医学免疫学实验一抗原抗体反应.ppt

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1、医学免疫学实验,病原生物学与免疫学教研室Tel:姓名,第一讲抗原抗体反应antigen-antibody reaction,什么是抗原抗体反应？,抗原与相应抗体的特异性结合反应称为抗原抗体反应。抗原抗体反应既可在体内作为体液免疫应答的效应机制自然发生，也可在体外作为免疫学实验的结果出现。在体内，可表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和毒素等作用，有时亦可引起免疫病理损伤，在体外，依相应抗原物理性状(颗粒状或可溶性)以及反应的条件(电解质、补体等)不同，可出现凝集、沉淀、细胞溶解和补体结合等反应。,抗原抗体反应的特点,1.特异性,Ab 1Ab2Ab3,抗原抗体反应的特点,2.比例 性,抗原抗体反应的特

2、点,3.可逆性,体外抗原抗体反应的影响因素,电 解 质,温 度,酸 碱 度,作用时间,抗原抗体反应类型,可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应颗粒性抗原与相应抗体结合所发生的凝集反应抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应免疫标记的抗原抗体反应。,凝集反应,-ABO血型的鉴定,实 验 目 的,1.熟悉凝集反应的定义及血型鉴定实验的原理。2.掌握血型鉴定实验的操作及结果的正确观察与判断。3.了解血型鉴定实验的用途。,凝集反应,定义：在一定浓度的电解质环境中，颗粒性抗原（红细胞、细菌、乳胶颗粒等）和相应抗体反应能够产生肉眼可见的凝集块直接凝集间接凝集间

3、接凝集抑制试验 抗球蛋白试验,间接凝集反应,间接凝集抑制,抗球蛋白法检测IgG抗体的原理,抗球蛋白可以和IgG反应,通过搭桥作用使红细胞凝集,概 述,血型系统 Blood group system,1901年发现的人类第一个血型系统-ABO血型系统发现者-奥地利科学家 Karl Landsteiner,ABO血型系统的发现,【实验原理】,血型是指红细胞的血型，是根据红细胞膜外表面存在的特异性抗原（镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白和糖脂）来确定的，这种抗原或凝集原是由遗传决定的,Y,+,实验器材,1：载玻片、采血针、牙签等,2：A型和B型标准血清、酒精棉球,操作步骤,1.取载玻片，酒精消毒正面，在背面标

4、记A和B两区2.酒精消毒指端皮肤和采血针后，用采血针刺破皮肤，挤出少量血液，涂在玻片A、B两区，并立即用无菌干棉球压迫止血3.在两区分别滴加一滴抗A定型试剂和抗B定型试剂，立即用牙签混匀4.静置3分钟，观察凝聚现象，判定实验结果,实验结果,ABO血型检查临床意义,1.输血：输血前必须检查血型，选择血型相同的供血者，进行交叉配血完全相合才能输血。2.母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病，主要是依靠血型血清学检查来诊断。3.器官移植时受者与供者也必须ABO血型相符合才能移植，血型不符极易引起急性排异反应、导致移植失败。4.ABO血型与疾病之间的联系也有一些报道，某些看来造血系统无关的疾病实际上可能

5、与红细胞血型抗原有关。,沉淀反应,-对流免疫电泳,沉淀反应,可溶性抗原在有适量电解质存在的条件下与相应的抗体结合，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应类型：,单向扩散,单向扩散,双向扩散,即将抗原和抗体分别加入琼脂对应的孔中，二者会向四周扩散，在形成白色沉淀线。,二者比例合适处,双向扩散,电 泳,定义：即带电颗粒在电场的作用下向着相反的电极移动，称为电泳。原理：蛋白质分子在溶液中由于其末端氨基、末端羧基及侧链的游离基团而成为带电颗粒，并可在电场内移动，其移动方向取决于蛋白质分子所带静电荷。不同蛋白质分子根据其氨基酸组成及所在溶液的pH值，携带的静电荷不尽相同，致使它们在电场中的迁移率各异，从而达

6、到分理的目的。,火箭免疫电泳,火箭免疫电泳,对流免疫电泳,对流免疫电泳实质上是由电泳定向加速的双向扩散抗原在电泳时从负极向正极移动抗体由正极向负极移动,实验器材,1：载玻片、打孔器、三角烧瓶、移液管、洗耳球、10%的琼脂、记号笔,2：酒精灯、火柴、电炉、电泳仪、电泳槽,3：微量加样器、抗原及抗体样品,操作步骤,制板,打孔,封底,加样,电泳,34ml琼脂,孔间距3mm,约7ul,切割火焰23次,总电流4mA/cm x 2.5cm(板宽)x N(板数）30分钟,对流免疫电泳实验结果,对流免疫电泳,思 考 题,1、对流免疫电泳试验中如果抗原、抗体的正极和负极放反了是否会出现沉淀线？为什么？2、抗原抗体反应检测的临床意义有哪些？,实验操作录像,实验操作录像,实验报告,实验原理实验方法实验结果及分析思考题,参考书籍及网站,