液相色谱故障诊断.ppt

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1、HPLC的故障诊断与维护,美国戴 安 公 司,美国戴 安 公 司美国戴 安 公 司,仪器分析组,I.常见问题 基线噪音,可能的原因：,流动池脏,检测器灯有问题,如果是周期性的，电压或泵的脉冲,温度对检测器的影响,气泡经过检测器,基线漂移,梯度洗脱 温度不稳定(示差检测器）流动相中有污染物 柱中的流动相没有平衡 体系中有污染物流出,可能的原因：,鬼 峰,鬼峰即使不进样也会出现的峰,没有进样,3,7,15,17,问题1-流动相脏问题2-容器污染问题3-柱子污染,20%-100%MeOH,没有进样,峰 型,双 峰,柱 塌 陷,柱中有死体积,过滤片部分堵塞,只有一个双峰组分的共洗脱,可能原因：,样品与

2、溶剂不匹配，溶剂与柱子不匹配,峰 型,所有的峰都展宽,柱效降低柱死体积,大进样量/质量,高粘度流动相,部分峰展宽,前次进样后流出的组分,大分子量样品蛋白或聚合物,样品与流动相不匹配,峰 型,原因：,部分峰拖尾,二次保留效应残留硅醇基的反应,小峰紧跟在大峰的后面流出,柱头有污染,金属,所有峰拖尾,额外的柱效应,柱坏/不适当的溶剂,不适当的样品量,峰 型,峰 型,原因:流动相吸收本底高 进样过程中进了空气 离子对分离中的系统峰 样品组分的吸收(RI或UV)低于流动相,宽 峰,柱外体积增加,*在进样口到柱或柱到检测器之间，使用细的短的连接管*保证所有的管路接头都使用正确*用小体积检测池*减少进样量或

3、降低样品浓度,HPLC常见问题,系统压力问题压力高压力低或没有压力压力不稳流路基线噪音问题基线不稳定(不重复)长、短程振荡基线漂移噪音脉冲尖刺,HPLC常见问题分析,系统压力问题压力高的原因温度太低流速太高流动相粘度大管路堵塞仪器或色谱柱堵塞压力传感器问题,HPLC常见问题分析,系统压力问题压力低或没有压力温度太高;流速太低泵关闭或保险丝断了泵未输送流动相储液瓶中无溶剂 低压限设置不当泵未正确排气溶剂入口过滤头堵 入口管路中有空气泵失效系统内有渗漏处所用溶剂不正确自动进样器在Purge时卡住,HPLC常见问题分析,系统压力问题压力不稳压力传感器问题泵排气不充分泵失效流动相未正确脱气所用溶剂不混

4、溶或易挥发,HPLC常见问题分析(续),流路基线噪音问题短程振荡泵压不稳泵入口管松,弯或堵塞溶剂混合不充分检测池中有大气泡泵入口阀脏或失效泵柱塞杆密封垫磨损检测器出口溶液成滴状流入废液瓶,判断故障与故障排除的原则,规则一确认问题至少发生两次以上。如果问题不重复 出现，很难证实其确实存在。规则二一次只变化一个因素，以使你能够确认所变因 素与问题之间的关联。规则三恢复原状。如果使用更换组件方法来查找问题 之所在,完毕后应将原有完好组件安装回原处。否则,换下的组件将来很难再利用,会造成浪费。规则四尝试预测将来可能发生的问题。利用成功的故 障排除经验来改善您目前的预防保养工作,使现 有问题再发率降至最

5、低。规则五养成记录的好习惯。一个好记录是成功地进行 故障排除的关键。,色谱图常见问题,色谱图常见问题主要有两类:色谱峰峰形异常问题例如负峰,宽峰,肩峰,双峰,峰形不对称等色谱峰保留时间问题保留时间不稳定等,色谱图常见问题分析(一),色谱峰峰形异常问题:色谱图中未出峰:进样问题:未进样或样品分解流动相问题:泵未输液或流动相不正确检测器设置不正确,或检测器有问题一个或几个峰是负峰流动相吸收本底高进样过程中进了空气离子对分离中的系统峰样品组分的吸收(RI或UV)低于流动相,色谱图常见问题分析,色谱峰峰形异常问题:峰比预想的要小样品粘度过大进样器有问题或进样体积有误检测器设置不正确,定量环(Loop)

6、体积不正确检测器输出未置零用了不正确的检测器输出信号检测池被污染检测器的灯可能有问题,色谱图常见问题分析(一)(续),色谱峰峰形异常问题:双峰或肩峰进样量或样品浓度过大保护柱或色谱柱进口堵塞保护柱或色谱柱污染或失效前伸峰进样量或样品浓度过大溶样的溶剂相对于流动相太强保护柱或色谱柱污染或失效,色谱图常见问题分析,色谱峰峰形异常问题:拖尾峰保护柱或色谱柱问题:污染或失效(选择合适的柱子)进样问题检测器时间常数不正确平头峰检测器设置不正确进样体积太大或样品浓度太高,色谱峰保留时间问题:保留时间飘忽不定(各次运行之间)系统不稳定或未达化学平衡泵压力不稳(泵头里有气泡)进样体积过大或样品浓度过大温度波动

7、流动相混合不均匀色谱柱被污染,色谱图常见问题分析,色谱峰保留时间问题:保留时间增加或减少(各次运行之间)系统不稳定或化学平衡不足泵流速变化温度变化色谱柱污染,柱效下降流动相被污染溶剂入口过滤器堵或管路堵塞系统渗漏,色谱图常见问题分析(二)(续),色谱图常见问题分析(二)(续),色谱峰保留时间问题:保留时间改变到一个新的恒定值流动相不正确或其组成不正确泵流速变化实际输液的流速不正确(泵失灵或故障)环境温度变化；柱温不正确色谱柱尺寸或类型不正确色谱柱被污染流动相含有稳定剂或稳定剂发生变化输液系统的梯度滞后体积不正确,色谱图常见问题,色谱图常见问题主要有两类:色谱峰峰形异常问题例如负峰,宽峰,肩峰,

8、双峰,峰形不对称等色谱峰保留时间问题保留时间不稳定等,色谱图常见问题分析,色谱峰峰形异常问题:色谱图中未出峰:进样问题:未进样或样品分解流动相问题:泵未输液或流动相不正确检测器设置不正确,或检测器有问题一个或几个峰是负峰流动相吸收本底高进样过程中进了空气离子对分离中的系统峰样品组分的吸收(RI或UV)低于流动相,色谱图常见问题分析(一)(续),色谱峰峰形异常问题:所有的峰均为负峰:信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒光学装置尚未达到平衡所有的峰都是宽峰系统未平衡或未达到化学平衡溶样的溶剂比流动相强很多色谱柱类型或尺寸不正确色谱柱或保护柱被污染或降级温度变化对色谱柱的影响,色谱图常见问题分析(一

9、)(续),色谱峰峰形异常问题:较早洗脱的峰呈宽峰进样体积过大或样品浓度太高进样器有问题,定量环(Loop)大小不合适在线过滤器,保护柱,色谱柱或管路堵塞管路问题:内径不对或切管不正确管路连接问题:接头或锥箍不正确检测器时间常数不正确,色谱图常见问题分析(一)(续),色谱峰峰形异常问题:峰比预想的要小样品粘度过大进样器有问题或进样体积有误检测器设置不正确,定量环(Loop)体积不正确检测器输出未置零用了不正确的检测器输出信号检测池被污染检测器的灯可能有问题,色谱图常见问题分析(一)(续),色谱峰峰形异常问题:双峰或肩峰进样量或样品浓度过大保护柱或色谱柱进口堵塞保护柱或色谱柱污染或失效前伸峰进样量

10、或样品浓度过大溶样的溶剂相对于流动相太强保护柱或色谱柱污染或失效,色谱图常见问题分析(一)(续),色谱峰峰形异常问题:拖尾峰保护柱或色谱柱问题:污染或失效进样问题检测器时间常数不正确平头峰检测器设置不正确进样体积太大或样品浓度太高,色谱峰保留时间问题:保留时间飘忽不定(各次运行之间)系统不稳定或未达化学平衡泵压力不稳(泵头里有气泡)进样体积过大或样品浓度过大温度波动流动相混合不均匀色谱柱被污染,色谱图常见问题分析(二),色谱峰保留时间问题:保留时间增加或减少(各次运行之间)系统不稳定或化学平衡不足泵流速变化温度变化色谱柱污染,柱效下降流动相被污染溶剂入口过滤器堵或管路堵塞系统渗漏,色谱图常见问题分析(二)(续),色谱图常见问题分析(二)(续),色谱峰保留时间问题:保留时间改变到一个新的恒定值流动相不正确或其组成不正确泵流速变化实际输液的流速不正确(泵失灵或故障)环境温度变化；柱温不正确色谱柱尺寸或类型不正确色谱柱被污染流动相含有稳定剂或稳定剂发生变化输液系统的梯度滞后体积不正确,