表示为,酶催化反应动力学,稳态法推导动力学方程:三点假设:(1)CSCE,中间复合物ES的形成不会降低CS。(2)不考虑这个可逆反应。(3)CSCE中间复合物ES一经分解,产生的游离酶立即与底物结合,使中间复合物ES浓度保持衡定,即。,酶催化反应动力学,解之,得,令,则,根据以上假设,可建立如下方程组,酶催化反应动力学,对米氏方程的讨论:当CSKm时,属零级反应。当CSKm时,。Km在数量上等于反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度。,酶催化反应动力学,竞争性抑制反应机理,式中:,I 抑
2、制剂,EI 非活性复合物,酶催化反应动力学,采用稳态法推导动力学方程:,酶催化反应动力学,解之,得,式中:,或,酶催化反应动力学,例题:Scott等提出乳糖在乳糖酶存在时水解机理如下:式中S、P、Q分别为乳糖、半乳糖和葡萄糖。(1)用稳态法推导半乳糖生成的速率方程;(2)判断半乳糖对此反应是竞争性还是非竞争性抑制。,酶催化反应动力学,固定化酶的制备方法,第一类是载体结合法:将酶结合于水不溶性载体的方法。根据结合形式不同,又可分为物理吸附法、离子结合法和共价结合法等。,优点:酶活性中心不易被破坏,酶结构变化少。,缺点:酶与载体相互作用力弱,酶易脱落的缺点。,物理吸附法:酶被物理吸附于不溶性载体。
3、载体有活性炭、多孔玻璃、氧化铝、硅胶、淀粉、合成树脂等。,固定化生物催化剂反应过程动力学,固定化酶的制备方法可分为(P92,图 3-1):载体结合法、交联法、包埋法。,交联法,交联法:它是用双功能试剂使酶与酶之间交联的固定化方法。此法与共价结合法一样也是利用共价键固定酶的,不同的是它不使用载体。,交联剂有:戊二醛(形成希夫碱),异氰酸脂(形成肽键),双重氮联苯胺(发生重氮偶合反应),此法反应条件比较激烈,酶活回收率低。,固定化生物催化剂反应过程动力学,包埋法,包埋法:,网格型:将酶包埋在高分子凝胶细微网格中的称为网格型。,微囊型:将酶包埋在高分子半透膜中。,优点:一般很少改变酶的高级结构,酶活
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