微生物的培养与利用.ppt

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1、微生物的培养与利用微生物的培养与分离某种微生物数量的测定培养基对微生物的选择作用利用微生物进行发酵来生产特定的产物发酵过程中亚硝酸盐含量的测定,微生物,原核生物界,原生生物界,真菌界,病毒界,一、微生物的类群,(细菌、放线菌、蓝藻),(酵母菌、霉菌、大型真菌),(草履虫、变形虫、衣藻),(噬菌体、艾滋病毒),特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.,无细胞结构,原核(细胞壁、膜、质),真核(细胞壁、膜、质、核),真核(细胞膜、质、核),噬菌体烟草花叶病毒流感病毒,细菌(形状菌)放线菌,霉菌、蘑菇、酵母菌,衣藻、草履虫、变形虫,DNA

2、或RNA,DNA,DNA,DNA,增殖：吸附注入合成装配释放,分裂生殖(二分裂),孢子生殖出芽生殖,分裂生殖有性生殖,拟核，大型环状DNA,质粒(含抗生素抗药性，固氮基因),其成分为肽聚糖,芽孢,细菌的休眠体，对恶劣的环境有抵抗力,细菌的营养,蓝藻 硝化细菌等,菌落可作为菌种鉴定的重要依据,细菌的代谢,自养,硝化细菌、铁细菌、硫细菌等。,异养,大肠杆菌、乳酸菌、枯草杆菌等。,枯草杆菌、硝化细菌、铁细菌、根瘤菌等。,破伤风杆菌、乳酸菌等。,需氧型：,厌氧型：,二、培养基：,培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。,、概念：,、营养成份：,营养成份：水、碳源、氮

3、源、无机盐其它：、特殊营养物质、氧气（15）,3、培养基的类型和用途,（1）按物理状态来分：固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。（2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。（3）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。,（4）选择培养基的常见用途,加入青霉素的培养基 分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基 分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基 分离固氮微生物不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞,1、伊红美蓝培养基为常用鉴别培养基,2、刚果红与纤维素等多糖类物质反应形成红色复合物，添加刚果红

4、的培养基呈红色，接种的微生物若能够分解纤维素，就会在其菌落的周围形成透明圈,（5）鉴别培养基,4、培养基配制的操作步骤：,三、无菌技术操作,无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。,四、微生物的纯化培养：自然环境中，微生物混在一起生长，要想纯化培养，首先要将单个细胞与其他细胞分离开，进而培养成可见的群体。包括培养基的制备和纯化微生物两个阶段，纯化微生物时常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。,（一）.微生物实验室培养的基本操作程序,1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存,1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,计算,

5、称量,溶化,灭菌,倒平板,（1）、溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热?,可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中，减少误差。,（2）、加琼脂的目的是什么?,作为凝固剂,（二）、纯化大肠杆菌,计算,称量,溶化,灭菌,倒平板,3、在灭菌前,用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？,在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞，在取出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中杂菌污染的作用。,4、培养皿能否用高压蒸汽灭菌？,不能，因为培养皿要保持干燥，应该用干热灭菌。,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,5、倒平板,（二）纯化大肠杆菌,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,三、纯化大肠杆菌,（二）纯化大肠杆菌

6、,1、接种最常用方法有：,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,三、纯化大肠杆菌,（二）纯化大肠杆菌,1、接种最常用方法有：,平板划线法和稀释涂布平板法,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,三、纯化大肠杆菌,（二）纯化大肠杆菌,1、接种最常用方法有：,平板划线法和稀释涂布平板法,2、平板划线法,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,三、纯化大肠杆菌,划线接种的基本步骤和说明:,1、接种最常用方法有：,平板划线法和稀释涂布平板法,2、平板划线法,3、稀释涂布法,（1）系列稀释操作：,（二）纯化大肠杆菌,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,三、纯化大肠杆菌,（1）系列稀释操作：,1、接种最常用方法有：,平板划

7、线法和稀释涂布平板法,2、平板划线法,3、稀释涂布法,（1）系列稀释操作：,（二）纯化大肠杆菌,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,三、纯化大肠杆菌,（2）涂布平板操作,（2）涂布平板操作,1、接种最常用方法有：,2、平板划线法,3、稀释涂布法,（二）纯化大肠杆菌,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,三、纯化大肠杆菌,将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37恒温箱中培养12h和24h后，观察并记录,四、菌种的保藏,1.斜面保藏,临时保存,2.甘油保藏,长期保存,3、某种微生物数量的测定,生长：个体体积的增加繁殖：个体生长到一定阶段，通过特定方式产生新 个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。

8、,在微生物学中提到的“生长”，一般均指群体生长，这一点与研究大生物时有所不同。,细菌太小，往往讨论其群体生长。,（一）微生物生长概述,1、稀释平板计数法 对样品进行适当稀释 单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖 肉眼可见的菌落 对菌落数目的计数推测样品中的微生物细胞数,（二）以数量变化对微生物生长情况进行测定,同一稀释度三个以上重复,取平均值；,每支移液管及涂布器只能接触一个稀释度的菌液；,样品充分混匀；,每个平板上的菌落数目合适，便于准确计数；,要求：,每克样品中的菌株数=（C/V）*M,2.显微镜直接计数法采用细菌计数板或血球计数板，显微镜下直接计数（计算一定容积里样品中微生物

9、的数量）。,取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。用10镜观察并将计数室移至视野中央。在10镜下计数：计数4个（或5个）中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出计数区总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽计一半,必修3P68,显微镜直接计数法缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；,土壤取样 选择培养（此步是否需要，应根据样品中目的菌株数量的多少来确定）梯度稀释 将菌悬液涂布

10、到有特定选择作用的培养基上 挑选单菌落 发酵培养,土壤中某样品细菌的分离与计数流程图表示如下：,（09宁夏理综）32生物选考题A生物选修I生物技术实践某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。（1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了_ 和_。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是_ 和 _。（2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_ _ _。,碳源,氮源,无机盐,高压蒸汽灭菌,水,（09宁夏理综）32生物选考题（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于_ 中培养，培养的

11、温度设定在37。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种_ 作为对照进行实验。（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有_种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越_。（5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐_细菌，这种培养基被称为_。,恒温培养箱,无菌水,多,高,盐（或NaCl）,选择性培养基,4、利用微生物进行发酵来生产特定的产物,（1）果酒和果醋的制作,（2）腐乳的制作,（1）果酒和果醋的制作,果酒制作的原理：,酵 母 菌,有氧呼吸,无氧呼吸,最适温度,20 0C,醋 酸 菌,最适温度,30 0C 35 0C,特 性,

12、好氧细菌,醋酸菌死亡,果醋制作的原理：,实验流程示意图:,（1）毛霉菌（2）根霉菌（3）曲霉（4）青霉（5）酵母菌,1、酿造腐乳的微生物,（2）腐乳的制作,2、腐乳制作的原理,腐乳酿造是利用豆腐坯上培养的毛霉或根霉，培养及腌制期间由外界侵入微生物的繁殖，以及配料中加入的红曲中的红曲霉、面包曲中的米曲霉、酒类中的酵母等所分泌的酶类，在发酵期间，引起极其复杂的化学变化。蛋白质：水解成肽、氨基酸；淀粉：糖化，发酵成乙醇和其他醇类及有机酸；同时辅料中的酒类及添加的各种香辛料等也共同参与作用，合成复杂的酯类，最后形成腐乳所特有的色、香、味、体等，使成品细腻、柔糯而可口。,3、腐乳制作的实验流程,让豆腐上

13、长出毛霉,5、发酵过程中亚硝酸盐含量的测定,（一）、泡菜的制作,1、泡菜制作基础知识（1）乳酸菌 乳酸菌是异养厌氧型细菌，在无氧条件下，将葡萄糖分解成乳酸。常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌，乳酸杆菌常用于制作酸奶。,（2）亚硝酸盐 亚硝酸盐(包括亚硝酸钾和亚硝酸钠)为白色粉末，易溶于水。当人体摄入的亚硝酸盐总量达到0.30.5g时，会引起中毒，达3g时会引起死亡。,（3）腌制条件腌制过程中，要注意控制腌制的时间、温度和食盐的用量。温度过高、食盐用量不足10、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。一般在腌制10天后，亚硝酸盐的含量开始下降。,（二）、亚硝酸盐含量的测定,1、测定亚硝酸盐含量的原理在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，再与N-1萘基乙二胺盐酸盐结合生成玫瑰红溶液。将经过反应显色后的待测样品与标准液比色，即可计算出样品中的亚硝酸盐含量。,2、材料与器具泡菜、对氨基苯磺酸、N-1萘基乙二胺盐酸盐、氯化钠、氢氧化钠、氢氧化铝、氯化镉、氯化钡、亚硝酸钠、蒸馏水、移液管、容量瓶、比色管、榨汁机等,3、步骤,（1）配置溶液,（2）配制标准液,（3）制备样品处理液,（4）比色,