五年制病毒学总论寻萌.ppt

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1、1,第二篇 病毒学,免疫与病原生物学系寻萌,2,病毒（virus）,是一类形体微小，结构简单，只含一种类型核酸(DNA或RNA)，必须在活细胞内以复制方式增殖的非细胞型微生物，对抗生素不敏感。,3,病毒与人类关系极为密切：,人类传染病75%由病毒引起。有些病毒传染性极强，流行很广，有效药物少，可引起世界大流行；有些病毒可引起持续性感染；病后可出现后遗症；与某些肿瘤、自身免疫性疾病和胎儿畸形发生密切相关；新病毒不断被发现。,4,第二十二章 病毒的基本性状,5,一、病毒的形态、结构和分类,（一）大小和形态 病毒体（virion）：完整的成熟病毒颗粒，是细胞外的结构形式，具有典型的形态结构和感染性。

2、1.大小：以纳米（nm）作为计量单位。20300nm，可通过滤菌器（0.45m）。观察工具：电子显微镜,6,（300nm）,7,2.形态球形（近似球形）如人类及动物病毒杆形 如植物病毒丝状 如埃博拉病毒弹形 如狂犬病病毒 砖形 如痘病毒蝌蚪形 如细菌病毒（噬菌体）,8,（二）结构,基本结构核心（core）衣壳（capsid）包膜（envelope）,核衣壳（nucleocapsid）,9,1.核心 核酸，构成病毒基因组。少量非结构功能性蛋白质。2.衣壳 蛋白质。保护核酸免受破坏，介导核 酸进入宿主细胞。抗原性。由壳粒组成。壳粒数目和排列方式不同：螺旋对称型20面体立体对称型复合对称型,10,复

3、合对称型,11,无包膜病毒体，称裸露病毒（naked virus）带有包膜的病毒体，称包膜病毒（enveloped virus）3.包膜 在成熟过程中，核衣壳 以出芽方式穿过宿主胞膜 或核膜向细胞外释放时获得。表面有不同形状突起，称为 包膜子粒或刺突（spike）。由病毒基因编 码。,刺突,包膜,12,包膜的性质和功能：,保护核衣壳。构成病毒的表面抗原，具抗原性，诱发免疫应答。与病毒入侵细胞和感染性有关。对干燥、热、酸和脂溶剂敏感，乙醚能破坏包膜而灭活病毒，常用来鉴定病毒有无包膜。,13,（三）化学组成,1.核酸 位于病毒体的中央，其化学成分为DNA或RNA；只含一种核酸，分为DNA病毒和RN

4、A病毒。构成形式多样：线形或环状（闭环、缺口环）双链DNA(dsDNA)单链DNA(ssDNA)双链RNA(dsRNA)单链RNA(ssRNA)：单正链 单负链 分节段RNA是病毒感染、增殖、遗传和变异的物质基础。,分节段RNA,14,2.蛋白质病毒的主要组成部分。由病毒基因组编码。（1）结构蛋白（structure protein）：衣壳蛋白、包膜蛋白和基质蛋白。功能：保护病毒核酸 参与病毒的感染过程 具有良好抗原性，可特异性诊断。（2）非结构蛋白（non-structure protein）：包括：病毒编码的酶类 存在于被感染细胞中的特殊功能蛋白,15,3.脂类和糖类主要存在于包膜上，大部

5、分来自宿主细胞膜。,16,二、病毒的增殖,特点：必须在易感的活细胞内进行。由宿主细胞提供病毒缺乏的酶系统、能量及原料和生物合成的场所。以自我复制方式进行。以病毒基因为模板进行核酸复制和蛋白质合成，再装配成子代病毒体。,17,（一）病毒的复制周期从病毒进入宿主细胞开始，经基因组复制，到最后释放出子代病毒，称为一个复制周期（replication cycle）。1.吸附(Adsorption)2.穿入(Penetration)3.脱壳(Uncoating)4.生物合成(Biosynthesis)5.装配与释放(Assembly and Release),18,吸附,静电结合,特异性结合,19,穿入

6、,吞饮无包膜病毒,核酸直接进入无包膜病毒、噬菌体。,20,融合,有包膜病毒,21,脱壳,病毒核衣壳进入细胞，经细胞溶酶体作用，蛋白衣壳被水解，释放出基因组核酸，并进入细胞的一定部位。,22,生物合成：早期阶段：基因转录、翻译，产生必须的复制酶和抑制细胞正常代谢的非结构蛋白（早期蛋白）；晚期阶段：病毒核酸开始复制，产生病毒结构蛋白（晚期蛋白）。无完整病毒，不能用血清学方法检测，隐蔽期。,23,分为7大类型：双链DNA病毒单链DNA病毒单正链RNA病毒单负链RNA病毒双链RNA病毒逆转录病毒嗜肝DNA病毒（DNA逆转录病毒）,24,双链DNA病毒（dsDNA）,25,装配部位 DNA病毒 细胞核内

7、 RNA病毒 细胞质内成熟方式释放方式 破胞释放 出芽释放 细胞间传播,装配与释放,26,27,（二）病毒的异常增殖1.缺陷病毒（defective virus）由于病毒基因组不完整或某一基因位点改变，不能单独复制出完整有感染性的病毒颗粒，称为缺陷病毒。该病毒在复制时，需要伴随着另一种病毒以弥补缺陷病毒的不足，使之增殖出完整的病毒体。这种有辅助作用的病毒被称为辅助病毒。HDV与HBV腺病毒伴随病毒与腺病毒,28,2.顿挫感染（abortive infection）由于宿主细胞不能为病毒提供复制的必要条件，导致进入的病毒不能复制出完整的具有感染性的病毒颗粒，称为顿挫感染。该细胞称为该病毒的非容纳

8、细胞。人腺病毒 人胚肾细胞（容纳细胞）猴胚肾细胞（非容纳细胞）,29,三、病毒的干扰现象,定义：两种病毒感染同一种细胞时，常发生一种V抑制另一种V复制的现象，称为干扰现象。类型：异种V间干扰；同种V间干扰 同型V间干扰；同株V间干扰(自身干扰)灭活病毒干扰活病毒,30,机制：1.干扰素（interferon，IFN）产生。2.竞争干扰：第一种V破坏细胞表面受体阻止另一种V的吸附和穿入。两种V竞争同一底物或同一复制部位。3.改变宿主细胞代谢途径。4.阻止第二种病毒mRNA的翻译。5.缺陷干扰颗粒(DIP)干扰同种正常病毒。,31,干扰现象的医学意义：干扰现象能阻止、中断发病，也可以使感染终止，导

9、致宿主康复。在使用疫苗预防病毒性疾病时，要注意疫苗病毒间的干扰和与野病株之间的干扰，避免影响疫苗的免疫效果。,32,四、病毒的遗传与变异,病毒的基因组较简单，基因数仅3-10个，增殖速度极快。为充分利用核酸，多种基因常以互相重叠的形式存在，即基因中的编码序列外显子之间有重叠。病毒基因转录与翻译在细胞内进行，其基因组具有真核细胞基因组特征，含有内含子，具有转录后的剪切和后加工过程。,33,（一）基因突变,常发生基因组碱基序列置换、缺失或插入，引起基因突变。自发突变。物理因素（紫外线或射线）或化学因素可诱发突变。由基因突变而导致病毒表型性状改变的毒株称为突变株。病毒空斑的大小、病毒颗粒形态、抗原性

10、、宿主范围、营养要求、细胞病变及致病性改变。,34,1条件致死性突变株 只能在某种条件下增殖，而在另一种条件下不能增殖的病毒株。例：温度敏感性突变株(ts)：低温28-35(容许性温度)复制增殖 高温37-40(非容许性温度)死亡。具有毒力减弱，但免疫原性保持的特点，可制备成较理想的活疫苗。例如：小儿麻痹糖丸，甲肝病毒疫苗。,35,2缺陷型干扰突变株（DIM）因病毒基因组中碱基缺失突变引起，所含核酸明显减少，并发生结构重排，其特点：可自然发生。高感染复制传代时发生。不能单独复制，必须在辅助病毒（通常是野毒株）存在时才能复制，并干扰野毒株的增殖；与某些慢性疾病的发病机制有关。,36,3宿主范围突

11、变株（hr突变株）指病毒基因组的改变，影响了对宿主细胞的感染范围，可感染野生型毒株不能感染的细胞，用于制备减毒疫苗，如狂犬疫苗和麻风疫苗。4耐药突变株 因编码病毒酶基因的突变，降低了病毒酶对药物的亲和力或作用，使病毒对药物不敏感。,37,（二）基因重组与重配,重组（recombination）：两种有亲缘关系的病毒感染同一细胞时，发生基因重组，产生具有两个亲代特征的子病毒，并能继续增殖。重组时病毒核酸则通过分子断裂交叉连接，使核酸分子内部重新排列。,38,重配（reassortment）：分节段的RNA病毒基因组之间（如流感病毒），通过交换RNA节段，使子代基因组发生变异，这种过程称为重配。发

12、生率高于重组。,39,（三）基因整合,指病毒基因组与宿主细胞基因组的整合（integration）。多种DNA病毒、逆转录病毒均有整合宿主细胞染色体的特性。既可引起病毒基因的变异，也可引起宿主细胞染色体基因的改变，导致肿瘤的发生。,40,（四）病毒基因产物的相互作用,两种病毒感染同一细胞时，可发生病毒基因产物的相互作用，产生子代病毒的表型变异。1.互补作用（complementation）和加强作用 两种病毒感染同一细胞时，其中一种病毒的基因产物促使另一病毒增殖。野生株与缺陷病毒或灭活病毒之间，甚至两种缺陷病毒之间，产生感染性子代病毒。,41,2.表型混合与核壳转移 两种病毒感染同一细胞时，一

13、种病毒的子代核酸被另一病毒所编码的衣壳或包膜包裹，发生耐药性或细胞亲嗜性的改变，仅基因产物发生交换表型混合；无包膜病毒发生的表型混合核壳转移。获得的新性状不稳定，经细胞传代后可恢复为亲代表型。应通过传代确定新性状的稳定性，区分是基因重组还是表型混合。,42,五、理化因素对病毒的影响,病毒受理化因素作用后，失去感染性称灭活（inactivation）。灭活的病毒仍能保留其他特性，如抗原性、红细胞吸附、血凝及细胞融合等。,43,一、物理因素1.温度：多耐冷不耐热；大多数病毒5060 30分钟即灭活。热使衣壳蛋白、包膜蛋白变性，病毒不能吸附宿主细胞。复制酶被破环。2.pH：多在pH5-9的范围内，比

14、较稳定；3.射线和紫外线：射线：致死性灭活；紫外线：灭活后可复活(光复活)。,44,二、化学因素1.脂溶剂：有包膜病毒敏感，乙醚作用最佳2.酚类：蛋白变性3.氧化剂、卤素及其化合物：病毒都很敏感4.抗生素与中草药：抗生素：无作用；中草药：板蓝根、大青叶、大黄、黄芪等有 一定的抑制作用；,45,94个科，22个亚科，395个属分类的依据1核酸类型与结构（DNA或RNA，单链或双链、分子量、基因数）2病毒体的形状和大小；3衣壳对称性和壳粒数目；4有无包膜；5.对理化因素的敏感性；6.抗原性；7.生物学特性（繁殖方式、宿主范围、传播途径和致病性）。,六、病毒的分类,46,DNA病毒 病毒 RNA病毒

15、 逆转录病毒 卫星病毒 亚病毒 类病毒 朊粒,47,1卫星病毒(satellites)基因组为500-2000个核苷酸的单链RNA分子。具有自己的蛋白质衣壳。有的由自身编码，有的靠辅助病毒的蛋白衣壳。复制必须依靠辅助病毒，复制地点与辅助病毒一致。与辅助病毒基因组无同源序列。干扰辅助病毒的增殖。多数属植物病毒，少数与噬菌体和动物病毒有关。,48,2类病毒(viroid)具有感染性的RNA分子。仅由200-400个核苷酸组成。单链杆状，有二级结构。无包膜或衣壳，不含蛋白质。在细胞核内复制，利用宿主细胞RNA多聚酶。均为植物病毒。3朊粒(prion)一种传染性很强的蛋白颗粒。与动物和人中枢神经系统慢

16、性进行性致死性传染病有关。,49,第二十三章 病毒的感染与免疫,50,一、病毒的致病作用,病毒感染(viral infection)：指病毒侵入机体，在易感细胞内复制增殖，损伤或改变细胞功能的过程。病毒感染的结果取决于宿主、病毒和其他影响免疫应答的因素。宿主因素：基因背景、免疫状态、年龄及个体健康状况。病毒因素：病毒株、病毒剂量及感染途径。,51,（一）病毒的传播1.传染源 患者、病毒携带者、患病及携带病毒的动物或中间宿主。2.传播方式（1）水平传播(horizontal transmission)（2）垂直传播(vertical transmission),52,（1）水平传播病毒在人群中不

17、同个体之间的传播，或从动物到动物再到人的传播。途径：呼吸道：吸入，流感V、腮腺炎V。消化道：食入，甲肝V、脊灰V。血液：注射，输血，器官移植，HIV、HCV泌尿生殖道：性接触，HSV-、HIV。皮肤黏膜损伤：接触、叮咬，乙脑V、出血热V、狂犬病V。,53,（2）垂直传播：指病毒从亲代到子代。途径：经胎盘：乙肝V、风疹V、CMV、HIV等。结果：流产、死胎、畸形、先天感染。经产道：HSV-，乙肝V等。乳汁和唾液。感染生殖细胞。常见的与胎儿先天性感染有关的病毒：风疹病毒；CMV；HSV；HIV；HBVTORCH：弓形虫(TOXO)、风疹(RUB)、巨细胞病毒(CMV)和单纯疱疹病毒、型(HSV),

18、54,3.感染过程与结局：局部感染：病毒入侵部位增殖局部疾病 如：鼻病毒，普通感冒；轮状病毒，腹泻。全身感染：病毒血、淋巴系统、神经系统 靶器官全身或多种组织与器官，引起功能障碍。病毒进入血液称病毒血症（viremia）。,55,（二）病毒感染的致病机制1.病毒对宿主细胞的致病作用(1)杀细胞效应(cytocidal effect)病毒在宿主细胞内复制完毕，可在很短时间内一次释放大量子代病毒，细胞被裂解死亡。多见无包膜、杀伤性强的病毒。多数引起急性感染。如脊髓灰质炎病毒。机制：a.阻断细胞核酸与蛋白质合成 b.引起细胞溶酶体释放水解酶 c.病毒衣壳蛋白的毒性作用 d.细胞的细胞器受损。,56,

19、细胞病变作用（cytopathic effect，CPE）在体外培养的细胞中，接种杀细胞性病毒后，经一段时间可在显微镜下观察到细胞变圆、堆积、融合、裂解或从瓶壁脱落等现象。,57,(2)稳定状态感染(steady state infection)病毒在宿主细胞内复制，不引起细胞裂解死亡。多见有包膜病毒，常以出芽方式释放子代病毒，对细胞损伤较慢，如流感病毒。a.细胞融合：感染细胞与邻近正常细胞融合，形成多核巨细胞或合胞体，有利于病毒扩散；b.细胞表面出现病毒基因编码的抗原：流感病毒细胞表面表达血凝素红细胞吸附,58,多核巨细胞,59,（3）包涵体形成某些病毒感染的细胞内，用普通光学显微镜可看到有

20、与正常细胞结构和着色不同的圆形或椭圆形、嗜酸性或嗜碱性斑块，称为包涵体(inclusion body)，可作为诊断依据。本质：由病毒颗粒或未装配的病毒成分组成；病毒增殖留下的细胞反应痕迹；如，狂犬病，内基小体,60,内基小体,61,（4）细胞凋亡（apoptosis）病毒感染导致宿主细胞凋亡，可促进细胞中病毒的释放，但也限制了病毒的产量。,62,（5）基因整合与细胞转化某些DNA病毒和反转录病毒在感染中可将基因整合于宿主细胞基因组中，导致细胞转化(cell transformation)，增殖变快，失去细胞间接触抑制。与肿瘤形成密切相关。明确的与人类恶性肿瘤密切相关的病毒：人乳头瘤病毒、HBV

21、、EB、人嗜T细胞病毒,63,2.病毒感染的免疫病理作用（1）抗体介导的免疫病理作用（2）细胞介导的免疫病理作用细胞毒性T细胞（CTL）识别靶细胞膜病毒抗原杀伤靶细胞，造成组织器官损害，即型超敏反应。病毒蛋白与宿主细胞蛋白之间存在共同抗原自身免疫病；,病毒抗原出现在宿主细胞表面，与抗体结合后，激活补体，或ADCC效应溶解靶细胞,病毒抗原抗体,免疫复合物沉积III型,64,（3）致炎性细胞因子的病理作用 INF-，TNF-，IL-1等细胞因子大量产生导致代谢紊乱，活化血管活化因子，引起休克、弥散性血管内凝血（DIC）等。（4）免疫抑制作用 某些病毒感染可损伤或抑制免疫功能。可激活体内潜伏的病毒或

22、促进肿瘤的生长，亦可导致病毒持续性感染。,65,3.病毒的免疫逃逸 病毒的免疫逃逸能力是病毒毒力的另一重要因素。病毒可能通过逃避免疫监视、防止免疫激活或阻止免疫发生等方式来逃脱免疫应答。a.编码特异抑制免疫反应蛋白质；b.形成合胞体使病毒在细胞间传播逃避抗体作用。如：乙肝病毒可抑制干扰素的转录，阻断抗病毒蛋白的表达。,66,（三）病毒感染的类型,67,1.隐性感染和显性感染（1）隐性感染(inapparent infection)：病毒侵入机体，但不引起临床症状的感染。形成原因：病毒毒力弱、机体防御能力强，病毒不能大量增殖，未造成细胞、组织严重损伤；或不能侵入靶细胞。医学意义：(1)病毒携带者

23、，重要传染源；(2)是机体获得特异性免疫的方式。,68,（2）显性感染(apparent infection)：病毒侵入机体在易感细胞内增殖，产生组织损伤和毒性产物，出现临床症状和体征。有些病毒可致多数感染者发病，如天花病毒。有些病毒只有极少数人发病，多数为隐性感染，如脊髓灰质炎病毒。,69,2.急性病毒感染与持续性病毒感染（1）急性感染：潜伏期短、发病急、病程数日至数周、恢复后体内不存在病毒，并常获得特异性免疫。如甲型肝炎，普通感冒。（2）持续性感染：病毒在机体持续存在数月、数年甚至数十年。可出现症状，也可不出现。长期带毒，重要传染源，可引起慢性进行性疾病。慢性感染 潜伏感染 慢发病毒感染,

24、70,类型：a.慢性感染(chronic infection)隐性或显性感染后，病毒在体内仍持续存在，血中可持续检出病毒，可经血液传播。达数月至数年，症状轻微或缺乏，反复发作，迁延不愈。如：慢性乙肝、丙肝,71,b.潜伏感染(latent infection)经急性或隐性感染后，病毒基因组仍存在于一定的细胞内，不活动，但在一定诱因影响下，又可呈现增殖性感染，称为潜伏感染。潜伏期查不出病毒。如：水痘带状疱疹病毒，单纯疱疹病毒,72,73,c.慢发病毒感染(slow virus infection)特征：潜伏期长，数年数十年，此时机体 无症状，也分离不到病毒。发病为慢性进行性(神经系统病变多见)多

25、以死亡而告终常见病毒：朊粒疯牛病，新型克雅氏病；HIV；缺陷型麻疹病毒亚急性硬化性脑炎（SSPE）,74,（四）肿瘤和病毒 许多病毒和肿瘤发生有密切关系！1.肯定的，肿瘤由病毒感染所致：HPV-人疣 人类嗜T细胞病毒-人T细胞白血病2.密切相关的：HBV，HCV与原发性肝癌 EBV与鼻咽癌、非洲儿童恶性淋巴瘤（Burkitts lymphoma）HPV16，HSV-2与宫颈癌 人疱疹病毒-8与卡波西肉瘤,75,二、抗病毒免疫,（一）固有免疫1.干扰素（interferon，IFN）是由病毒或其他干扰素诱生剂刺激机体细胞(如巨噬细胞、淋巴细胞及体细胞)产生的一类具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能的

26、糖蛋白。诱导产生干扰素的物质称干扰素诱生剂。如：病毒、细菌内毒素或人工合成的双链RNA（多聚肌苷酸、多聚胞啶酸）。,76,分类：,77,作用机理不是直接杀灭病毒，而是合成抗病毒蛋白,78,作用特点:产生早；广谱抗病毒作用，中断受染细胞的病毒感染，限制病毒扩散；抑制病毒而无杀灭病毒的作用IFN诱导的抗病毒蛋白，只对病毒起作用，不影响宿主细胞蛋白质合成。调节免疫功能，激活巨噬细胞，NK细胞，淋巴细胞等。抑制肿瘤细胞生长，用于癌症治疗。有流感病毒样副作用，寒战、发热和疲劳。,79,2.先天不感受性 取决于细胞膜上有无病毒受体3.屏障作用 血脑屏障，胎盘屏障4.细胞作用 巨噬细胞中性粒细胞，病毒全身播

27、散NK细胞,80,（二）适应性免疫1.体液免疫 主要作用细胞外游离的病毒（1）中和抗体 针对病毒表面抗原的抗体，与病毒结合后消除其感染能力 机理：(1)直接封闭与细胞受体结合的病毒抗原表位，或改变病毒表面构型，阻止吸附(2)V+Ab免疫复合物，被巨噬细胞吞噬、清除(3)V+Ab激活补体，溶解病毒。,81,IgG、IgM、IgA特点比较：IgG：分子量小，可通过胎盘；出现较晚，维持时间长；中和能力比IgM强；IgM：分子量大，不能通过胎盘。出现最早，早期诊断；中和能力不如IgG强。IgA：分泌型IgA（sIgA），存在于粘膜分 泌液中，是粘膜局部免疫的主要抗体，阻止病毒从局部粘膜侵入。,82,（

28、2）血凝抑制抗体：表面含有血凝素的病毒，可刺激机体产生抑制血凝现象的抗体。如乙脑病毒，流感病毒（3）补体结合抗体：由病毒内部抗原或病毒表面非中和抗原所诱发，可通过调理作用增强巨噬细胞的吞噬作用。,83,2.细胞免疫（1）细胞毒性T细胞（CTL）通过抗原受体识别病毒感染的靶细胞，细胞裂解和细胞凋亡直接杀伤靶细胞。分泌多种细胞因子发挥抗病毒作用。（2）辅助性T细胞(Th)释放IFN-，TNF等细胞因子，激活巨噬细胞和NK细胞，促进CTL增殖和分化。,84,（三）抗病毒免疫持续时间获得持久免疫的原因：V引起全身性感染，并有明显的病毒血症；V的型别少，Ag性稳定、单一；不易或很少发生突变获得短暂免疫的

29、原因：表面感染，无病毒血症；病毒型别多；病毒Ag易变异；,85,第二十四章 病毒感染的检查方法与防治原则,86,一、病毒感染的检查方法,（一）标本的采集与送检 成败关键!原则：尽早采取：发病初期、急性期 无菌收集和处理含菌标本：抗生素部位适宜 冷藏速送：冰块或干冰 50%的甘油缓冲盐水 双份血清标本：急性期、恢复期双份血清，恢复期血清抗体效价比急性期高4倍或以上，才有诊断意义。,87,（二）病毒的分离与鉴定1病毒的分离培养（1）动物接种 最早的病毒分离方法。根据病毒种类不同，选择敏感动物及适宜接种部位。常用动物有小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猴等，接种途径有鼻内、皮内、皮下、脑内、腹腔、静脉等，接种后

30、逐日观察动物发病或死亡。缺点：繁琐；动物对很多人病毒不敏感；体内潜在病毒感染。,88,（2）鸡胚培养 鸡胚对多种病毒敏感，常选用孵化9-14天的鸡胚。绒毛尿囊膜：天花病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒羊膜腔：流感病毒初次分离尿囊腔：流感病毒、腮腺炎病毒卵黄囊：嗜神经病毒,胚胎,89,（3）细胞培养 最常用的方法将离体活组织块或分散的活细胞置于培养容器内，并在一定的条件下（合适的营养液、酸碱度及温度等）继续保持活性甚至能分裂繁殖，常用来分离培养病毒。按生长方式：分为单层细胞和悬浮细胞按细胞来源、染色体特征及传代次数：分为原代细胞、二倍体细胞及传代细胞系。,90,原代细胞：来源于动物胚，鸡胚或人胚的肾、肺

31、等正常细胞。二倍体细胞：指细胞在体外可传代50100代后仍保持二倍染色体数目的单层细胞株，常用人胚肺建立，用于人类病毒的分离和制备病毒疫苗。传代细胞系：在体外可持续繁殖传代的细胞系，大多由癌细胞和二倍体突变细胞建立，如Hep-2、Hela细胞等，这些细胞被广泛应用，并可在液氮中长期冻存留用。,91,病毒在培养细胞中的增殖指征：a.细胞病变（CPE）：细胞圆缩、胞质颗粒增多、聚集、坏死、溶解或脱落。多核巨细胞。包涵体形成。,正常细胞,CPE细胞,92,b.红细胞吸附（HAd）具有血凝素（HA）的病毒（流感或副流感病毒），使受染细胞膜含有病毒血凝素抗原，能与红细胞结合出现红细胞吸附现象，以检测是否

32、有病毒在细胞内增殖。,红细胞,病毒感染的细胞,红细胞吸附,93,c.病毒干扰作用：一种病毒的感染可干扰感染同一细胞的另一种病毒增殖，从而抑制后者产生CPE。d.细胞代谢的改变 病毒感染细胞的结果可使培养液的PH值改变。,94,2.病毒的数量与感染性测定（1）50组织细胞感染量（TCID50）（2）空斑形成试验：测定病毒数量，将一定量适当稀释的待检病毒液接种于敏感的单层细胞中，经培养后，在细胞上方覆盖一层琼脂后继续培养，可见由单个病毒增殖使细胞溶解脱落形成的肉眼可见的空斑。一个空斑即一个空斑形成单位（PFU），通常以PFU/ml表示。,95,（三）病毒感染的诊断形态学检查、病毒成分检测和血清学诊

33、断1.形态学检查电镜和免疫电镜检查 直接查病毒颗粒。普通光镜检查 查包涵体。,96,2.病毒成分检测（1）病毒蛋白抗原检测 EIA，FIA（2）病毒核酸检测 核酸扩增技术：PCR，实时定量PCR核酸杂交技术：斑点杂交 原位杂交等基因芯片技术基因测序,97,3.病毒感染的血清学诊断 检测患者血清中有无相应抗体（1）中和试验：病毒在细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验。既可测患者血清中抗体的滴度，也可鉴定未知病毒或对病毒进行半定量。,98,（2）血凝抑制试验 相应抗体与病毒结合后，阻抑了病毒表面的血凝素与红细胞结合，抑制了血凝现象。用于流感病毒、乙型脑炎病毒感染的诊断，鉴定病毒的型与亚

34、型。,（3）特异性IgM抗体检测 早期诊断,99,二、病毒感染的特异性预防,(一)人工主动免疫1.灭活疫苗(inactivated vaccine)理化方法将病毒灭活。失去感染性但保留抗原性。常用的有甲肝、狂犬病、脊髓灰质炎、流感等灭活疫苗。优点：稳定，安全缺点：注射剂量大，不能诱导黏膜免疫和细胞免疫，免疫力维持时间短。,100,2.减毒活疫苗（attenuated vaccine）通过毒力变异或人工选择培养将毒株变为减毒株或无毒株。常用的有脊髓灰质炎、流感、麻疹等减毒活疫苗。优点：模拟自然感染，可在体内增殖，免疫力保持时间长。缺点：不稳定，应冷藏，进入非寻常部位可致并发症；激活潜伏病毒；毒力

35、恢复。,101,3.亚单位疫苗 化学提取或人工合成，病毒保护性抗原制成。流感病毒血凝素18个氨基酸肽、狂犬病毒刺突糖蛋白4.基因工程疫苗 重组乙肝疫苗5.重组载体疫苗 用减毒活病毒或减毒活细菌作为载体，将编码特定病原体免疫原性蛋白的基因插入载体，作为疫苗输入机体。6.核酸疫苗 DNA疫苗，由真核细胞表达载体和病毒有效免疫原cDNA重组而成。,102,（二）人工被动免疫1.免疫球蛋白 血清丙种球蛋白、胎盘丙种球蛋白用于某些病毒性疾病的紧急预防；乙肝免疫球蛋白（HBIg）用于乙肝病毒的紧急预防。2.细胞免疫制剂 主要有干扰素、白细胞介素、肿瘤坏死因子等。,103,三、病毒感染的治疗,病毒严格细胞内

36、寄生，抗病毒药物必须进入细胞才能发挥作用。针对病毒，对宿主细胞无损伤。病毒复制周期的任一环节都可作为药物靶点。尚无特效药物。抑制病毒复制+提高机体抵抗力,104,抗病毒药物的局限性：针对病毒复制过程中的某个环节，对潜伏状态的病毒无效。某些病毒易突变，易出现耐药毒株。,105,（一）抗病毒化学制剂1.核苷类药物用合成的异常嘧啶取代病毒DNA前体的胸腺嘧啶，在病毒DNA分子合成时掺入子代DNA中，阻止子代病毒结构基因的合成与表达，从而抑制复制或复制出无感染性的病毒，如：碘尿苷（疱疹净）、阿昔洛韦（无环鸟苷）、阿糖腺苷、利巴韦林（病毒唑）、拉米夫定。,106,2.非核苷类反转录酶抑制剂抑制病毒DNA聚合酶或RNA逆转录酶的活性。奈韦拉平吡啶酮，非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTI）。3.蛋白酶抑制剂与各种病毒蛋白酶结合，抑制其活性，影响病毒结构蛋白的合成。如赛科纳瓦、英迪纳瓦。4.金刚烷胺：阻止脱壳。甲型流感,107,（二）干扰素及干扰素诱生剂（三）中草药：大青叶、板蓝根、黄芪、贯众甘草及大蒜提取物等对病毒增殖有一定抑制作用。（四）治疗性抗体,108,（五）基因治疗 能与病毒核酸中的靶基因特异性互补结合的核酸片段（约1530个），可有效地抑制病毒的复制，称为反义核酸序列（称“封条”）。（1）反义寡核苷酸（asON）（2）干扰RNA（3）核酶,