第二章2种子的扩大培养.ppt

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1、2023/6/21http:/,1,汞柔市逃蓉巾票凰种债乍末疵壁求戒哟句哩做倘埃狮挑军误骏景梢墙陋咒第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),2023/6/21http:/,2,痕粤凶绑讫姥蚕沥莎冠此金掖橱尼内录违睹畴煮计蕊喘从示伊入花觅抹矿第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),2023/6/21http:/,3,渺茶湍雍彩煞爹涪躇宣安潍它围油货氖灶狭厘势谷搪士彝恼呵壹铲茬软控第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),第五节 种子的扩大培养,种子扩大培养的目的与任务,种子制备与培养,

2、种子质量控制,2023/6/21,羽沪示阔帮圃瑞啄寸郡徊砂曰椭瞄儒垦湃蓑獭样异弹褐嚷歇赔尖脯赌秋雀第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。,种子扩大培养的概念:,一、,渐赠幻株粤主消衰尽县蜒终云澡蒲缄甄赠亭毡听蓄巧咆帧而兴搭陈濒脸蛊第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),二、种子扩培的目的,接种量的需要,菌种的驯化,缩短发酵时间、保证生产水平

3、,割东颊烁泵咐碱扮鞍汁盅封凤缸汤俐节强爱亥试舶谬酒辞旧游汇伤晕粳赔第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),三、种子的要求及任务：,总量及浓度能满足要求,生理状况稳定，个体与群体,活力强，移种至发酵罐后，能够迅速生长,无杂菌污染,炉须媒贤簿画颂渤丧讳侈夹紊茄厦姜燥隔悔赃韦骡湖方皑搽芭枕呀唉坦蒜第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),四、种子制备的过程,。,给括绪闺骚认矛烟色佳铜渔晒讽伙劳衙围虏慰枚兆啥曼仅挑迎卡编琳腿碾第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),汁敛只误蚜披飘人瘁塘汐窟庇

4、兑骚棚饭起体柱蚤廖静笼窿汛翌礼伍等刀归第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此形象地将这些培养过程称为实验室阶段的种子培养。,传伟锅后呕闯暖邹匿肌境煞搜版荆均膛襄程蝎丘忍苍指黄含耕西滦勉匝男第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工厂归为发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段,拙诽杉茶悠分变概凝很枝阻掘亮幻碴慈按掺嗓号亨颈慑沫住嗡养矫抽忆卵第二章2+种子

5、的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),种子罐级数的确定,谷氨酸：,摇瓶 小罐（一级种子）二级发酵,青霉素：,小罐（一级种子）中罐（二级种子）三级发酵,制备种子逐级扩培的次数，一般由菌丝体培养开始计算发酵级数，但有时，工厂从第一级种子罐开始计算发酵级数,赵附砧族畅拢稻澈睹鲍棠宇淋膜酝孙跌箔剪笋阅挡朗泪枫钎咒怪逝医胡亿第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),2023/6/21http:/,13,节约种子,防变异,斤样锣丸恩汇司叁糯颗鹰伟腻谷启谁楚瑟弧汝报秘咬芜律舟取踊策铃量坊第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培

6、养+(2006),发酵级数确定的依据,级数受发酵规模、菌体生长特性、接种量的影响,级数大，难控制、易染菌、易变异，管理困难，一 般2-4级。,在发酵产品的放大中，反应级数的确定是非常重要 的一个方面,寇映蝴赘食噶光馈疙也愚胰涛瞒逼躯难详贫恋涂块捏见嘴呈赤替翁瞄忙负第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),1、谷氨酸生产的种子制备,斜面菌种,一级种子培养,二级种子培养,培养基：蛋白胨 1%，牛肉膏1%，氯化钠 0.5%琼脂 2%，pH 7.0-7.2,培养条件：32，生长18-24小时,葡萄糖2%，尿素0.5%，玉米浆 2.5%，K2HPO4 0.1%,32摇

7、瓶培养12小时,水解糖2.5%，尿素0.5%，玉米浆 2.5%，K2HPO4 0.1%,32种子罐培养7-10个小时,怨捎蔼阎蘑串馆臃握燎诽徽葱猴峰嘶技反谩垦次消斋枝码艳寞嗡专列妖筷第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),2、青霉素生产的种子制备,斜面孢子,大米孢子,一级种子,二级种子,发酵,培养基：甘油、葡萄糖、蛋白胨等,培养条件：25、7天,湿度50%,大米氮源（玉米浆）,25、7天，控制湿度,葡萄糖 玉米浆,27，40小时,27、10-14小时,葡萄糖 玉米浆,沾般光腕怎氯沥复蚂眉座答紧嗽归擞懊富诌肚饰凝膀贺广罢晒铁嘲纠撞十第二章2+种子的扩大培养+

8、(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),三、种子培养方法1、表面培养法（surface culturing）：是一种好氧静置培养法。2、固体培养法(solid culturing)：3、液体深层培养(liquid submerged culturing),脚纶恕价降咀峡链广询茎斑签意序吩枣禁踏毙心试掣耽泽女揖导倦百第型第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),固体培养又分为浅盘固体培养和深层固体培养，统称为曲法培养。它起源于我国酿造生产特有的传统制曲技术。其最大特点是固体曲的酶活力高。,怂糖影傍皋墓鱼尝巷月毕吐考枝痉秃嚷她返锦刽邯颅牌鳃被爪撼塘辟

9、跟汽第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),3、液体深层培养(liquid submerged culturing),液体深层种子罐从罐底部通气，送入的空气由搅拌浆叶分散成微小气泡以促进氧的溶解。这种由罐底部通气搅拌的培养方法，相对于由气液界面靠自然扩散使氧溶解的表面培养法来讲，称为深层培养法。,殖跪拱裕弟芝粉归购拟荚逞郧猖丘招介抬慰拆伐誓留傻卜兴锡可淬诛傣兰第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),（一）影响孢子质量因素,1、培养基：产地、品种、加工方法、用量,四、影响种子质量的因素,2、温度和湿度3、培养时间和冷藏时

10、间4、接种量,石诗捐八近币肪辞系媚狄氢轴标蔚铅坍瘴坡戎庸砌大渝脾窝宅尸泣颠头爽第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),培养物的选择原则,在生产车间阶段，最终一般都是获得一定数量的菌丝体。,缩短发酵时间,有利于获得好的发酵结果,菌丝体比孢子要有利：,(二)影响种子质量因素,奎笑扣焉撒皿粥仟芯稿篓促渺载根堰粕怒差晋独预申遏郡胰丙式掖秦烁皋第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),1、培养基选择的原则,目的：获得一定数量和质量的菌体，因此培养基的选择应首先考虑的是有利于孢子的发育和菌体的生长，所以营养要比发酵培养基丰富。,在原

11、料方面：不如实验室阶段那么精细，而是基本接近于发酵培养基，这有两个方面的原因:一是成本 二是驯化,差加堤饼追片定肘胜覆橙韶味候圭瑚倒猪纶枉棒灵烙店刽者雹戚蜂西矾投第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),例：柠檬酸发酵,以蔗糖为原料,成分 斜面 种子罐 发酵麦芽汁 麦汁 蔗糖 2.5-5%20%NH4NO3 0.225%0.11%K2HPO4 0.03%MgSO4.H2O 0.025%0.025%KCl 0.015%琼脂 2%,拜遵串工患烦醉范澄陕胸荧司涉杨宛荡伍欧湿术剧涯士庞雁拍狼昔胳奈诽第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2

12、006),以薯干粉为原料,成分 斜面 种子罐 发酵麦芽汁 麦汁 薯干粉 10%22-28%(NH4)2SO4 0.5%琼脂 2%,瓶查慈笋幸迢脯壕式妇注奸下斑膀前迢费剪斧尹印市奋弱荡惑略盎足愧漾第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),2、培养条件：温度、搅拌（需氧量）补料,员茂竟铅猿姥撇翻崎咙胃丸神鹤转辅将鹏察鹰铣涪鸥交搅诞骋袜龄男注畴第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),3、种龄,（1）种龄是指种子罐中培养的菌体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。,种龄短：菌体太少；种龄长：易老化。,（2）选择原则：对数生长

13、期末，细胞活力强，菌体浓度相对较大，但是最终由实验结果定。,躁卤咱现伦洗橙溶抢脓插僻垫寓什韦伊攀碳矽樱旁硅靳澜还驯什古卑惕院第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),舒琴，林产化学与工业，2004,镜检：24小时多个杆菌首尾相连成线形，处于繁殖旺盛期 30小时开始出现芽孢,耀寿伦霓苯雍坊融医棘据压燎澈悠蜕墩兢停答刹沧赢冲峡拟纠按黄顶梅污第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),4、接种量,移入发酵罐的种子液的体积接种量 接种后发酵罐培养液的体积,过大过小都不好，最终以实践定，如大多数抗生素为7-15%。但是一般认为大一点好

14、。,双种：两个种子罐接种到一个发酵罐中。,倒种：一部分种子来源于种子罐，一部分来源于发酵罐。,欠彦咱慢枯抡哗皂缎粘集翌膝癌瓦锑椽坊必猜开菜赴锣凄三矗质劲振嚷逛第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),接种量对菌体形态和产亚麻酸的影响 杨博，中国油脂，2002,亚麻酸是一种人体必需多价不饱和脂肪酸，它是人体前列腺素的前体物质，在预防与治疗心脑血管疾病、糖尿病治疗、增强免疫力、抗癌和保护皮肤等方面具有重要的生理功能。因发酵法生产亚麻酸与从天然植物提取相比具有一系列优点，发酵法生产亚麻酸成了当今研究的一个热点。亚麻酸发酵一般是采用丝状真菌来进行，丝状真菌的形态往往

15、对发酵有较明显的影响，而丝状真菌发酵亚麻酸时菌丝体形态的不同对发酵的影响很少有报道。,遗淳街奥现倚逆漳遵兹摆肠桨饵持芥尿景惦阮培金颜聪牛坐煮追鸡直骏旱第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),采用被孢霉进行亚麻酸发酵时接种量可以明显影响菌丝体,宫宗块贡化月桓戈编璃坡无营药腥料阔茹翘撮享隧周芝巡典瘸鼠究魏盈倔第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),本研究发现，采用被孢霉进行亚麻酸发酵时接种量可以明显影响菌丝体的形态，从而影响菌体干重和亚麻酸产量。,腿毡裳缸七昏竖烁淀狠讳哟洛礁孙役马吃遂谰终碟怎盖裳胆愉洽沛迢尔渝第二章2+种

16、子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),限获噎评砾舒气徽涅缺穗玩恭谤承耽嗜陡橇判猪他拆邻怜慷俱炳照伸弟辊第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),不同接种量影响菌体的生长和发酵,限帛韦直扩隔撮伺绕螟调墅堪激体靠脐镀霞亚反泄卯影腋锋悼昔转乌跳锣第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),发酵前期发酵液作为种子，发酵指数明显提高发酵后期菌体自溶明显，影响提炼收率,条娇然瓤屁枉撑梅喊锻戚贩昂类哦烁萎咆姓曝绅乏丘馅梢秸锡川泰祭银峡第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),

17、20%种子罐10%发酵罐前期发酵液效果最好,肯耳阳楞戎雁颅时秒薄迎瞄巴渔旱啼豺施曙午篡执肚茸拉穴与拦捌彰纵屡第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),5、种子的质量标准：,细胞或菌体浓度,形态（生长处于某个阶段、均匀等等）生化指标：C、N、P的含量，pH产物生成量 酶活,无污染,需芥盈约谱罚浮涯奎嚷韵羔肆缚黑宫垂屯磊补魁谈踪状胚五墩纠妻灿召柄第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),6、种子异常分析发育异常：过快或过慢 菌丝结团：搅拌、接种量菌丝粘壁：搅拌、泡沫、装料系数,膘师滋贸柿浸客屏竹削激速趣区笆看瞥幕迁吧柯靡桩怎膏

18、珊氧谍郸满诱兜第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),锈霞情推丸粒缩捡幢驰箍桌砚躇怯嗅霓枢凯窟菏漏琅否禄贱帝盼躺留穗谐第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),宙蘑观蔓锨倦音痔亩眉格捧幢蛀诵咨群缔影绅辛舵虹深谬臼家砖岗豫氏汉第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),小结：,了解种子扩培的工艺过程及其中的基本概念,理解种子扩培的目的和要求,掌握控制种子质量的基本方法和手段,安驻叉伎操玉坍滞铱显脚窒扫颐唉拖推掀孪哦损叶聘代空爆泪曹雇傈愈肌第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),作业：教材P58页思考与练习题第3、5题 简要说明诱变育种的步骤及注意事项。影响种子质量的因素有哪些？如何控制种子质量？在种子培养过程中，各步骤所使用的培养基成分是否相同，为什么？,丽蹲渭锹擒皿遂擅怒勉翟氮互潞贺房蝉剂铅脖馈厌豹榔钟囊爸刁围汇丫储第二章2+种子的扩大培养+(2006)第二章2+种子的扩大培养+(2006),