pct检测原理和溯源性.ppt

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1、降钙素原的检测原理和溯源性,复兴医院检验科张岩2015年7月18日,主要内容,降钙素原PCT生物特性、发展历史降钙素原PCT检测原理降钙素原PCT的溯源性,PCT的生物学特点,血清降钙素(CT)的前肽物质分子量：14.5 kDa由116个氨基酸组成的糖蛋白质无激素活性,11号染色体上的单拷贝基因,转录,甲状腺滤泡细胞,降钙素原前体,内源多肽酶,降钙素原 PCT,降钙素,分解,细胞内特殊蛋白酶,正常情况下,在细菌感染/脓毒血症状态下，PCT在各个组织、器官大量形成并释放进入血液循环系统,PCT 降钙素原,PCT,正常情况下,主要局限于甲状腺和肺的神经内分泌细胞表达并裂解成降钙素,脓毒血症及促炎症

2、细胞因子可诱导全身各种组织多种类型细胞表达和释放PCT,PCT的生物学特点,快速：感染开始后3小时即可测得，6-12小时后达到峰值峰值最高可达1000 ng/ml半衰期:接近24 hrs几乎不受肾功能状态影响,正常情况下，是降钙素的前体健康人血液中浓度非常低，0.05ng/ml。当细菌感染时，PCT可生成并释放入血液循环,PCT发现历史,1983年,1993年,1994年,在葡萄球菌中毒性休克的低钙血症机制研究中发现PCT，首次将PCT与脓毒症和炎症状态联系起来,首次将PCT水平与细菌感染与指导抗生素使用联系,在健康受试者中注射内毒素，发现PCT的动力学特点,1993年，发表在Lancet的关

3、于PCT在儿童脓毒症及感染患者的首项前瞻性研究,79名疑似感染儿童：无感染：PCT0.1ng/ml重度感染：PCT 6-56 ng/ml无全身表现的局部感染和病毒感染：PCT 0.3-1.5 ng/ml重度感染者抗生素治疗后PCT水平下降,首次将PCT与细菌性感染及指导抗生素治疗联系起来,1994年：在健康受试者中注射内毒素，发现PCT的动力学特点,在一次内毒素刺激的人体试验中PCT的动力学变化,快速、高特异性的增长在脓毒症情况下，3-6小时即可检测到其水平的增长快速衰减 半衰期约20-24 小时，可以快速反映治疗效果,Dandona P,et al.J Clin Endocrinol Met

4、ab.1994;79(6):1605-8,主要内容,降钙素原PCT发展历史、生物特性降钙素原PCT的检测原理降钙素原 PCT的溯源性,ECL检测原理：电化学发光免疫检测技术ElectroChemiLuminescence(ECL),cobas e 601 立式型,结合Ruthenium,结合磁珠,转移至电极;标记后免疫复合物与游离组分分离,施加电压启动化学发光反应,信号检测,ECL检测原理免疫复合物的形成,第一抗体标记生物 素（与微磁珠结合）第二抗体标记Ruthenium（产生光信号）两种抗体皆能与靶抗原特异性结合,免疫复合物,抗体,抗原,生物素,Ruthenium,抗体,ECL检测原理生物素

5、链霉亲和素特异性亲和作用,磁珠,生物素,链霉亲和素,抗原,抗体,ECL检测原理磁珠-提高反应灵敏度,形成的免疫复合物转移至测量池开始ECL反应,生物素与链霉素特异性亲和作用反应体系中待测抗原可最大限度地与磁珠结合提高检测反应的灵敏度,ECL检测原理光电倍增管检测光信号,系统优势光信号产生迅速,ECL信号强度(000 counts),0,0.5,1.0,1.5,时间(秒),电压作为反应的启动开关能有效地保证发光反应稳定而可控地进行,15,0,45,60,30,75,0,.4,.8,1.2,1.6,2.0,电压(V),罗氏cobas e 601开展项目,心肌标志物：超敏TNT、肌红蛋白、NT-pr

6、o BNP、肌酸激酶同工酶脓毒血症：IL-6、PCT肿瘤标志物：肿瘤相关抗原724、非小细胞肺癌相关抗原 211骨标志：甲状旁腺素、骨钙素、25-羟基维生素D3、总 I 型胶原氨基端延长肽、胶原特殊序列甲状腺功能：促甲状腺受体抗体激素：促肾上腺皮质激素、皮质醇、人生长激素、雌二醇、促卵泡成熟激素、黄体生成激素、孕酮、催乳素,主要内容,状降钙素原PCT发展历史、生物特性降钙素原PCT的检测原理降钙素原PCT的溯源性,解决溯源性是临床检验结果准确性的关键,ISO/IEC17025的质量体系中就提出对检验结果的三点要求：,ISO/IEC17025:2005-5-15检测和校准实验室能力的通用要求,溯

7、源链上端,制造商自行建立“自用”测量程序和标准品，为产品校准品定值,PCT的溯源性19,特有的一级校准品（参考物质）,特有的溯源校准传递做法,BRAHMS建立的PCT溯源链上端：一级校准品PTN47和新的第二代校准品PCT115,BRAHMS PCT的量值传递过程,BRAHMS PCT的校准方法是ISO17511导则在体外诊断产品实现溯源性的具体体现，确保患者样品检测结果在使用BRAHMS PCT产品系列中得到一致性,19.冯仁丰.降钙素原的标准化.临床实验室,第8卷，2014年第10期，46-47,PCT的溯源性,不同产品之间的“可追溯性”,ISO17511指出：在相同的计量水平下，测量相同

8、量的两个测量程序的测量结果具相关性，但这样的水平相关性不提供计量可追溯性 相关系数尽管接近1，比对间还存在着“显著差异”，不能说明结果一致，在y=ax+b中会存在“斜率小于1，显著截距”等情况。不同品牌产品应该通过大量临床试验，建立自身的限值,与BRAHMS PCT比对的相关性并不代表具有溯源性,BRAHMS PCTTM的双抗分别识别PCT肽链的两个部位双位点结合相比单位点结合大大降低了假阳性率，检测结果更精准,BRAHMS PCT采用相同的Cut off值,中国现有的BRAHMS PCT,梅里埃PCT20,PCT-Q21,罗氏PCT22,PCT-LIA23,Elecsys BRAHMS PC

9、T产品性能参数,所需样本量少宽广的检测范围检测时间短极佳的批内和批间的精密度适用于所有罗氏免疫分析平台，且结果一致性高,Elecsys BRAHMS PCT 健康人的Cut-Off值=0.05 ng/mL,95%percentile 0.046 ng/ml,n=492,目前所有的PCT均溯源至BRAHMS PCT LIA，均采用一致的cut-off值,Elecsys BRAHMS PCT Cut-off值,PCT2 ng/mL提示：重度脓毒症的可能性较高,Elecsys BRAHMS PCT cobas e 601 vs LIA&Kryptor(BRAHMS),方法学比较显示Elecsys BRAHMS PCT与两种方法都具有很高的一致性,PCT鉴别细菌性感染的敏感度和特异性均高于传统标记物（如反应蛋白、白细胞，红细胞沉降率等）PCT具有早期、及时、快速、准确的特性，适用于脓毒症/严重细菌感染的实验室标志物。BRAHMS PCT的独特的抗体与制备技术，具有可溯源性，且多种检测平台结果具有一致性。BRAHMS PCT的可靠性使得国内外权威指南均推荐多种临床应用。,内容小结,