基因工程的基本工具.ppt

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1、基因工程的基本工具,基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在_分子水平上进行设计和施工的，又叫做_,DNA,DNA重组技术。,（一）基因工程的基本工具,1.“分子手术刀”限制性核酸内切酶（限制酶）2.“分子缝合针”DNA连接酶3.“分子运输车”载体,1.“分子手术刀”限制性核酸内切酶（限制酶）,（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的_断开，因此具有_。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有

2、两种形式：_,磷酸二酯键,专一性,黏性末端和平末端。,2.“分子缝合针”DNA连接酶,(1)两种DNA连接酶（EcoliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较：相同点：都缝合_。区别：EcoliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的_末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合_末端，但连接平末端的之间的效率较_。,磷酸二酯键,黏性,低,黏性和平,3.“分子运输车”载体,（1）载体具备的条件：能在受体细胞中复制并稳定保存 具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。,（2）最常用的载体是_,它是一种裸露的、结构简单的、独立

3、于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链_分子。（3）其它载体：_,质粒,环状DNA,噬菌体的衍生物、动植物病毒,(二)基因工程的基本操作程序,第一步：目的基因的获取第二步：基因表达载体的构建第三步：将目的基因导入受体细胞第四步：目的基因的检测和鉴定,第一步：目的基因的获取,1.目的基因是指：_的结构基因 原核基因采取_获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有_法和_法。,编码蛋白质,直接分离,反转录,化学合成,概念：PCR全称为_，是一项 在生物_复制_的核酸合成技术,条件：_ 前提条件 _、_、_.,原理：_,方式：以_方式扩增，即_（n为扩增循 环的次数）,结果：,聚合酶链式反应,体外,特定DNA片段,DNA复制,一段已知目的基因的核苷酸序列,四种脱氧核苷酸,一对引物,热稳定DNA聚合酶（Taq酶）,指数,2n,使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增,(二)利用PCR技术扩增目的基因,第二步：基因表达载体的构建,组成：复制原点+启动子+目的基因+终止子+标记基因,