模块四逆境胁迫对植物生理生化指标的.ppt

《模块四逆境胁迫对植物生理生化指标的.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《模块四逆境胁迫对植物生理生化指标的.ppt（25页珍藏版）》请在三一办公上搜索。

1、逆境胁迫对植物生理生化指标的影响,李忠光，,模块四 综 合 性 实 验,目 的,掌握逆境胁迫下一些植物生理指标的测定方法；了解逆境胁迫下植物生理生化指标的变化以及逆境伤害和适应的原因。,流 程 图,实 验 原 理 I,实 验 原 理 I,实 验 原 理 I,实 验 原 理 II,4260 nm,实 验 原 理 III,实 验 原 理 IV,实 验 原 理 V,实 验 原 理 VI,实 验 原 理 VII,对硫二硝基苯酸,实 验 原 理 VIII,Cited from Plant Physiology,2003,131:697-706,实 验 方 法 I,种子发芽率的测定：各取50粒吸胀的玉米种

2、子或小麦种子沿胚的中心线切成两半（严格区分两个半粒），进行下列实验：其中50个半粒进行TTC染色（30水浴 20 min）另50个半粒进行曙红染色（室温染色10 min）根据两种方法的染色情况，分别计算发芽率。,品种为晴3或鲁玉13的玉米种子或小麦种子（购于西山种子公司）用0.1%HgCl2消毒10 min后 用蒸馏水漂洗干净 用蒸馏水于26下吸涨12 h 播于垫有6层湿润滤纸的带盖白磁盘（24cm16cm）中 于26下暗萌发60 h 计算发芽率（注意与前面结果比较）选取长势一致的玉米幼苗做干旱5天、高温、盐渍或低温下处理（去除较矮或较高的玉米幼苗）。,实 验 方 法 I,呼吸作用的测定：材料

3、的准备：将预测量的材料称重后（0.5g）放入测量瓶。测定方法：打开电源预热5 min打开气泵开关打开闭路开关用碱石灰管分别连接面板上的“OUT”和“IN”，主机的“OUT1”和“IN1”分别与测量瓶的“OUT1”和“IN1”相连立即开始记时测量1min的CO2增加量计算：每分钟每克材料的CO2释放量（mL.g-1.min-1）。,实 验 方 法 II,Pro的提取：分别取0.1 g实验组和对照组的胚芽鞘加入3 mL 3%磺基水杨酸（SSA）和少许石英砂充分研磨用2 mL 3%SSA洗研钵5000 rpm离心10 min 上清液定容至5 mL。测定：上清液各2 mL 分别加入2 mL冰乙酸和2

4、mL茚三酮试剂煮沸15 min冷却后5000 rpm离心10 min（若没沉淀可略此步骤）分别测定A520计算：,实 验 方 法 III,MDA提取：分别取0.1 g实验组和对照组加入3 mL 10%TCA和少许石英砂充分研磨用2 mL 10%TCA洗研钵5000 rpm离心10 min 上清液定容至5 mL。测定：分别取上清液各2 mL 加入0.6%TBA（用10%TCA配制）2 mL煮沸12 min冷却后5000 rpm离心5 min（视沉淀有无）分别测定OD450和OD532计算：,实 验 方 法 IV,H2O2提取：分别取0.1 g实验组和对照组加入3 mL 50 mM PBS(pH=

5、6.8，内含1mM HA)和少许石英砂充分研磨用2 mL PBS洗研钵5000 rpm离心10 min 上清液定容至5 mL。测定：分别取上清液各3 mL 加入0.1%Ti(SO4)2 用20%(v/v)H2SO4配制 1 mL摇匀 5000 rpm离心10 min OD410计算：,实 验 方 法 V,实 验 方 法 VI,1、抗氧化酶的提取：分别取0.1 g实验材料加入少许石英砂和3 ml提取液（50mmol/L PBS,pH6.0,内含0.mmol/LEDTA,1%PVP）充分研磨转入离心管中用2 ml提取液洗研钵 5000 rpm离心10 min 上清液定容至5 ml 用于测定POD和

6、PPO酶活性或分装后转至-20或-80保存。,2、POD测定：取POD反应混合液（10mmol/L愈创木酚，5 mmol/L H2O2,用PBS溶解）2.95 ml，加入酶液50 ml（空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，读出反应2 min时的A470。3、PPO测定：取PPO反应混合液（20 mmol/L邻苯二酚，用PBS溶解）2.9 ml，加入酶液0.1 ml（空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，读出反应 2 min时的A410。以每分钟A值变化0.01所需要的酶液的量为一个活力单位（U），则：,实 验 方 法 VI,4、计算,实 验 方 法 VI,实 验 方 法 VII,GSH的

7、提取：分别取0.1 g实验组和对照组的胚芽鞘加入3 mL 5%三氯乙酸（TCA）和少许石英砂充分研磨用2 mL 5%TCA洗研钵 5000 rpm离心10 min 上清液定容至5 mL。测定：上清液各1 mL(空白用5%三氯乙酸代替)分别加入2 mL0.1M PBS(pH=7.7)0.5 mL 4 mM DTNB 25 5 min测定A412计算：,实 验 方 法 VIII,ASA的提取：分别取0.1 g实验组和对照组的胚芽鞘加入3 mL 5%三氯乙酸（TCA）和少许石英砂充分研磨用2 mL 5%TCA洗研钵 5000 rpm离心10 min 上清液定容至5 mL。测定：上清液各0.8 mL(空白用5%TCA代替)分别加入0.8 mL 0.15 M NaH2PO4(pH=7.4)和蒸馏水 摇匀 分别加入 0.8 mL 5%TCA、44%磷酸和4%联吡啶 摇匀 加入3%FeCl3 0.8 mL 37 15 min 测定A525计算：,模 块 实 验 报 告,“以逆境胁迫对玉米幼苗生理生化指标的影响”为题撰写科技论文。题目 署名 摘要 关键词 引言 材料与方法 结果 讨论 参考文献。具体参见科技论文的写作。,