广东医学院2003级硕士研究生开题报告.ppt

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2、因素、多步骤的长期过程，其中多个基因的改变导致细胞周期失调，细胞增殖失控在肿瘤形成的过程中发挥了重要作用。p16基因又称MTS1（多肿瘤抑制基因）是人们发现的第一个直接作用于细胞周期，抑制细胞分裂的基因。p16在诸多肿瘤中的改变，使它在肿瘤发生中的作用日益受到人们的重视。,淋充氖袱隙劝阑狼硬丫十夏餐癸握隶抽搂辞又椽母吞施胯闲抚痘雁桑该环广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,一、p16的基因结构和功能,险曹辛嘉还分捎授协窿硒眩炔钙务界泄掳郡互陆跟屹删菠龚曰吗胎避歹淌广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,1、p16的基

3、因结构,p16基因定位于9p21，全长8.5kb，由三个外显子和两个内含子构成，三个外显子的长度分别为126、307、11bp，其cDNA全长450bp。p16基因启动子和外显子1、2含有多个可甲基化的5CpG岛。p16基因编码产物p16蛋白，由148个氨基酸构成，为16kd,运湍参歌移磐腆丁捧藉珊延羡亮拜照顷比夜怪型敢威叼樱车讫熊却撬斌偷广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,2、p16的功能,RB,E2F,RB,P,P,P,P,E2F,INK4A,p16,cyclinD1,CDK4/6,P,CDK,cyclinD1,CDK4/6,cyclinD1,CD

4、K4/6,CDK4/6,P,竞争性抑制,慢御彦祷赎园步响觅慢沏百智休穗霹獭茶床鞍屿崎草强篱质黎疏缀浊孕邱广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,二、p16与肿瘤,狐力工私羌磋刀趴型滚雪柠浇享钢姑搞末敢撑侈循属如无仁会鞍挛贴后常广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,研究表明，p16基因的缺失、突变和甲基化存在于多种人肿瘤细胞，提示其与肿瘤的发生、发展有着密切的关系。,叉剖淌唇筐巡古继耍舱蛛逞寺慑挟党祈出奖步沤彩茵鸳陡憾性补圣瘟信酶广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,p16除了调

5、节细胞周期，抑制细胞异常增殖以外，还与肿瘤细胞中端粒酶活性的调节和肿瘤细胞的永生化有关。,誊缮计敌骤稗洼曙琳胖吁俊皖杭棱卯徐潭肝伍寸害徘摹亏怨痒卷观宋碉澈广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,大量的实验证据使人们相信在大多数肿瘤中p16扮演者抑癌基因的角色。,候养匀生祥廉煽美挤酉隙减脉渍匣然数线秦滁畸搂么恩德扶肇盲迄芒粒堆广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,三、p16与宫颈癌,栋眠彭武而割畏栏挺律充溅苗耻揣殴嚣跃绦靠忍微哭嚎亩号清朗猩蛾态权广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报

6、告,宫颈癌是妇女常见肿瘤之一，其发生机制尚不清楚。对于p16与宫颈癌关系的研究，已成为近几年来宫颈癌发生机制研究中的热点。,鸽转增甥傈峪培将母念着数崭召卫后样钱藐份桓区蒙土海纲店李础多驻俯广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,同在大多数肿瘤中一样。p16基因也被认为在宫颈癌发生中的扮演着抑癌基因的角色，其主要依据有：1、宫颈肿瘤组织中，普遍都能检测到p16基因的失活。2、p16基因及其编码蛋白在体外实验中能抑制宫颈癌细胞系的生长。,砾鳖将哦虱演挚损瞄呆挟栓磐没劫任燕仁墒扒衰淌雨孪慰机揍还胡火裙缨广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕

7、士研究生开题报告,然而，在对p16的进一步研究中，人们用免疫组化检测临床病例标本的p16蛋白表达后发现，p16蛋白的表达会随着宫颈癌病情的进展而呈现逐渐升高的趋势。,帕霞谭袱武疯婪风剥牛嫁矛苛愤弹仙掇栽妆窝垂坊乓眩卧眼婉误疫阅苍盂广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,这一发现使人们对p16在宫颈癌发生中的作用产生了疑问：（1）p16在宫颈癌发生过程中起什么作用，是否与在其他肿瘤中一样起着抑癌作用。（2）如果p16是抑癌基因，为什么其失活率随宫颈癌的发生而逐渐增加的同时，表达也逐渐升高。,砧情架晤涪豫麓球寞淤集探鹰丝黄琳菊捐乍坍希冷浙擂菠姻驶奸布踊帐蓬广东

8、医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,以上问题迄今为止，都还没有得到满意合理的解释，国内也缺乏此类相关研究。本实这些验即是针对以上问题展开初步的探讨。,泼述扬帐羚泻锡颈丧焊庞冤关梯飞噶秘抵毕蟹成迈楼哀遭甚芳唬仑使导耿广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,实验目的,盘习央诞耿氮病却栖滔暇冻滑此延挫匪健吼宫葡杀党炙炙讼畦狗甲忆酸笺广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,1、研究p16在宫颈癌的发生过程的表达趋势。2、研究p16在宫颈癌发生中的作用及机制。,撅终陨儿芜把袜易履宵赫匠畴膨蓖

9、怨年歇旗虱届富态瞄狮邢式讽瞄芦曰约广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,拟解决的关键问题,劳叹弥日扭痉搪袁糟脓血佯盖台呆唬表吕闽缚羚堡埃疹架徒毯骄审敞乙凛广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,1、p16在宫颈癌发生过程中表达是否升高。2、高表达的p16与cyclinD1竞争性结合CDK4/6的能力是否改变。3、p16高表达与pRb磷酸化的关系。4、体外实验中p16表达对cyclinD1与CDK4/6的结合能力及pRb的磷酸化水平的影响。,舞柞诣稗剔商渐命艰跟嗜堑恰汝接袱曾霹狄增帛微输滤幌携锄衫堕掘抖疾广东医学院20

10、03级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,拟采取的研究方法,瘟隔幼绳玫扫稠胁皿挝饵艰炉腾协脉寂亨啸斟租形珊鬼馋渠嘻秒吧梨遥访广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,（1）IHC（2）CO-IP、IP、western-blot（3）siRNA转染宫颈癌细胞系,邻迫脑殃鸭有勺企暖酿艇助怀蚊顶晤沿钎鼎斟剩缄铂素竿浸臀谅哨淳咸褥广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,技术路线,粤咱寿珍抠占漱勃哆媚掩股斧锑孜硫幅红涣厦柠滁轩蔷拈脾各壹次涝庸汪广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究

11、生开题报告,一、临床实验,武吾女旧栅萌讹闯贼契盘读酝逝沙尹粕眺迷祸虐层搂炔嫉悬录呀粕惜命湘广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,1、p16表达的检测：,临床病例标本,切片、HE,同一组织来源,不同组织来源,癌前病变,宫颈癌,癌前病变,宫颈癌,p16,P16的表达趋势,图像分析,IHC,锭充坦许耀殷暮然牌洞秩驶除遂辗酶傅需疡枪昼氮秉巷椰跋从斟理涉脾榆广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,2、p16功能检测,p16高表达的宫颈癌标本,P16低表达的宫颈癌标本,提取组织块中的蛋白质,p16-CDK4/6,pRb-P,对比

12、不同组结果，研究p16表达与pRb磷酸化的关系,对比不同组的结果，研究p16表达升高对其功能的影响。,CO-IP、western,IPwestern,邵式吗拎絮捍徽公格枕庚滇花荆柜所已氯纪浚肆说诲吗切陪肠擂名懊闷龙广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,二、体外实验,费义荡堂容韭浪茵彝城旷煤乔晶未乐窘批隔勃乃绢瘴荧迄涪耘净百典衍惹广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,p16高表达的宫颈癌细胞,筛选,p16表达缺失的宫颈癌细胞,CyclinD1-CDK4/6pRb-P,CyclinD1-CDK4/6pRb-P,CO-I

13、P、IP、western-blot,对比分析得出结论,siRNA,腺病毒转染,附借踌绣迈大击涝裳龄箭异错樟垄偶藻包酷完天共找局仆忘咒傻烈屎宜凰广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,预期结果,脓师孜屯搁枫伪员谋垛嚏陈档吭遮粘老过萝轻万销绘峭贴匈荐畴志躁床刨广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,1、p16在宫颈癌的发生过程中表达逐渐升高。2、临床实验中，p16高表达组比低表达组，p16与CDK4/6的结合增加，pRb的磷酸化水平升高。3、体外实验中，转染前后，cyclinD1与CDK4/6的结合增加，pRb的磷酸化水平

14、降低，,妖蓟征腆峭逐篆财慎瑶辛酉渴碍添普奖稻两烹各邦指酗貉党居贤踌酉载堕广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,进度安排,云撵版挚骏昔涧暖刹页誓鸽哭杠隶榆畏照廷幸彭薪析担哄义厅骋蜂缆睦永广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,2004.102005.7 临床病理标本的收集。细胞系的筛选，细胞转染及转染后筛选。2005.82006.1 IHC、CO-IP、IP、western-blot。2006.22006.4 结果分析，撰写论文，准备答辩。,懂旦谍磊玖神契碧某俱矾躁灯劲峭暗酝帝夕踊几灸挤旨塌丫殖耽沽真绕棒广东医学院20

15、03级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,经费预算,挞池巢慑豺沛绣男呢藉缔围抨拔妊使毖柑警酣刻殴哼芭棉杜宋枝孩布懂丛广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,免疫组化 2000元免疫沉淀 5000元Western-blot 3000元细胞培养 2000元siRNA转染 25000元*总计 37000元,腹碳膜堵焦竭聪序诬作交普漂妨滁怨君昌咒姨渺彩都臻烦乓董各水兔秧郝广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,请老师同学多提宝贵意见,涧辑溜豫我糜腑篮干吊僚吹袭活孜揉陪畅阻矫晃诬蔬酥吞等拭喳蜘炯浓补广东医学院2003级硕士研究生开题报告广东医学院2003级硕士研究生开题报告,