用ModFit软件分析DNA倍体和细胞周期.ppt

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1、DNA倍体和细胞周期分析,细胞周期和DNA倍体分析的原理,1、正常细胞DNA含量稳定在2C水平,2、性细胞DNA含量为1C,3、处于增殖期至分裂期细胞由 2C增加至4C,4、凋亡细胞DNA断裂,含量2C,细胞经荧光染料(碘化丙啶，PI)染色，用流式细胞仪测定细胞DNA含量，可得到细胞周期三个时相(G0/G1、S和G2/M期)的DNA含量（），可以反映细胞的增殖状态和非二倍体（异倍体）的DNA含量,Diploid:100.00%Dip G1:54.38%at 46.90 Dip G2:15.91%at 91.61 Dip S:29.71%G2/G1:1.95%CV:5.23,G0/G1,S,G2

2、/M,DNA检测的常用术语,表示流式分析中DNA含量的分辨率或精确度。通常由G0/G1峰的CV来反映【%CV=（SD/mean）x 100】。影响CV的因素主要包括两方面：仪器因素（如液流、光路、机器调试等）和样本制备及染色过程对标本的人为影响。,1.变异系数（Coefficient of Variation，CV）,DI指的是肿瘤样本G0/G1峰的平均道数与人正常二倍体G0/G1峰的平均道数之间的比值。DI为1 意味着二倍体（2c）（一般正常范围为0.91.1）。倍体（Ploidy）：原指染色体数目。流式中用来描述总的DNA含量。二倍体细胞有正常细胞的DNA含量但不除外染色体异常。DI为1.

3、9-2.1 的细胞为四倍体（CV为5%时）。在二倍体和四倍体区域之外的统称异倍体。,2.DNA指数（DNA index，DI）和倍体（Ploidy）,DNA检测的常用术语,结果分析,CellQuest、WinMDI等软件均可以进行分析，但需要手工进行参数统计和计算；推荐使用ModFit分析软件（分析如下：）1、打开软件；2、在FL2-W/FL2-A散点图中设定单个细胞门（R1），去除聚集细胞，必要时可以设两个门。3、在FL2-A直方图中显示R1中细胞的DNA含量直方图注：该软件可以自动分析，也可手动分析；可以分析凋亡、异倍体、各期比例等；结果均自动计算。,ModFit分析,ModFit分析,M

4、odFit分析,ModFit分析,ModFit分析,ModFit分析,File analyzed:qq.003Date analyzed:3-Jun-2009Model:1DA0A_DSFAnalysis type:Manual analysisDiploid:100.00%Dip G1:63.02%at 44.61 Dip G2:18.55%at 86.71 Dip S:18.44%G2/G1:1.94%CV:6.12Total S-Phase:18.44%Total B.A.D.:5.45%Apoptosis:15.11%Mean:19.05Debris:6.04%Aggregates:1

5、.72%Modeled events:2775All cycle events:2166Cycle events per channel:50RCS:6.238,ModFit分析,ModFit分析,【重要参数】,DI（DNA指数,判断倍体数）=（标本G0/G1期细胞峰的平均荧光道数）/（正常二倍体细胞G0/G1期细胞峰的平均荧光道数）PI(增殖指数,表示细胞的增殖活性)（%）（S+G2M）/（G0/G1+S+G2M）100%SPF(S期细胞比率,表示细胞的增殖活性)（%）=S/（G0/G1+S+G2M）100%,【倍体和细胞周期分析】,发现DNA异倍体(二倍体峰DI1.1 或2.1 或15%的

6、S期细胞，并伴有G0/G1峰的CV9%，提示为肿瘤或增生旺盛的病变；如无明显异倍体，但G0/G1峰的CV增大，并伴有10%15%的S期细胞和一个突出的4倍体峰，诊断为可疑肿瘤或增生旺盛的病变。,发现癌前病变，协助肿瘤早期诊断 在肿瘤的诊断、预后判断和治疗中的作用 在指导肿瘤化疗中的作用,【临床意义】,乳腺癌DNA异倍体患者生存率,乳腺癌肿瘤细胞异倍体患者长期生存率显著下降,【临床病例】,Diploid:46.75%Dip G1:97.54%at 46.06 Dip G2:0.58%at 92.12 Dip S:1.88%G2/G1:2.00%CV:2.26Aneuploid 1:47.55%A

7、n1 G1:93.05%at 49.83 An1 G2:0.00%at 99.67 An1 S:6.95%G2/G1:2.00%CV:2.13 DI:1.08Aneuploid 2:5.70%An2 G1:94.97%at 55.72 An2 G2:5.03%at 103.44 An2 S:0.00%G2/G1:1.86%CV:4.52 DI:1.21,AL 骨髓,Diploid:64.50%Dip G1:92.45%at 49.24 Dip G2:2.30%at 98.48 Dip S:5.26%G2/G1:2.00%CV:3.21Aneuploid 1:35.50%An1 G1:97.69

8、%at 58.53 An1 G2:0.00%at 123.89 An1 S:2.31%G2/G1:2.12%CV:3.14 DI:1.19Total Aneuploid S-Phase:2.31%Total S-Phase:4.21%Total B.A.D.:0.35%Debris:1.14%Aggregates:0.00%Modeled events:3567All cycle events:3526Cycle events per channel:47RCS:2.356,MM 骨髓,宫颈脱落细胞,Diploid:97.61%Dip G1:97.74%at 49.78 Dip G2:0.02%at 99.57 Dip S:2.25%G2/G1:2.00%CV:6.49Aneuploid 1:2.39%An1 G1:84.90%at 75.79 An1 G2:15.10%at 109.99 An1 S:0.00%G2/G1:1.45%CV:3.66 DI:1.52,肺癌 胸水,Diploid:100.00%Dip G1:55.08%at 46.83 Dip G2:15.67%at 92.69 Dip S:29.25%G2/G1:1.98%CV:7.02,增殖旺盛的肿瘤细胞株,