叶绿体中色素的提取和分离.ppt
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1、实验6:叶绿体中色素的提取和分离,马山县周鹿中学 陆保宗,二、实验原理,(一)叶绿体色素:1.叶绿素2.类胡萝卜素,叶绿素a叶绿素b,胡萝卜素叶黄素,3:1(阳生):1(阴生),2:1,3:1,叶绿素a、b的结构式,类胡萝卜素的结构式,(二)四种色素的化学性质,均为亲脂性亲水性,均不溶于水,而溶于有机溶剂,故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。极性大小:叶绿素b叶绿素a叶黄素胡萝卜素。根据相似相溶原理,在有机溶液中的溶解度:叶绿素b叶绿素a 叶黄素胡萝卜素。,(二)叶绿素的光学性质,叶绿素的吸收光谱,类胡萝卜素的吸收光谱,实验原理:,叶绿体中的色素是有机物,不溶于水,易溶于丙酮等有机溶剂中,所以用丙
2、酮、无水乙醇等能提取色素。层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂。叶绿体色素在层析液中的溶解度不同,分子量小的溶解度高,随层析液在滤纸上扩散得快,溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。所以用层析液来分离四种色素。,实验材料用具:,1、材料:新鲜的绿色叶片(如菠菜叶片)。2、仪器:干燥的定性滤纸,烧杯(100mL),研钵 玻璃漏斗,尼龙布(或棉花),毛细吸管,剪刀,小试管,培养皿盖,药勺,量筒(10mL),天平,镊子,铅笔,尺子。3、药品:丙酮,层析液,二氧化硅,碳酸钙。,实验过程:,1、提取叶绿素的步骤:(1)称:用天平称量5g除去叶柄的叶片(2)剪:越细越好,尽量去除叶脉等部分(3)加药品:加少量二
3、氧化硅,碳酸钙和丙酮(约5mL)快速充分研磨。,(4)磨:研磨要领是要用力压快速研磨。(5)过滤:用纱布(或棉花)、漏斗和试管,最后提取液置于试管中待用,及时用棉塞(或塞子)将试管塞严.,2、分离色素的步骤,制备滤纸条:将预备在试验桌上的滤纸条一端剪去两个角作标记,在距离这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。画滤液细线:沿铅笔线轻轻均匀地画一道线,用提取液反复划好几次,每次划完尽量吹干,不要弄破纸条。,层析分离叶绿体中的色素:将3mL层析液倒入烧杯中,注意将纸条画有滤液细线的一端置于烧杯中的层析液中,注意千万不要将滤液细线浸没在层析液中。观察实验结果:最后滤纸条上将分离出四条色素带,颜色从上往下
4、分别是橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色,四种色素分别是胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a和叶绿素b。,实验结果:,问题讨论:,1、加入SiO2、CaCO3的作用是什么?,二氧化硅的作用是使研磨更加充分、迅速;碳酸钙的作用是保护叶绿素不分解,2、将滤液放在试管中,为什么要及时用棉塞将试管塞严?,滤液含有丙酮,丙酮有毒,防止挥发,3、画滤液细线时重复画几次的目的是什么?,增加色素的含量,使分离后的色素带更加清晰,4.为什么不能让滤液细线触及层析液?,层析液会溶解色素使色素无法分离。,5.观察实验结果有什么现象?滤纸条上出现了几条色素带?每条色素带的颜色和排序如何?,滤纸条上将分离出四条色素带,颜色从上往下分别
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