《兰花组织培养》PPT课件.ppt

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1、观赏植物组织培养之兰花,一、兰花组织培养常用于：1、无性系快速繁殖；2、茎尖培养脱毒；3、培育新品种；4、种质资源的保存；5、次生代谢产物的生产。,二、常见组织培养的兰花种类,三、兰花工业,兰科（Orchidaceae）是单子叶植物中最大的一个科，约有450个属20000余种，在世界各地均有分布，特别是热带、亚热带的一些国家和地区。兰花花色鲜艳，形态各异，珍奇名贵，品位幽雅，价格昂贵，备受人们的喜爱。传统的兰花栽培方法主要靠分株繁殖，繁殖速度慢。,贮藏和运输困难，易带病毒，严重阻碍了在世界范围内的流通。用兰花的种子也可以进行繁殖，但发芽率及低，仅5%左右，很难满足生产需要。组织培养用于兰花的快

2、繁已取得了快速进展。从20世界60年代开始用茎尖培养方法繁殖兰花，到70年代就基本解决了兰属组织培养快速繁殖的关键技术，并很快发展成为从20世界60年代开始用茎尖培养方法繁殖兰花，到70年代就基本解决了兰属组织培养快速繁殖的关键技术，并很快发展成为现代化兰花工业。目前已有进70个属数百种兰花可用组织培养方法进行繁殖，兰花生产工厂也分布在世界各地。,兰花组培的外植体,种子,茎尖,茎段,叶片,根,兰花组培的途径,原球茎途径,种子萌发时先是胚的膨大,种皮破裂,40天时肉眼可见浅黄色的原胚呈球状,称为原球茎.。兰花茎尖等外植体在组培中也可诱导产生原球茎，并且原球茎还可以切割成若干小块，分别形成新的若干

3、原球茎丛。,兰花的组织培养过程,初代培养无菌处理,继代培养（增殖培养）,壮苗培养,生根培养,炼苗（移栽驯化）,组培中可能出现的问题,污染,变异,玻璃化,褐化,黄化,蝴蝶兰组织培养,蝴蝶兰花梗生长点组织培养,使用花梗生长点来诱发出新芽体，待新芽体诱发出后，将其切下，移植至含有激素等药物的培养基瓶中，由于移植后的芽体受到药物的刺激，造成新的芽体从旧芽体被大量的诱发出来，也会有从被诱发出来的新芽体再配诱发芽体出来，当这些芽体数量多到需要移植时，就需要进行 母瓶移植至子瓶的操作，由于这些芽体都是相连的，移植时需以刀子将相连的芽体一个一个切分开来种植，所以，也有人将其称为切片苗。一般来说，以花梗生长点来

4、进行组织培养，分生数量约在20棵以上，称之为花梗苗，若是以花梗生长点来进行组织培养，分生数量在20棵以上，就称为分生苗。而花梗苗与分生苗这两者它们都是属于无性繁殖。在理论上，遗传的特性与原植株的特性是一样的，但是却因为培养基的比例调配或是药物的刺激，常常会发生整批分生的植株 在形态上与原植株不同的情况。花梗生长点组织培养具体操作：,1）将蝴蝶兰的花梗由植株上剪下，如果已开花的部份可以剪下?弃，留下未开花的节，再将花梗裁剪适当长度，再将包覆在梗节生长点外的苞片，小心的剥除，勿伤及生长点，置入超音波震荡器中，以稀释的漂白水溶液消毒。如无震荡器时，可置入装有稀释过的漂白水溶液的试管中，手动的大力摇晃

5、试管，也可达到消毒的目的。,2）将震荡器或是试管中的花梗取出，置入无菌水中，摇晃瓶身，可重覆此一动作23次，但需取出花梗，置入?有无菌水的新瓶中，藉此洗净漂白水，洗净后，以镊子取出花梗，以酒精浓度75%的酒精棉花擦拭花梗，以梗芽生长点向下，酒精棉花擦拭由上而下单一方向擦拭，切勿以来回的方式擦拭梗芽生长点。,（3）将花梗两端切除芽尖端切90度另一端则呈45度斜切,将切面为45度端插入培养基中,塞子消毒后塞住瓶口,瓶口处再以酒精灯消毒，覆盖上铝箔纸避免感染,成功长出新株体,消毒不彻底瓶内发霉,铁皮石斛的组织培养,铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物。生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿

6、润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。一般均能耐5的低温。石斛可分为黄草、金钗、马鞭等数十种，铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。,铁皮石斛的组织培养技术路线,外植体,丛生芽,培养基,生根发育,完整植株,蔗糖：30g琼脂：6.8g,初代培养基的设计,MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖3%+琼脂6.8%【pH值5.25.6】,MS母液：I-V50ml,5ml,5ml,5ml 5ml。激素母液：BA10ml,NAA5ml,蔗糖：30g琼脂：6.8g土豆汁150ml,继代培养基的设计,MS+BA0.5ml+NAA0.2+土豆汁10%20%【pH值5.25.6】,取MS母液：IV

7、50ml,5ml,5ml,5ml,5ml;激素母液：BA5ml,NAA2ml,NAA,BA,IAA,增殖培养将建立的无菌系中的小苗转入增殖培养基中进行增殖培养。增殖培养基以MS为基本培养基，添加不同浓度的生长调节剂BA、NAA、IAA、IBA及土豆汁和香蕉汁等附加物。,土豆汁,香蕉汁,IBA,蔗糖：30g琼脂：6.8g香蕉汁：200ml活性炭：20g,生根培养基的设计,1/2MS+NAA0.20.5mg/L+香蕉汁20%+活性炭2.0%【pH值5.25.6】,取MS母液：IV25ml,5ml,5ml,5ml,5ml;激素母液：NAA25ml,Your Text here,生根培养将丛生芽无菌操

8、作切下单株放在生根培养基中于适宜条件下培养，约12周后即生根，以长成完整植株。,优选1年生铁皮石斛植株上生长健壮的茎段,外植体的选择,接种小芽苗多易于在苗基部形成丛生芽。,苗的高度为12cm时,丛生芽增殖倍数最高数。,生长发育健壮苗优先,1,2,3,外植体的处理,Text 1,Text 2,Text 3,摘去叶片和膜质叶鞘，剪成约2cm长带节的小段。,用洗洁剂清洗后置流水下冲2030 min。,在超净工作台上用75%的酒精消30s0.1%HgCl2灭菌5min后，用无菌水冲洗56次，放入垫有干无菌滤纸的培养皿中，以吸去多余水分，茎段两端各切0.20.3cm。,接种实验,一、接种准备工作1、超净工作台开紫外灯照射10-20min送风2、外植体消毒（继代培养采用已建立的无菌培养物作为材料）3、工具消毒二、接种操作1、用消毒工具、器皿，切取铁皮石斛幼茎段2cm2、接种环烧红，沾一下培养基3、镊取茎段插于培养基中4、封口、标记,各时期的培养条件,茎段的诱导时间在511天之间培养温度2325，光照强度2000lx，光照时间10h/d,