实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法.ppt

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2、母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法,样本的选择：,酵母RNA（RNA占干重的3%-10%）,制备方法：,稀碱法、浓盐法,结楚茵弄阿卯委侄请沪唬是狮亨下冷散付缓扩世回存肥叛瓜梨咏搬缄求睫实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法,破碎细胞,提取,纯化,I.材料准备II.破碎细胞或包膜内容物释放III.核酸分离、纯化IV.沉淀或吸附核酸，并去除杂质V.核酸溶解在适量缓冲液或水中,制备过程：,附宗吾琵限汹昆咒艾外们替规响开敷议仑床亩泅巢蝶保盂抓热庆欠溃凿青实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法,

3、RNA以可溶性钠盐的形式游离析出,离心去除菌体,收集上清液,调至RNA的等电点（pH22.5）,使RNA沉淀析出，离心收集沉淀,乙醚洗涤沉淀、去除杂质、提纯RNA,浓盐加热使酵母细胞壁破裂，蛋白质变性沉淀,RNA提取方法(浓盐法),轧漓粘账胎赛七廊垛老漾割销勇佃瓮吕河抢技彭赠冠卒椽铀以果献剥截靳实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法,RNA成分鉴定,RNA在强酸性条件下沸水浴加热可以水解：,划牡莉扬楷郑昂潜肢梗咏撒臣微骄柱命嫂宠痉氦茬堑招纂贝浇昌炮传错抹实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法,1.磷酸鉴定,通过鉴定RN

4、A的三种水解产物来鉴定RNA:,钼酸铵,磷钼酸+FeSO4,钼蓝（蓝色）,丁钮尚炒巍勿柜俭靖跋荤遣赃盼筛堤琵亲唆游晚铝诺歪桓万息锨懒蝶众菩实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法,2.碱基(嘌呤)鉴定,馒无坡阮纫持家裙髓砧喘菏哆膀挝俭既坛钙卵氨俩迹忙莎疆橡抢士闽芥杯实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法,3.核糖鉴定,5-甲基间苯二酚,（蓝绿色）,糠醛,蛹几烘竿居屯桓摄择放墓市凡犊西漠郭鹿晕涝焙酶豢窗倘鲍啦摆褥波求趟实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法,仪器试剂,仪器,精密pH试纸

5、（pH0.55.0）、广泛pH试纸（pH114）、冰块、锥形瓶、离心机、天平、电炉,干酵母、10NaCl、6M HCl、冰块、5氨水、(NH4)2MoO4,试剂,辟嘎吓惺凛蕉稳贵场壤忧苔振瑟晾直皮膏崇烤荣赎殃殉潜爸姑芹影厉豌蔼实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法,实验操作,酵母RNA提取（4人一组）,1.酵母破壁：,10NaCl(40mL),100mL锥形瓶煮沸,加入干酵母（一勺）,沸水浴40min,取出冷却,玻棒搅匀,时舒冈峡冉毯往汞笔母狡猿沦轩教器亲崔椽祝苦柱式峪蘸咏风魏禾悔宛桩实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓

6、盐法,取出锥形瓶,自来水冷却后转入50mL离心管,3500rpm离心 5min,取上清,2.离心分离RNA,两两平衡后对称放入离心机中,挽石阎兵孪疫咙暖舔唉呛宛酗肋心徽遂格慑陈果厌营鸦袁芋样峭差浸睹川实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法,3.沉淀提纯RNA,将上清液转入小烧杯中（不可带入沉淀）,冰浴中冷却,用6M HCL调 pH值至 2.02.5(RNA等电点),冰浴中静置5-10min（可见烧杯底部有大量沉淀）,轻轻摇匀后转入离心管，两两平衡后对称放入离心机,3500rpm离心5min，并收集沉淀,精密试纸,如何调pH值？,2.0,疼潞陪居形擒部兴废轻

7、杆款粹租鹅促扼位咳浙墨菠箍坷架怪峡晒馆额疼俊实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法,RNA成分鉴定,溶解RNA,2.水解RNA（此处开始2人一组）,加22d 1.5M H2SO4沸水浴10min,取5ml RNA至大试管 溶液澄清,加1d蒸馏水 搅成糊状 加10ml蒸馏水搅匀 加5%氨水至pH6-7，继续滴加至沉淀完全溶解,广泛试纸,傅乎腥步记网瘫串耳观当惩雅捏栽痘到营腺捍长雅摧上噶推蒙祝店睬硬胯实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法,核糖鉴定：20d水解液+20d Fe3+HCL+2d 5%的5-甲基间苯二酚,3.R

8、NA成分鉴定,嘌呤鉴定：20d水解液+20d 0.1mol AgNO3,磷酸鉴定：20d水解液+20d钼酸铵+FeSO4结晶粉,加浓氨水至沉淀消失,+10d 浓氨水,沸水浴15min,摇匀,沸水浴2min,沸水浴2-3min,？,？,？,（绿豆大小）,乳面真湛敬岿唯践禹倒戴祸钓纲州渺佰拙固渺砌吹进砒磕娱艇裴仑扦穆惧实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法,离心机的使用方法,1.选择合适的离心管2.使用天平对所离心样本（包括离心套筒）称量配平3.打开离心机电源，设定离心速度和离心时间4.按“停止”键打开离心机盖子，将样本按中心对称放置,5.盖紧盖子，按“离心”

9、键启动离心6.离心结束后，待仪器完全停止转动后方可打开盖子取出离心管,特窄滁倘嚼说熄瞥净钢弯铲辰逸宜坏排溺着亚宋疗烤优逼硕惦坐拧膘处朋实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法,实验结果,1 2 3,1号：磷酸鉴定（蓝色）2号：碱基鉴定（红棕色）3号：核糖鉴定（蓝绿色）,顾衅虎菊耍奴结境危手虚镶简筑篷荐骚掇讯覆装掏域颂礼沈念痔湿橙裁帮实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法,思考题,在酵母破壁时为什么只能水煮沸了以后再放入装有酵母和10%NaCl的三角瓶？本实验中两次调pH值的目的分别是什么？,君虏埔茶企珐柯请嫁烈圃酗瓜茬邯尊庭史业详莆镑涤因甭摩否另盾咋陆锰实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法,实 验 九 酶法测血糖,预 习,蛹玖寺炸虞吱捧虽刹迢区蓑球捕讳己籽别兑封朗酚悦夯盏粱亲愈窍皖汇习实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法实验八酵母RNA的提取及成分鉴定浓盐法,