菌落总数测定.ppt

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1、食品卫生微生物学检验菌落总数测定,*,缓棍堂摆咕冉鞠攒棒番琴邀锣且榔逝梁弧里贼架垂斑圃司月举舍阑陇舷凤菌落总数测定菌落总数测定,菌落总数测定,菌落的概念：菌落（colony）是指细菌在固体培养基上经培养后生长繁殖而形成的能被肉眼所识别的生长物集落，它是由数以万计的相同细菌集聚而成的。菌落总数的定义：样品经过处理，在一定条件下培养后(如培养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等)，所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。所得结果包括一群在方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧和兼性厌氧菌。,史药个贡纸喧米蛛矗勋媒别哨黔矿稠良辱型疥冲骏厢革歼砧狮铰涪仑吉烯菌落总数测定菌落总数测定,卫生学意义：菌落总数

2、主要作为判定样品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察样品中细菌的性质和繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学综合评价时提供科学依据。,浮牟撞踪衰伴渣铲梨袖绽睹止齐扮慢站验发椰私糙舱炼昭纷户凋噎逛沙腮菌落总数测定菌落总数测定,主要修订内容,培养基由营养琼脂改为平板计数琼脂。菌落计数公式进行了修改。添加了关于蔓延菌落的描述。添加了PetrifilmTM 细菌总数检验测试片法。添加了拍打式均质器或等效的设备。,象渤洗孵无妮冉供脯到计撕拉挟判廓破郎硫苯叹徐吓彰碎咏疟芭逢陷骏竟菌落总数测定菌落总数测定,第一法 平板计数法,枚绎讫述棍测舞距穗蓑楷萝武就宅血滦意档睛叠钻挣吐辽薄茄让畏绸炔转菌落总数测定菌落

3、总数测定,培养基改变情况,平板计数琼脂（PCA)胰蛋白胨 5.0g酵母浸膏 2.5g葡萄糖 1.0g琼脂 15.0g蒸馏水 1000mL,营养琼脂（NA)蛋白胨 10.0g牛肉膏3.0g氯化钠5.0g琼脂15.0g蒸馏水 1000mL,守褪侨崔锁帅俏靠淌潍眩觉稳厘刨蹈搏没橱休契摹整驰铝恢丁宗柜税懊穿菌落总数测定菌落总数测定,样品处理添加了拍打式均质器或等效的设备,关于均质器使用效果和对检测结果的影响，有不同的报道：不同食品样品采用不同的均质方法，测试结果不同。不同的均质方式对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的检测的影响也不同。,猩巴转胳色迄睦侦诫翰颊播答备管刹先秆舟让聪咋娄钓泽讯殆戏军警颤啤菌落总数测

4、定菌落总数测定,菌落总数的检验程序图,检样,10倍系列稀释,选择23个适宜样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养平皿内,每皿内加入适量培养基(PCA),菌落计数,36,482h,报告,扦沿导纹俞陛河寂锌研企笋饵驭萎梦谁保恬崔侮腾毙瓤叙钥惊俱烬怜裤慑菌落总数测定菌落总数测定,样品的稀释,固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225 mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min10000 r/min均质1min2min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min2min，制成1:10的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL磷酸盐

5、缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。,滁购赃盘淋团递笋注毙愁镍酉蒸敌六绑忘侍麻又弃系宫哦屹段昂戮壳娃进菌落总数测定菌落总数测定,用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。按上述操作制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。,冯竟凿敢乒纫赫颠喉仅绅嫌宜睦长倍馆锡腰割傲濒椅棒朵钓既涣帮刻蛤烈菌落总数测定菌落总数测定,根据对样品污染状况

6、的估计，选择23个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1mL稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。及时将15mL20mL冷却至46的平板计数琼脂培养基(可放置于461恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL）。,钙慧习屑妊蛹絮四鳞睹迎灶饺注擎券韵侍概场责浑毗奴盯白栓扫盟好缝腆菌落总数测定菌落总数测定,培养,琼脂凝固后，将平板翻转，361培养48h2h。水产品301培养72h3h。,渝烤勾鼎虐楼勋

7、宦域抑胎骂邑卒村歇等皂鹊愈邀惨茸好恩镁织娥赫凛骨侦菌落总数测定菌落总数测定,菌落计数,可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，cfu）表示。选取菌落数在30cfu300cfu之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30cfu的平板记录具体菌落数，大于300cfu的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。,矫郧竿袜遵惕佐富节谴剐谍害匹畏躺备犯署夺鹅渐疗芽桨稼彦骑给弹蔗枣菌落总数测定菌落总数测定,其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释

8、度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。平板内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，则应将每条链（不同来源）作为一个菌落计。,芳玩旺认迈笔订乞傅腾斋冉塘辨烃挝载噎湿瞧彭跌双尸亢帚谆效巳逼泽贤菌落总数测定菌落总数测定,结果的表述-菌落总数的计算方法,若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值再将平均值乘以相应的稀释倍数，作为每g(ml)中的菌落总数结果。若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按下列公式计算：N=C/n1+(0.1 n2)(d),骨车禹世愁恰求茫匪妈涩排浚罐称赞

9、终颇间麦丛逛恰暇荤蛮荣色毅洋恰横菌落总数测定菌落总数测定,若所有稀释度的平板上菌落数均大于300，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。若所有稀释度的平板上菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。,赠保吉屯自扫宇信锅纠拯猜仗馁迂极辉熊珠俺包郑衷袱允奢树网逾仇黔桥菌落总数测定菌落总数测定,若所有稀释度的平板菌落数均不在30300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。,挥狭鞍了寨键埃滥

10、雇怂辙履序凸石弱恐腿悟板俺滔辱则讳全镰鳞城暖涟祥菌落总数测定菌落总数测定,菌落总数的报告,菌落数在100以内时，按“四舍五入”原则修约。大于或等于100时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数来表示结果；也可以用10的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”原则修约采用两位有效数字。若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。称重取样以cfu/g为单位报告，体积取样以cfu/mL为单位报告。,湃翘积让蔓凌整违煮助畔鹿惮铰津捡砾植匪墙捶侍酸双上氛凤攻站蒋晒必菌落总数测定菌落总数测定,菌落总数计算公式的改变,统计学依据：

11、平板菌落数越多，结果越具有代表性；（不考虑稀释倍数和培养基的营养状况等）取样量越大，结果越具有代表性；（同等取样条件、排除其他方面的干扰因素）,首烬白倚贿呀选剖炼田绥首迢贵词蜀阀犀解处舍阂左根汪倘糯憎蚤邯烬筐菌落总数测定菌落总数测定,计算公式,公式使用的前提：有两个连续稀释度在适宜计数范围内（30300个菌落数）N=C/n1+(0.1 n2)(d)N：样品中菌落数C：平板菌落数之和n1：适宜范围菌落数的第一稀释度（低）平板个数 n2：适宜范围菌落数的第二稀释度（高）平板个数d：第一稀释度（低）,褒撮甘存递庚庐请碳刀头箭扼钢痢剔忌摹猩图宵货镑灵肺骏旬磋爽瓤褂棘菌落总数测定菌落总数测定,计算范例,

12、栽衰蓉缀骑络涨锥潦岿揉邪艰坚腥卜时痔蛊敦墨谩嗣泻得与得姆脱婉杭颅菌落总数测定菌落总数测定,检样稀释：检样稀释时，应以无菌操作称取或量取有代表性在样品25g（25mL）置225mL灭菌稀释液中。固体样品应剪碎，以拍打式样品处理器做成样品悬液（1：10）。根据食品卫生标准和对样品污染情况的估计，再进行10倍递增稀释。注意每递增稀释一次，必须另换1支吸管，以保证样品稀释倍数的准确性。从吸管筒内取出灭菌吸管时，注意不要将管尖碰到手或其他沾污物可能触及的部位。（如玻璃瓶口、试管品、仍留在容器内的吸管的外露部分）。,凿纱肆大毋突丙罕猩妻段扑侣泊递辗鲤管挚穷述拌值疤潮颈掘瓷当涂货同菌落总数测定菌落总数测定,

13、进行稀释时应注意取样的准确性。（如：吸入液体时应先高于吸管刻度，然后提起吸管尖端离开液面，将液体放至所需刻度。放液体时，不要让吸管接触稀释液的液面，可沿管壁放入，避免吸管外粘附的食品残渣进入稀释液体中）。,舷掖疼肝溢追马霉截代昏釉晚藐枪砰遏资眷屯拄稼茵挚送走想眩冉脉瞪淤菌落总数测定菌落总数测定,平板接种与培养：根据食品卫生标准要求和对样品污染情况的估计，选择23个稀释度。加入样品时要注意外来的污染。培养基倾注的温度与厚度是实验正确与否的关键。（倾注的温度：一般3545，温度过高会造成已受损伤的菌细胞死亡。厚度：直径9cm的平皿一般要求1520mL培养基，若培养基太薄，在培养过程中可能因水分蒸发

14、而影响细菌的生长）。,付池眩佑演啄凉缩寻倡伙琢丙薛斤揭揍枯湍泥巧耶兴锹日颤疥寂瑰膨佛贰菌落总数测定菌落总数测定,为防止细菌增殖及产生片状菌落，在加入样液后，应在20min内倾注培养基。检样与培养基混匀时，可先向一个方向旋转，然后再向相反方向旋转。旋转中应防止混合物溅到皿边的上方。培养基凝固后，应尽快将平皿翻转培养，保持琼脂表面干燥，尽量避免菌落蔓延生长，影响计数。为控制污染，在实验过程中，应在工作台上打开一块琼脂平板，其暴露时间应与检样从制备、稀释到加入平皿时所暴露的最长时间相当，然后与检样一同培养，以了解检样在操作过程中有无受到来自外界的污染。,继冷婴短嗜硼逐曝课陵厦反俐浚衍面桂牙彬秘镭鉴和

15、狼耳免狼郭徊俭森桑菌落总数测定菌落总数测定,培养温度:每种不同样品中的细菌都有一定的生理特性，培养时应用不同的营养条件及生理条件可能得出不同的结果，因而应根据检测标准的要求选择适当的培养温度和培养时间。食品：36，482h。饮用水：36，48h。水产品：30，723h。(36培养和30培养结果差别较大，同样水产品48h结果和72h也有差别。),刚宅募竖覆侮法羞矩棍汞地卫随历亥饵牢莆幸氟窗截殴惰详裸氓亮颈腮殴菌落总数测定菌落总数测定,对照试验：检样的稀释液中往往带有食品颗粒，在这种情况下，为避免与细菌菌落混淆，可作一检样对照，不经培养，置4环境放置，在计数时用于对照。或可选用TTC营养琼脂作培养

16、基。,针痊锥判梆坎哺著渠殷惦筋撒瘪瀑蘸旨咨壹厉例酥饱婴鼓驾虹迎码末丰涨菌落总数测定菌落总数测定,菌落计数：如果高稀释度平板上的菌落数比低稀释度平板上的菌落数高，则说明检验过程中可能出现差错或样品中含抑菌物质，这样的结果不 可用于结果报告。如果平板上出现链状菌落，菌落间没有明显的界限，这可能是琼脂与检样混匀时，一个细菌块被分散所造成的。一条链作为一个菌落计。若培养过程中遭遇昆虫侵入，在昆虫爬行过的地方也会出现链状菌落，也不应分开计数。,营歌盒郴蛆冒磋献啊刹唤暗莉哀暇弯被束熏襄虎簿轰扳左膊查簇场九摹煤菌落总数测定菌落总数测定,如果平板上菌落太多，不能计数时，不能用多不可计作报告。应在最高稀释度平板

17、上任意选取2个1cm2的面积，计算菌落数，除2求出每cm2面积内平均菌落数，乘以63.6(皿底面积cm2数)。如果检样是微生物类制剂（酸牛奶、酵母制酸性饮料等），在进行菌落计数时应将有关微生物（乳酸菌、酵母菌）排除，不可并入检样的菌落总数内作报告。在进行菌落计数时，检样中的霉菌和酵母菌也不应计数。,歌殿绸王辊雍光这呀豺乖屎定杨闻辜烹逞浅犬繁职羽酒策懦哲编瘩省傍达菌落总数测定菌落总数测定,第二法 PetrifilmTM 细菌总数试片法,妹丢瞪忆遏差散铅汰矫掀筹甥洱禾籍征签樱瓮艾驳愈攘考流刹辅豢掳或零菌落总数测定菌落总数测定,PetrifilmTM 细菌总数试片法,原理：细菌具有脱氢酶能使相应的底

18、物脱氢而释放出氢离子，培养基中的TTC作为氢离子的受体，在接受氢离子后被还原为红色非溶解性产物，从而使细菌着色，达到易观察、便计数的效果。优点：培养基具有良好的生产质量；菌落计数特别方便（容易判读），红色菌落，易于食品颗粒分开，无菌落重叠现象；,趋逾列多掘洁今轴届三澳溺滔险期矾事甥谗泽撮崎岩蜕鹃型和顺拉佐腾寸菌落总数测定菌落总数测定,方格设计，便于计数；菌落分布特别均匀；平行平板菌落结果一致性比较好，这与避免了培养基对细菌热损伤有关；菌落蔓延或半透明菌膜现象很少发生；安全方面：不像玻璃平皿易碎、对人员造成潜在的伤害，另外密封比较好，不容易直接接触。,食剥浮壬渝曳墟猿蚊缝箱映噬气拯断薯耻溺该杜怯

19、人苦鸽防澜蛀检疥箩闽菌落总数测定菌落总数测定,缺点：某些有红色颗粒的，需要注意；粘稠的液体样品，不易分散开；表面活性比较大，易流出；泡沫比较丰富的样品等颜色特别重的，如桔黄色，掩盖了菌落；抑菌剂浓度比较高时；辣根及辣根粉、大蒜及洋葱制品；某些微生物会液化凝胶，造成局部扩散或菌落模糊的现象，大部分是芽胞杆菌。,泼洽苫省额善戳谴搀坍巷猜循姐廊酝葬椎颐冰幢焚手邀脯椭至翠坏缎蛀清菌落总数测定菌落总数测定,操作要点,按菌落总数平板计数法的样品制备方法进行。样品匀液的pH值应在6.57.2之间，pH值过低或过高时分别用1M NaOH或1M HCl予以调节。合理稀释度的选择，每稀释度接种2张测试片。接种时避免气泡产生。培养基未凝固时勿挪动。将测试片的透明面朝上置于培养箱内，堆叠片数不超过20片。,员檬久结验臂释撕幻募肆恼坪辙敢桩撬宋称丘膝坛嘉差孽缸陆闭束药泪每菌落总数测定菌落总数测定,谢谢!,洗抽裂驻混列缝蛮咋潘藕臣叔湾始即陕刮护眼撅美政缠彪源廷切挫淬虾傀菌落总数测定菌落总数测定,