ANCA检测与应用.ppt

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1、抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）的检测与应用李云红,血管炎,简介 病症特征 病理病因 病理分类 临床表现 治疗流程 饮食保健 注意事项,简介,血管炎是血管壁及血管周围有炎症细胞浸润，并伴有血管损伤，包括纤维素沉积、胶原纤维变性、内皮细胞及肌细胞坏死的炎症，又称脉管炎。致病因素直接作用于血管壁引起者为原发性血管炎，在血管炎症基础上产生一定的临床症状和体征者为血管炎疾病;由邻近组织炎症病变波及血管壁引起者为继发性血管炎，只是多种组织的病理改变之一，与血管炎疾病不同。,病症特征,1、肺部 2、肾：3、肝脏 4、心血管：5、神经系统：6、鼻咽部：7、皮肤：,病理病因,血清病药物变态反应及感染乙型肝炎病

2、毒中华巨细胞病毒单纯疱疹病毒成人T细胞白血病病毒,病理分类,变应性白细胞破碎性(坏死性)血管炎：结节性多动脉炎：血栓形成性血管炎：肉芽肿性血管炎淋巴细胞性血管炎：结节性血管炎血液成分异常性血管炎：,临床表现,1、主要表现有：多系统损害；活动性肾小球肾炎；缺血性或瘀血性症状和体征，特别见于年轻人；隆起性癜及其他结节性坏死性皮疹；多发性单神经炎及不明原因的发热。组织活检对本病有诊断意义，其他检查有血管造影检查、自身抗体检查等。,2、皮肤型变应性血管炎；红斑、结节、紫癜、风团、血疱、丘疹、坏死、溃疡、脓疱3、系统型变应性血管炎；多脏器受累 头痛、发热、乏力、关节及肌肉疼痛 粘膜:鼻衄、咯血、便血、肾

3、：蛋白尿、血尿 肠道；腹痛、脂肪痢、急性胆囊炎、胰腺炎、糖尿病 胸；胸腔积液 神经系统；脑血栓、瘫痪 心脏；心肌梗死、心包炎 眼部,治疗流程,去除病因，消除过敏原;治疗基础疾病 局限于皮肤的血管炎，常用抗组胺类药，如氯苯那敏苯茚胺，吲哚美辛(消炎痛)、布洛芬 全身性血管炎可用泼尼松，或加用环磷酰胺;抗血小松聚集剂可用阿司匹林，硝苯地平或硝酸异山梨醇(消心痛),饮食保健,1、丹参酒：2、赤豆煮米仁：3、黄豆冬瓜皮汤：4、赤豆桃仁莲藕汤：5、桑椹汤：,注意事项,1、一个鸡蛋每天最多一个 2、牛奶最多半斤 3、绿色蔬菜多吃 4、海带、紫菜、木耳多食 5、豆制品+粗粮多吃 6、精神要放松、不要每天都想

4、着自己的病患 7、要适当活动与人交流 8、绝对不能抽烟、喝酒、低盐饮食为好。,ANCA简介,抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）：ANCA是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原，与临床多种小血管炎疾病密切相关的自身抗体,是系统性血管炎的标志性抗体。除了系统性坏死性血管炎，ANCA也可见于慢性炎性肠病和自身免疫性肝炎。常采用间接免疫荧光法检测ANCA。,cANCA pANCA,主要的ANCA有三型：胞浆型（cytoplasmic,cANCA）和核周型（peripheral,pANCA），非典型ANCA（a ANCA）cANCA针对的靶抗原为蛋白酶3（proteinase 3.PR3）,为中性粒细胞嗜天

5、青颗粒的主要成分，能水解弹性蛋白酶、IV型胶原纤维等多种组织成分。pANCA针对的靶抗原为髓过氧化物酶（MPO），为中性粒细胞嗜天青颗粒的另一主要成分。pANCA的靶抗原还有：杀伤/膜通透性增高蛋白(BPI)、人类白细胞弹性蛋白酶（HLE）、乳铁蛋白（LF）、组织蛋白G（cathepsin G,CG）等。,PR3 和 MPO,PR3和抗MPO抗体在参与小血管炎的发病过程中起重要作用，它们可激活中性粒细胞导致脱颗粒反应，使大量的蛋白水解酶活化，作用于小血管壁，并在其他免疫炎性介质的协同作用下，造成血管炎症。,间接免疫荧光法测定ANCA,原理检测ANCA的经典方法为间接免疫荧光法，这是一种初筛试验

6、。抗原片是用葡萄糖自健康人血清中分离出嗜中性粒细胞，按每高倍镜视野10-20个细胞滴片制成，干燥后用甲醛或95%乙醇固定。依次向细胞片上滴加待测血清和荧光素标记抗人IgG抗体，再用荧光显微镜检查。,结果判定,胞浆型（cytoplasmic,cANCA）是在整个细胞质中均匀分布由粗到细的颗粒型荧光，在细胞核叶间的荧光着染加深而核本身不着染。核周型（peripheral,pANCA）是围绕在核周围出现平滑的丝带状荧光，细胞核为阴性。,临床意义,cANCA阳性主要见于韦格纳肉芽肿（WG）以及全身性血管炎，特异性97%,敏感性在初发非活动期患者为50%,活动期患者可达100%。pANCA多见于显微镜下

7、多血管炎、变态反应性肉芽肿性脉管炎、坏死性新月体型肾小球肾炎等。,线性免疫分析法检测ANCA,实验原理本试剂盒应用线性免疫分析法（LIA），将抗原印迹于硝化纤维膜上。包被抗原 特性 PR3 天然的 MPO 天然的 GBM 天然的封闭纤维膜阻止非特异反应区发生反应。检测时，膜条与稀释的病人血清共同孵育使血清中的抗体与膜条上的抗原结合。利用辣根过氧化物酶标记抗人IgG二抗检测此结合抗体。加入底物后，此结合抗体表现为可见的蓝色条带，终止反应后为棕色。将实验结果与试剂盒提供的LIA特异判读卡比较，可判断病人的自身抗体特性。,临床意义,1.蛋白酶3（proteinase 3.PR3）,为中性粒细胞嗜天青

8、颗粒的主要成分，是cANCA的主要靶抗原。PR3在WG肉芽肿患者阳性率为85%，。该抗体水平与疾病活动性密切相关。常用作判断疗效和疾病复发的评估指标。2.髓过氧化物酶（MPO）是pANCA的主要靶抗原，MPO的阳性率在坏死性新月体型肾小球肾炎为65%，变应性肉芽肿性脉管炎为60%，而在WG肉芽肿患者阳性率仅10%。此抗体水平也与病情活动性相关，可用于疗效及预后判断3.抗GBM抗体 抗GBM抗体（抗肾小球基底膜抗体）可在大约90%的Goodpasture（肺出血肾炎）综合症病人中查到。尽管抗Goodpasture综合症发病率低（0.5%的肾脏病人），但该病会快速发展，如果不予治疗死亡率达75-9

9、0%。早期诊断和及时准确的治疗大大降低了死亡率。,ANCA的临床应用,ANCA被认为是原发性小血管炎的特异性血清标志物。ANCA检测是原发性小血管炎患者的诊断、疗效观察、病情活动和复发的一项重要指标。许多研究已经证明，原发性小血管炎患者血清中ANCA的效价与疾病活动性相关，ANCA效价的增高或持续增高，提示病情恶化或缓解后再发。ANCA的效价升高往往出现在疾病复发之前，故对ANCA的动态监测对预测疾病复发具有重要意义。,ANCA的临床应用,最常见的疾病如韦格纳肉芽肿（WG）、原发性局灶节段坏死性肾小球肾炎（NCGN）、结节性多动脉炎（PAN）等均可检出ANCA。WG的cANCA阳性率可高达90%，抗PR3抗体是诊断WG的特异性指标。在坏死性或新月型肾小球肾炎患者，ANCA的阳性率可达80%，pANCA对应的特异性抗原主要为MPO。ANCA的检测可大大提高肾血管炎的早期诊断率。与ANCA阳性相关的疾病还有继发性血管炎、非血管炎性疾病（如肺部炎症疾病）、炎性溃疡、RA、SLE、自身免疫性肝脏疾病等。但这些疾病中各自相关的ANCA靶抗原各不相同，不同的抗原抗体系统与不同的疾病有关，故对ANCA的特异性靶抗原检测更有助于临床诊断。,谢谢,