土壤中分解尿素的细菌的分离和计数(第二课时).ppt

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1、复习：1.如何分离土壤中分解尿素的细菌？2.如何对土壤中分解尿素细菌的数目进行计数？,土壤中分解尿素的细菌的分离和计数（第二课时）,课题2 微生物的培养与应用,自主学习，发现问题,阅读课本P23-P26，根据导学案的提示，完成以下问题。,1.实验设计包括哪些内容？,2.实验设计的流程是什么？,3.每一步是如何操作的？注意事 项是什么？,4.如何进行结果分析与评价？,小组讨论，启发思维,小组互对答案，对有疑问的问题相互讨论，并确定发言人，按导学案上的要求完成本组的问题展示。,实验设计包括对、和，以及等的综合考虑和安排。,实验方案,所需仪器,材料,用具,药品,具体的实施步骤,时间安排,学生展示，老

2、师点拨，突破难点,一、实验设计流程,土壤取样,制备培养基,样品稀释,取样涂布,微生物的培养与观察,细菌计数,注意事项：取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。,二.实验的具体操作及注意实项,土壤取样,从肥沃、湿润、酸碱度接近中性的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再在距离地表3cm-8cm处取样，将样品装入事先准备好的信封中。,制备培养基,制备以尿素为唯一氮源的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。,注意事项：倒平板时要冷却到50，且要在酒精灯火焰旁进行。,注意事项：,（三）样品的稀释,应在火焰旁称取土壤10g。在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行分离不同的微生物采用不同的稀释

3、度,测定土壤中细菌的数量，一般选用104，105，106 测定放线菌的数量，一般选用103，104，105 测定真菌的数量，一般选用102，103，104,为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？,原因：不同微生物在土壤中含量不同.例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。,取样涂布,注意事项：实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。,注意事项：涂布器和移液管要保持无菌。如果得到了2个或2个以上菌落数目在30300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的

4、菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。,微生物的培养与观察,培养：不同微生物往往需要不同培养温度。细菌：3037培养12d放线菌：2528培养57d霉菌：2528的温度下培养34d。,观察：在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征。包括：形状、大小、隆起程度和颜色。,微生物的培养与观察,（六）细菌计数,在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。,三、操作提示,无菌操作,做好标记,规划时间,四.结果分析与评价,培养基未被杂菌污染,被杂菌污染,被杂菌污染或混入其他氮源,牛肉膏培养基上的菌落数目大于选择培养

5、基上的数目,得到三个或三个以上菌落数目在30300的平板,接近,五.课外延伸,在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。,3.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是()A.筛选出能分解尿素的细菌B.对分离的菌种作进一步鉴定C.作细菌的营养成分 D.如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素,当堂检测,1.能够测定样品活菌数的方法是()A.稀释涂布平板法 B.直接计数法C.重量法 D.比浊法,2.下列操作步骤顺序正确的是()土壤取样称取10g土样，加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中吸取0.1mL土壤溶液进行平板涂布依次

6、稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度A.B.C.D.,A,C,B,4.(2016四川，10)图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程,请据图回答下列问题：(1)图中选择培养基应以_为唯一氮源,鉴别培养基还需添加_作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成_色。(2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为163、156、262、178和191。该过程采取的接种方法是_，每克土壤样品中的细菌数量为_108个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较_。,尿素,

7、酚红,红,稀释涂布平板法,1.9,少,5.(2015浙江自选模块，17节选)某工厂为了生产耐高温植酸酶饲料添加剂，对该酶菌株进行筛选，其流程如下图所示。请回答下列问题：(1)土壤悬液首先经80处理15分钟，其目的是筛选出_。(2)在无菌条件下，将经过处理的土壤悬液进行_，然后涂布于含有植酸钠的固体培养基上。培养后观察到_(3)筛选获得的菌株经鉴定后，将优良菌株进行液体扩大培养。培养时需要振荡，其主要目的是_。液体培养基与固体培养基相比，不含有的成分是_。,土样中的菌种筛选菌株鉴定优良菌株扩大培养植酸酶提纯植酸酶固定化植酸酶特性分析,耐高温菌株,稀释,单个菌落,供氧,琼脂,课后作业,（一）空气中微生物总数的检测（二）水中细菌总数的检测（三）牛奶中细菌的分离与计数（四）土壤中真菌（或放线菌）的分离与计数,