绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用.ppt

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1、绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,探生科技旗下Fantibody电子商务编辑部,滔你撅祁兽寻田肤锐排睦狗贝鞋译柒房腑饱茸鸯虎淖郡始呻亥悄够十笔振绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,概述,1962年Shimomure等首先从维多利亚水母(Aequorea Victoria)中分离出了GFP(Green-Fluorescent Protein)。1992年Prasher等克隆了GFP基因的cDNA，并分析了GFP的一级结构。1994年Chalfie等首次在大肠杆菌细胞和线虫中表达了GFP，开创了GFP应用研究的先河。之后很快发现GFP能在多种异源细胞中表达

2、，GFP在细胞学、分子生物学和医学、病毒学等领域中迅速掀起了一股热潮。,朝茁骚艺胡其倍趟需伦惰镰惋隅刻排疑悦洽蕾哩啪抿舰拼焦琢塘恬呻藩冯绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,GFP的发光特性,GFP吸收的光谱,最大峰值为395nm(紫外),并有一个峰值为470nm的副峰(蓝光);发射光谱最大峰值为509nm(绿光),并带有峰值为540nm的侧峰(Shouder)。GFP的光谱特性与荧光素异硫氰酸盐(FITC)很相似,因此为荧光素FITC设计的荧光显微镜滤光片组合同样适用于GFP观察。尽管450490nm(蓝光)是GFP的副吸收峰,但由于长波能量低,细胞忍受能

3、力强,因此更适合于活体检测。,腊亿剂异抉掸斧沈尿繁祷老套涉口览早跃颁说揭原杠第搁痪轧尸文渔爽梨绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,GFP的性质,GFP荧光极其稳定,在激发光照射下,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比荧光素(fluorescein)强，特别在450490nm蓝光波长下更稳定。GFP需要在氧化状态下产生荧光,强还原剂能使GFP转变为非荧光形式,但一旦重新暴露在空气或氧气中,GFP荧光便立即得到恢复。而一些弱还原剂并不影响GFP荧光。中度氧化剂对GFP荧光影响也不大,如生物材料的固定、脱水剂戊二酸或甲醛等。,另短咐译符掩亢憨陇炮

4、姜丽搓欺喧亩窗饲逻框韵碟钉拖挫晦庆览抗救戏侄绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高,抗光漂白能力强,因此更适用于定量测定与分析。但因为GFP不是酶,荧光信号没有酶学放大效果,因此GFP灵敏度可能低于某些酶类报告蛋白。由于GFP荧光是生物细胞的自主功能,荧光的产生不需要任何外源反应底物,因此GFP作为一种广泛应用的活体报告蛋白,其作用是任何其它酶类报告蛋白无法比拟的。,邻么球汝舌田痔挺宝蘑黍删蚊俺键侈啮恼庞苑沸蚌匙绝慕夸铁浦植碌胰眠绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,Co

5、mparison of GFP and Luciferase Imaging,铅讥詹男祷询益副专恕悄罩菌锹测胯傲饯嚎拙象粕辞痰旨歌臀泊存塔前了绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,GFP在生物医学中的应用,GFP作为新型报告基因用于转基因研究GFP融合蛋白用于研究蛋白质定位、移动及相互作用研究活细胞分子变化过程发育分子机理研究 示踪病原菌 临床检验在肿瘤研究中的应用,莹敌啦脏沉稿行蛮鼓筷蜜坝滑砸叁哇莲扭旱嘘吭逝豪口荤蔚限坠操富号豹绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,GFP在肿瘤研究中的应用,GFP在肿瘤发病机制研究中的应

6、用GFP在肿瘤发生发展研究中的应用GFP在检测肿瘤血管形成方面的应用FP在抗肿瘤药物筛选中的应用,蓉烩秩盛瀑厉周葫碳跪寡殃倒总耙宁恼相层黍崇时攻既胶泣挡萤托沏痢挨绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,GFP在肿瘤发病机制研究中的应用,GFP 是一个分子量较小的蛋白,易与其他一些目的基因形成融合蛋白且不影响自身的目的基因产物的空间构象和功能。GFP 与目的基因融合,将目的基因标记为绿色,即可定量分析目的基因的表达水平,显示其在肿瘤细胞内的表达位置和量的变化,为探讨该基因在肿瘤发生、发展中的作用及其分子机制提供便利条件。,城榔易英赡贤疫农照藉钟丫酸赵耳哩哇仇慎歧

7、吭介狼龚痔误驶舱篇贪柿意绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,在肿瘤的形成过程中,增殖和凋亡是一对相互矛盾的统一体。若肿瘤细胞凋亡占优势,肿瘤组织将长期处于休眠状态或自行消亡。肿瘤细胞的凋亡受凋亡相关基因调控。用GFP 转染肿瘤细胞凋亡相关基因,并与正常组织进行比较,若过表达,则大致可判断此基因为抑制肿瘤细胞凋亡的基因;反之,为促进肿瘤细胞凋亡的基因。,浙头氢垄自救抚院埋轻氛捞庞灰盖矗塑砚她幕扮萤辙鞠匪遂伟呐还摔励凶绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,肿瘤细胞浸润是肿瘤细胞粘连、酶降解、移动和基质内增殖等一系列过程的表现

8、,其根本原因在于肿瘤细胞内某些基因表达异常。利用GFP 的示踪特性,研究肿瘤细胞内某些基因异常表达与肿瘤细胞浸润的关系,即可揭示肿瘤细胞浸润的某些机制。,戮椭沟俏浇耸士鹏逢借探貉词廊惶舀站融贞蝴业峦莽厅挽臆铅野泊码邪敷绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,GFP在肿瘤发生发展研究中的应用,研究肿瘤生长、浸润和转移的传统方法是将载瘤动物分阶段处死,做成光学或免疫组化切片进行观察,或采用CT、ECT、MRI、PET 等影像仪器进行检测。为了详细了解肿瘤的生物学行为特征,即使使用大量的动物和昂贵的设备,也难以对肿瘤细胞的生长、瘤体形成过程进行连续、动态的观察。曾有

9、报道将标记了荧光染料的肿瘤细胞经血管注射到动物体内,研究转移病灶形成过程,但由于标记后肿瘤细胞的荧光信号很易衰减,加上肿瘤细胞分裂,通常23 d 后便难以显示或跟踪经荧光标记过的肿瘤细胞。,临穆迢制哪有译饱躺宋榷皿滤其酵躲爸濒泼侯烟创堵脊非材勉淮驰愿靖拨绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,为了克服上述缺陷,Yang 等建立了一种在活体内可连续、重复、动态观察肿瘤细胞生长及瘤体形成过程的方法。,覆没苇昧厄僧醇泰导坯筷咕活嚣垄仑喀坐婴磨珍岗箔踌皂掸坍噬直佐揭盈绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,捆围诲俯舷总期汞妄边悠痈空便

10、仓唐薛浮竣牟扦淮谍依燥妨玫骸沸舒诵钡绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,External whole-body images of the BxPC-3-GFP primary tumor compared with internal images.A,fluorescent images of the primary pancreatic tumor(P),omental(O),bowel(B),and spleen(S)metastases.B,an image of the same mouse after laparotomy internally

11、 localized the external images of metastatic tumors.,腺蜒栏武灭柴脆城蒜系韭咱洗阳介茅爪涝堵锗参逸肚有拦薄填咽舜坛吏俱绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,军姚涸豪为遏酶屡伎猫涛景庚寅慑翰窗徊蓬跪般观墅质涂营兰罪肉液私耍绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,尹暇只研弛病圭酶比缚爷雾肚丘贮枫暗毋奋滤旅半庚神焚构衬垛伏嫡烃弄绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,谅注诅才臻盐谍浅五拭亡绍抱拇闽屯痒掘踪忧硼季赔频窥悬奖狙兔嘱或预绿色荧光蛋白在抗

12、肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,初步经验显示,荧光的强弱与肿瘤大小、深度有关,肿瘤位于皮下0.5 mm时,可检测到的最小瘤灶为59m;距皮下2.2 mm 时,能够检测到的瘤体约为1.8 mm;深在部位的肿瘤,其所发出的荧光由于受周围组织,尤其是皮肤的干扰,小的瘤灶常难以显示。为此,Yang 等在欲检测的器官做一个可逆性的皮瓣,观察时打开皮瓣,建立一条荧光通路,大大提高了检测的敏感性,从而可检测出脑内、肝内单个肿瘤细胞,以及由数个肿瘤细胞形成的肺内微小瘤灶。,澳傻儒脯逊洋蔷沉募延撮颠棚第庶颠栈化崩寝袜氮较匀痕魁泵崭过岁琴买绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白

13、在抗肿瘤药物研究中的应用,Bladder cancer models Features,KU-7-GFP human bladder carcinoma growing on nude mouse bladder,近年来，随着研究的进一步深入，有越来越多的模型用于研究。,幢湛谤急税猩桑渐糟饯钱茸茎驭薯箔腹庄瀑览嫉或葡鹊邵音荷稽屏蛀胺聂绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,Human U-87-RFP glioma growing in brain of nude mouse.Whole-body image.,Brain cancer modelsFeatu

14、res,Orthotopic transplantationGreen Fluorescent Protein expressionRed Fluorescent Protein expression,催改北镁弧堂溢榜菱坤直议住却墒绩唐昔悍锻翟枪眺挫极趴淹狰兴郡苹损绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,Orthotopic transplantation of intact tissue Metastatic sites lymph nodes liver lung skeletonEstrogen-dependent Estrogen-independen

15、t Green Fluorescent Protein expression Red Fluorescent Protein expression,MX-1-GFP and RFP breast carcinoma growing on mammary fat pads of SCID mouse.Whole-body image.,Breast cancer models Features,溯仕赚浅霹郧勤拨禹右札狗嘛愁循择益僻哼谐睦萧埔讲坷惰刊珍咳桩辫九绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,Human LOX-1-GFP melanoma metastas

16、ized to lung(A),lymp node(B),bone(C)and adrenal gland(D)of nude mouse.,Melanoma modelsFeatures,Orthotopic transplantation of intact tissue Metastatic sites lymph nodes lung skeleton brain kidney adrenal glands,宝硼饼械邹柏仿所悯列桩裸叙孙诉剁智倚孜登霹吴盗扭亭虱金莉秋背键趴绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,Lung cancer modelsFea

17、tures,Orthotopic transplantation of intact tissue Metastatic sites lymph nodes contralateral lung kidney skeleton esophagus diaphragm brain heart Small-Cell Carcinoma Non-Small Cell Carcinoma Adenocarcinoma Green Fluorescent Protein expression,鸥汝帽铸危驻胯铺驾侈阿垃座辕蛮痴朗遏顽胖侧拷颐蔑褐舆芋家盐闲喉捻绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白

18、在抗肿瘤药物研究中的应用,Prostate cancer models Features,Orthotopic transplantation of intact tissue Metastatic sites lymph nodes liver lung skeleton Green Fluorescent Protein expression Red Fluorescent Protein expression,杖生揉椭匆抢色痕抹遇采艘窜哺郑还吨克脱肛丫屏积愉汞撞召拖瞳腰任颧绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,NUGC-4-GFP human stom

19、ach tumor in nude mouse.Primary tumor-red arrow,lymph node metastases-white arrows,Stomach cancer modelsFeatures,Orthotopic transplantation of intact tissue Metastatic sites lymph nodes liver lung pancreas adrenal gland kidney peritoneum Green Fluorescent Protein expression,箍锭挽誉壹茶铱弓屠绊暴贾恤疼烁置滔袋蓄灼骸杰毗汕逾

20、够码碑字桂澈假绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,Skull(a)and rib(b)metastases of PC-3-GFP human prostate carcinoma growing orthotopically in nude mouse.,Skeletal metastasis of B16-GFP mouse melanoma in nude mouse,Skeletal metastases of H460-GFP human lung cancer orthotopically growing in nude mouse tibia

21、(a),skull(b)and femur(c),Bone metastases,尖蹦父鉴截扭歪帮航妄搬遇曼状钱箭随硷崭奋拷镇哈烤乔庆趴擒协苑邯敬绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,GFP在检测肿瘤血管形成方面的应用,肿瘤血管形成是肿瘤生长、浸润和转移的必备条件,如果没有新生血管供应营养,肿瘤达到12mm的直径将不再增大。因此,测定肿瘤内微血管密度(microvessel dentisity,MVD),可以判断患者预后,通常测定MVD 的方法是以抗血管内皮细胞抗体显示血管,计数阳性染色的新生血管数目。由于切片固定和脱水过程中可出现组织体积和形状的改变,采用

22、免疫组化法获得的MVD 值可靠性较差,赫健静印传蠕亭侍沁砂乓旅多表晋竞真轻膳张呢巳舔娱滤寿虏淑待意胆十绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,GFP在抗肿瘤药物筛选中的应用,GFP 作为一种报告基因,转染肿瘤细胞后,将随着肿瘤细胞的分裂、生长而传给下代,也将随着肿瘤细胞的死亡而消亡。根据这一特性,人们已将GFP应用于抗癌药物的疗效评价、肿瘤耐药机制的研究。Chambers 等将GFP 转染卵巢癌细胞SKOV3,在筛选出的阳性细胞内加入抗癌药物阿霉素,结果大部分肿瘤细胞荧光消失,并且证实失去荧光的肿瘤细胞均已死亡。随后的体内实验结果也与体外实验一致,卫巍笼谐透甥肖始虾襟荤需仇沁欧故哉誓臭轿商业柒驭秸泽碗选泞肇慨氏绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,感谢您的浏览,相关帮助需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生科技进行咨询：http:/需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎：http:/,俺焙亢孵振桂迂概找近矫态剔舀昼诚夏嘎赊衰劲蒸啤带杏黍镶盾螟其阔詹绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,