T细胞免疫功能检测平台的建立和应用.ppt

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1、T细胞免疫功能检测平台的建立与临床应用,北京协和医院感染内科,T细胞免疫功能与感染,T细胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 T细胞免疫的抗感染作用T细胞免疫功能的测定 T细胞亚群 T细胞功能T细胞免疫功能测定的临床意义,机体的免疫系统,非特异免疫 皮肤粘膜，吞噬细胞，NK细胞，补体，正常菌群特异性免疫 细胞免疫：CD4+细胞，CD8+细胞 体液免疫：B细胞,机体的免疫系统,CD4+细胞的免疫中枢指挥功能,CD4+细胞的免疫中枢指挥功能,CD4+细胞的产生和分群,纯真,纯真和记忆/效应4细胞亚群的产生,记忆,效应,凋亡,胸腺,效应,效应,效应,纯真 CD4和记忆CD4细胞,细胞免疫功能的抗

2、感染作用,感染发生的两个基本要素：病原体和机体免疫功能免疫功能对疾病转归的影响：对免疫功能正常的人不起致病作用的病原体，在免疫功能低下的人身上可发生致命性的感染；免疫功能正常的人发生某种感染后可很快恢复，而在免疫功能紊乱的人则成为慢性状态；对同样的病原体所导致的感染，给予同样的抗感染治疗，转归完全不一样,细胞免疫功能的抗感染作用,为什么？乙肝病毒感染：有人为乙肝病毒携带者,也有人成为慢性乙肝病人？HPV感染：多数人表现为无症状的HPV潜伏感染者，少数人表现为复发性HPV CMV感染:90%的正常人隐性感染终生带病毒，但免疫功能低下时可致死？,HIV感染的自然史,CD4细胞(cell/mm3）8

3、00400,急性感染期,无症状期,艾滋病前期和艾滋病期,CD4,病毒载量,抗HIV 的CTL,HIV抗体,HIV感染者的三种临床转归,Virus,CD4,CD8 aHIV,CD4,CD4,CD8,CD8 aHIV,Virus,Virus,Standard 8 y,Fast:4-5 y:(2%)(CCR genes,HLA B35,Slow:10 y:(2%),CCR genes,HLA B57,免疫功能与机会性感染相关性,years,200,CD4 counts,白念菌,Zona,卡波济肉瘤,淋巴瘤,PCP,弓型体,CMV,MAIC,4,8,艾滋病期,HIV load,2,10,细胞免疫功能的

4、抗感染作用不重视机体免疫功能的后果,化疗药物的滥用耐药菌的产生二重感染的发生进一步损害免疫功能,细胞免疫功能与感染,细胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 细胞免疫的抗感染作用T细胞免疫功能的测定 T细胞亚群 T细胞功能细胞免疫功能测定的临床意义,细胞免疫功能与感染免疫功能测定方法,体内：PPD试验？体外：体液免疫：B细胞数量，免疫球蛋白定量 细胞免疫：T细胞亚群的数量和功能（流式细胞仪，ELISA，ELISPOT）,T细胞免疫功能的测定,A cytometer looks like an easy-to-use machine,but look inside:Its a complex

5、laser machine!,PMT,PMT,PMT,PMT 4,Dichroic,Filters,Bandpass,Filters,Flow Cytometry Principle,Laser,1,2,3,4,Flow cell,T细胞免疫功能的测定,淋巴细胞免疫表型检测指标,不同年龄组正常细胞亚群的建立,细胞免疫功能测定方法T细胞功能的测定,T细胞增殖功能 同位素H3掺入试验 BrdU，Ki67 CFSUT细胞毒试验（CTL）和细胞介素测定 同位素Cr51 四联体 ELISA 流式细胞仪 ELISPOT,ELISPOT 方法,ELISPOT方法是目前国际上广泛应用的较新的体外测定特异性抗体

6、分泌细胞和细胞因子分泌细胞的方法。该方法可在单细胞水平检测淋巴细胞对特异性抗原的反应能力及计数特异性抗原刺激下细胞因子分泌细胞的频数。优点：敏感-能检测产生细胞因子频率极低的细胞，灵敏度高达 1/1000000。特异 直观-可直接在显微镜下人工计数斑点或通过ELISPOT分 析系统对斑点进行计数，1 个斑点代表 1 个特异性 抗体分泌细胞或细胞因子分泌细胞。,ELISPOT 原理,-PBMC,-刺激原,孵育16 18h或4048h,ELISpot 结果,阴性对照,阳性对照,样本孔,样本孔,图中的每个斑点代表一个能分泌IFN-的抗原特异性CD4+T细胞或CTL,T细胞免疫功能与感染,T细胞免疫功

7、能的抗感染作用 正常人的免疫功能 T细胞免疫的抗感染作用T细胞免疫功能的测定 T细胞亚群 T细胞功能T细胞免疫功能测定的临床意义,T细胞免疫功能与感染细胞免疫功能测定的临床意义,HIV感染和艾滋病其它各种感染性疾病-病毒感染：SARS,HBV，HCV，EBV，CMV，HFRS,HFMD-结核病，真菌感染。肿瘤和化疗病人的免疫功能监测器官移植病人的免疫监测自身免疫病和过敏性疾病,细胞免疫功能与感染细胞免疫功能测定的临床意义,中国HIV/AIDS的免疫病理改变和免疫重建,艾滋病的主要免疫病理改变,CD4+T 细胞数的减少；CD4+T 功能的减低;异常的细胞免疫激活。,HIV感染的自然史,CD4细胞

8、(cell/mm3）800400,急性感染期,无症状期,艾滋病前期和艾滋病期,CD4,病毒载量,抗HIV 的CTL,HIV抗体,HIV/AIDS 患者淋巴细胞亚群与正常对照比较,（计数：个/mm3，比例：%，数值以中位数（上四分位数，下四分位数）表示）*与正常对照组相比存在显著差异P0.001。与正常对照组相比存在显著差异P=0.021。,早中晚3组患者淋巴细胞亚群的比较,组与、组相比P0.001,组与组相比P0.001。*组与、两组均存在显著差异P0.001,、组两组无显著差异。（计数：个/mm3，比例：%，数值以中位数（上四分位数，下四分位数）表示）,HIV/AIDS的免疫病理改变选择性纯

9、真T4细胞的减少,正常人,HIV感染者,AIDS病人,HIV/AIDS的免疫病理改变T4细胞辅刺激信号受体的表达减少,正常人,HIV感染者,AIDS病人,CD28T细胞辅刺激信号受体,HIV/AIDS的免疫病理改变异常的T细胞免疫激活,AIDS病人,HIV感染者,正常人,中国艾滋病病人的免疫改变特点,艾滋病病人有选择性的纯真 T4细胞减少;CD4+CD28+是细胞免疫功能的标记指标;CD8+CD38+亚群是疾病进展和病毒复制的预测指标。.HIV感染当CD4+T细胞计数低于200个/mm3时:CD28表达下降较感染早中期更为严重纯真CD4+T细胞减少的速率较感染早中期明显加快 异常的免疫激活更为严重,T细胞免疫功能检测在SARS诊治中的应用,T细胞检测对SARS诊断的意义,SARS病人CD4+细胞(98%)和CD8+(80%)细胞同时减少；发生在发病一周内（有些发生在胸片改变之前）T细胞检测有助于SARS的早期诊断,细胞免疫功能与感染细胞免疫功能测定的临床意义,其它病毒感染结核病真菌感染,T细胞免疫功能与感染细胞免疫功能测定的临床意义,HIV感染和艾滋病其它感染性疾病-病毒感染：HBV，HCV，EBV，CMV，HFMD,HFRS-结核病，真菌感染。肿瘤和化疗病人的免疫功能监测器官移植病人的免疫监测自身免疫病和过敏性疾病,Thanks,