首南京流式沙龙课件.ppt

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1、首届南京流式沙龙,2003 年 12月19日,定量流式细胞术,Tetramer(四聚体),血小板活化,Tetramer(四聚体),Tetramer-原理,内源性抗原,外源性抗原,Tetramer-原理,MHC Class I-HLA-A2,Tetramer-原理,Allophycocyanin:APC,Tetramer-原理,国外医学免疫学分册 2001；24(2):102-105,HLA Class I 限定性肿瘤抗原肽,抗原特异性CTL的分析方法,51Cr释放实验,PCR法,酶联免疫斑点法(ELISPOT),扩增特异T淋巴细胞受体,Tetramer法,间接法需大量的特异性CTLs作为效应细

2、胞需体外扩增，周期长，敏感性低，费时费力难以广泛应用,敏感性高但只能用于已知TCR基因型的特异性CTLs检测,直接法敏感性高不受TCR基因型的限制,有限稀释法(LDA),用Tetramer法研究表明，外周血中仅有0.2-2.5%的CD8+细胞对CMV和EBV特异,Tetramer法,Doherty PC.The numbers game for virus-specific CD8+T cellsJ.Science,1998,280:227,了解病毒特异性CTL和记忆性CTL方面的一项革命,检测病毒特异性CD8细胞的金标准(Gold Standard),Tetramer-应用,感染性疾病,HI

3、V-AIDS,EBV,CMV,HPV,HBV,HCV,Influenza,Measles,Malaria,TB and RSV,Breast,Prostate,Melanoma,Colon,Lung,Cervical,Ovarian and Leukemia,Diabetes,Lyme disease,Multiple sclerosis,Rheumatoid arthritis,Autoimmune vitiligo,EBV and CMV,移植,自身免疫性疾病,肿瘤,Tetramer-应用-例证,感染性疾病,含有HIV-I型病毒包膜肽等三种抗原肽：HIV特异性CTL数量与血浆中RNA病毒量

4、有明显的负相关，而与产毒性感染细胞的清除率无关慢性HCV感染患者的特异性CTLs数量明显少于急性HCV感染和已康复患者,用黑色素瘤抗原诱导潜在的肿瘤特异性T细胞用Tetramer分离，富集,GVHD(移植物抗宿主反应)：受体与供体的次要组织相容性抗原(mHags)的不同引起，在骨髓移植后早期出现(14天内)，造成骨髓移植失败-HLA-mHags肽四聚体监测mHags特异性CTL，以了解对GVHD的临床治疗效果HLA-A2/pp65 Tetramer监测肾移植患者感染CMV后的免疫应答能力,移植,肿瘤,1996-126篇(8篇综述),机会难得！,Tetramer-试剂,抗原,Tetramer-试

5、剂,MHC 等位型,Tetramer-试剂,血小板活化,静止血小板,活化血小板,Fibrinogen,CD41,CD61,CD41/61复合物变形与Firbrinogen结合，为初期血栓形成的关键步骤,PLATELET Fibrinogen Kit,应用,心血管疾病(不稳定心绞痛，心肌梗塞等)监测抗凝集治疗(如RepPro,Integrelin,Plavix,Ticlid等)检测GPIIb/IIIa(CD41/CD61)受体Fibrinogen结合能力,血液体外(in vitro)活化(ADP等诱导)后，检测Fibrinogen结合能力血小板活化状态(ex vivo),标本处理,PLATELE

6、T Fibrinogen Kit,定量流式细胞术,血小板表面抗原定量-PLATELET Calibrator Kit,特点,可定量与血小板相关的任何抗原(如CD41,CD61,CD42a等)免洗间接法一抗亚型为IgG1,IgG2a或IgG2b定量范围宽(500-90,000 分子/血小板)定量准确，CV值(变异系数)小,血小板表面抗原定量-PLATELET Calibrator Kit,标准曲线,血小板表面抗原定量-PLATELET Calibrator Kit,结果,血小板表面抗原定量-PLATELET Calibrator Kit,白细胞表面抗原定量-CELLQUANTTM Calibra

7、tor Kit,特点,可定量与白细胞相关的任何抗原(如CD3,CD4,CD55,CD59等)单个定量(用一个单抗，如CD28抗体定量白细胞表面CD28分子数)多参数定量(如用CD8设门来定量CD8+T细胞上CD28分子数)全血和分离的细胞(如细胞株等)均可间接法一抗亚型为IgG1和IgG2a定量范围宽(1000-300,000 分子/白细胞)定量准确，CV值(变异系数)小,白细胞表面抗原定量-CELLQUANTTM Calibrator Kit,标准曲线,白细胞表面抗原定量-CELLQUANTTM Calibrator Kit,结果,白细胞表面抗原定量-CELLQUANTTM Calibrat

8、or Kit,最新技术计数血液中循环内皮细胞的标准方法,循环内皮细胞(CEC)增加于,CELLQUANT FF-CD146,急性冠状动脉综合征血小板减少性紫癜镰刀细胞贫血败血症狼疮,肾病综合征器官移植排斥手术创伤癌症,传统方法,显微镜检，手工计数。费时，费力，无法标准化,新技术新标准,CELLQUANT FF-CD146,免疫磁珠富集与3色流式细胞术结合仅需1 mL血整个过程不到1个小时灵敏度高：1mL血中可检测出10个循环内皮细胞重复性好，室间差(Interlaboratory CV)小,方法,CELLQUANT FF-CD146,将包被CD146单抗的铁磁性纳米颗粒(CD146FF)与1m

9、L 血孵育富集的CD146+细胞用以下试剂染色 PI(碘化丙啶)(确定有核细胞)CD45-FITC(排除WBC(白细胞)干扰)CD146-PE单抗(识别CD146抗原的另一位点)标准浓度微球(用于绝对计数)流式分析(循环内皮细胞鉴定)有核细胞(PI+);CD45-;CD146+;前向散射角(FSC)范围宽,CELLQUANT FF-CD146,PI-CD45 FITC,CELLQUANT FF-CD146,PI-CD45 FITC,CELLQUANT FF-CD146,CELLQUANT FF-CD146,CELLQUANT FF-CD146,所有产品与技术信息,请登录,免费电话：800 8571 184,