若干 CIMMYT 小麦 HMWGS 的组成及其品质状.doc
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1、精品论文若干 CIMMYT 春小麦 HMW-GS 的组成及其品质状况分析研究王宝强 甘肃农业大学农学院,兰州(730070) E-mail:baoqiangand摘 要:本实验对 59 个 CIMMYT 春小麦的 HMW-GS 组成及其品质状况进行了分析研究, 为了给小麦品质遗传改良提供参考。HMW-GS 组成结果表明,在分析的 59 个小麦材料中, 检测到 Glu-A1 位点编码的 HMW-GS 有 3 种类型,分别是 1、2*和 Null,其中 Null 出现的 频率最高,为 50.85;Glu-B1 位点编码的 HMW-GS 有 16、9*、6+8、6+9、7+8、7+9、7+18、7+
2、9*、14+15、15+8、6+7+9、7+15+9*、14+15+9 共 13 种类型,其中 14+15 和 6+9 出现的频率最高,分别是 32.20和 30.51;Glu-D1 位点编码的 HMW-GS 有 14 种类型,分别是10、12、12*、2+10、2+12、2+12*、2.2+10、3+10、3+12、5+10、5+12、5+12*、2+5+12、2+10+12*,其中 10 出现的频率最高,为 25.42。共检测到 32 种 HMW-GS 组合变异类型, 其中(1,14+15,12)出现的频率最高,为 10.17。品质分析结果表明,59 CIMMYT 春 小麦综合品质较差,不
3、适合直接推广到大田生产,但有些优质亚基出现的频率较高,因而可 以做为改善甘肃省现有品种亚基组成状况的亲本材料。 关键词:春小麦,高分子量麦谷蛋白,品质1. 前言小麦是世界第一大粮食作物,同时也是我国的第二大粮食作物。提高小麦的产量和品质 的育种工作对解决粮食危机、提高人类的生活水平具有重要意义。目前我国的小麦产量有了 很大的提高,但品质总体上不如国外的一些品种,有些专用面粉几乎靠进口。因此我国的小 麦育种工作还有很大的潜力,但任务也很艰巨。经过我国几代的专家学者的努力,我国的小 麦品质有的很大的提高,但离高品质小麦的目标还有很长一段路。小麦籽粒蛋白质主要由球 蛋白、清蛋白、醇溶蛋白和麦谷蛋白组
4、成,其中醇溶蛋白赋予面团的延展性,麦谷蛋白使面 团具有弹性,小麦谷蛋白分只占面筋蛋白的 35左右,却对面粉的烘烤品质起着重要作用1,2。其中麦谷蛋白分为高分子量谷蛋白亚基( High Molecular Weight Glutenin Subunit, HMW -GS)和低分子量谷蛋白亚基( Low Molecular Weight Glutenin Subunit, LMW - GS)。高分子量谷 蛋白亚基(HMW-GS)基因分别位于第 1 同源群 1A、1B、1D 的长臂上(1AL、1BL、1DL), 表示为 Glu-A1、Glu-B1 和 Glu-D1,统称为 Glu-1 位点,其亚基组
5、成对小麦的生理生化特性 及品质尤其是烘烤品质有重要影响2,3,4。小麦的品质指标主要有千粒重、容重、籽粒蛋白 质含量、颗粒度、灰分、面团流变学特性等,其中流变学特性包括面团韧性、面团延伸性、 面团烘焙指数、烘焙能力、吹泡指数、最大压力值和吸水率。对小麦的高分子量麦谷蛋白亚 基及其品质状况进行研究是育种工作的重要辅助手段,可以提供参考,利于选育出更好的品 种。国际玉米小麦改良中心(CIMMYT)育成的春小麦,目前在国内主要是间接应用5,6, 这些 CIMMYT 材料不仅丰富了我国小麦的遗传基础,而且对西部适应性较好,在产量和品 质方面总体表现较我国的好,其中大多数品种具有优质 HMW GS5。因
6、此,本文对 CIMMYT 春小麦的高分子量谷蛋白亚基组成及品质进行研究分析,以期为这些材料在小麦品质改良中 的利用提供参考依据。- 10 -2. 材料与方法供试品种是采用甘肃农科院引进的 CIMMYT 春小麦,一共 59 份,于 2006 年在甘肃省 农科院种植的。小区面积 12 ,600 株/,重复 3 次。黄熟收获,室内放置 3 个月后,在 甘肃农业大学农科楼二楼作物遗传育种谷物品质分析实验室进行品质分析。本实验对 59 个 品种进行数字编号,以中国春和马奎斯作为 HMW GS 分析对照,永良 4 号为品质分析对 照。2.1 HMW GS 组成分析实验2.1.1 样品提取取样品籽粒各一粒,
7、称重并记录各自重量,然后在研钵中捣碎再倒入 1.5mL 写好编号 的离心管中。按 1:10(种子重 mg,提取液 uL)比例向向离心管中加入 50异丙醇提取液, 振荡混匀后放入 62.5水浴锅中水浴 30min,期间取出振荡 3 次,然后取出离心管置于室温 条件下提取 2h,最后在 10000rpm 下离心 10min,弃去上层清夜。至此第一次提取过程完成。第二次提取过程:同样按 1:10(种子重 mg,提取液 uL)比例加入 50异丙醇提取液, 振荡混匀后放入 62.5水浴锅中水浴 30min,期间取出振荡 3 次,然后取出离心管置于室温 条件下提取 2h,最后在 10000rpm 下离心
8、10min,弃去上层清夜。按 1:7(种子重 mg,提取液 uL)比例加入 HMW GS 样品提取液,振荡混匀后放入62.5水浴锅中水浴 2h,期间取出振荡 4-5 次。然后取出离心管,将其在 10000rpm 下离心10min,后取出于 4冰箱中保存待用。2.1.2 制胶将制胶所需的器材和试剂准备好。表 1 为分离胶贮液和浓缩贮液的配比。第一步:灌分 离胶。将 40丙烯酰胺(Acr)、2甲叉双丙烯酰胺(Bis)、3M 三羟基胺基甲烷(Tris)(pH=8.8)、蒸馏水、10十二烷基硫酸钠(SDS)分别按比例加入 50mL 烧杯中,各溶液 的量见表 1,并混匀。然后加入 10过硫酸氨(APS)
9、110.6uL,最后加入四甲基乙二胺(TEMED)33uL,拌匀后迅速灌到事先准备好的玻璃板中,玻璃板要倾斜一定的角度以防 止胶中出现气泡,灌好后立即在胶的表面加正丁醇压平。室温下静置 30min,使胶充分聚合。第二步:灌浓缩胶。用滤纸先吸干正丁醇。将 40Acr、2Bis、0.5M Tris(pH=6.8)、 蒸馏水、10SDS 分别按比例加入 50mL 烧杯中,充分混匀,再先后加入 10APS、TEMED, 混匀立即倒在分离胶上面,迅速插入样品梳。室温下聚合 15min 后拔出样品梳,用电极缓冲 液冲洗每个点样孔。表 1分离胶贮液和浓缩贮液的配比分离胶贮液浓缩贮液40Acr6mL1mL2B
10、is3.2mL0.533mL3M Tris(pH=8.8)3.13mL不加0.5 MTris(pH=6.8)不加2.765mL10SDS276uL110.2uL蒸馏水11mL6mL10APS110.6uL82.6uLTEMED33uL28.0uL2.1.3 SDS-PAGE 及 HMW GS电泳时电流为 20mA 的恒定电流,功率为 50W,时间是 15.5h,每个点样孔各点 8-10uL 的样品提取液。仪器采用的是北京六一仪器厂生产的 DYY-24B 型垂直电泳槽和 DYY-12 型电脑三恒电泳仪。染色用 1烤马斯亮蓝溶液,配上 10三氯乙酸溶液。以中国春(Null,7+8,2+12)和马奎
11、斯(1,7+9,5+10)作为 HMWGS 组成分析对 照,亚基命名按 Payne 和 Lawen7(1983)的命名系统进行。2.2 品质状况分析实验面粉制备: 由法国Tripette & Renaud 公司生产的CD-1 实验磨粉机按“二皮二心”方法磨 制,以14% 湿基加水润麦, 润麦时间因小麦质地而定, 软麦24 h, 硬麦40 h。其中出粉率=面粉 总重/(面粉总重+麸皮重量)。蛋白质含量(% ) : 采用瑞典Perton 公司生产的Inframatic8600 近红外仪测定14% 湿基 的蛋白质含量。面团流变学特性: 采用法国T rippette & Renaud 公司的吹泡-稠度
12、粉质仪测定。恒量吹 泡实验测定了面团的弹性、面团的延伸性、面团变形功。其中,烘焙能力为恒量吹泡时气泡 变形所做的功,反映面筋的强度,280EJ以上的是强面筋,220EJ以下的是弱面筋。表2为面 团流变学特性中各指标的字母代号。表2 各指标及其字母代号字母代号P(mm)L(mm)G()W(EJ)IePrmaxWA表示指标面团韧性延伸性吹泡指数烘焙能力弹性指数最大压力值吸水率3结果分析3.1 HMW GS 组成结果分析3.1.1 供试品种的 HMW GS 等位变异及频率表 3 为 59 个供试品种 Glu-1 位点编码的 HMW GS 等位变异及频率。从表中可以看出,Glu-A1 位点编码的 HM
13、W-GS 有 3 种类型,分别是 1、2*和 Null,其出现的频率分别是 42.37、6.78、50.85,Null 的为最高;Glu-B1 位点编码的 HMW-GS 有 13 种类型,分别为16、9*、6+8、6+9、7+8、7+9、7+18、7+9*、14+15、15+8、6+7+9、7+15+9*、14+15+9, 其中 14+15 出现的频率最高为 32.20;Glu-D1 位点编码的 HMW-GS 有 14 种类型,分别是10、12、12*、2+10、2+12、2+12*、2.2+10、3+10、3+12、5+10、5+12、5+12*、2+5+12、2+10+12*,其中 10
14、出现的频率最高为 25.42。近年来,许多学者研究结果说明,Glu-A1 位点编码的 1、2*,Glu-B1 位点编码的 7+8、14+15,Glu-D1 位点编码的 5+10、5+12 亚基 对小麦的加工品质贡献很大,被称为优质亚基8,9,10,11。本实验检测优质亚基 2*、14+15、5+10,尤其是 14+15 出现频率非常高,竟达 32.20,说明本供试品种可以用于亚基改良当中。另外,还有 6+7+9、7+15+9*、14+15+9*三种特别的亚基。CK112345678910 1112 13 14151617 CK2CK1 1819 20 2223 24 25 26 27 28 2
15、9 3031 32 33 34 35 36 3738 CK2CK118 19 20 21 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 4950 51 52 53 54 55 56 57 CK2CK158 59CK2图1 59个供试品种HMW GS电泳图谱 其中CK1是中国春、CK2是马奎斯,其它编号对应的品种参见附录表7表 3 供试品种 Glu-1 位点编码的 HMW GS 在不同位点上的变异及频率Glu-A1Glu-B1Glu-D1亚基品种数频率()SubunitNo.ofVarietyFrequency亚基品种数频率()SubunitNo.ofVarietyFrequenc
16、y亚基品种数频率 ()Subunit No. of Variety Frequency12542.372*46.78Null3050.851611.709*11.706+846.786+91830.517+8711.867+923.397+1811.707+9*11.7014+151932.2015+823.396+7+911.7014+15+911.707+15+9*11.70101525.4212813.5612*11.702+10915.252+12610.172+12*11.702.2+1023.393+1011.703+1211.705+1023.395+1211.705+12*23
17、.392+5+1223.392+10+12*35.093.1.2 供试品种的 HMW GS 组成变异类型及出现频率表4为供试品种Glu-1位点编码的HMW GS组合类型及频率。从表4中可以看出,在59个 供试材料中一共检测到32HMW GS组合类型,其中(1,14+15,10)、(1,6+9,10)、(Null,6+9,2+10)出现频率较高,分别为10.17、8.47、8.47。含单个位点编码的 优质亚基1、2*、5+10或14+15的材料有38个,占64.41;同时含有两个位点编码的优质亚 基如(1 ,5 + 10)、(14 + 15 ,5 + 10)、(2*,5 +10) 、(1,14+
18、15)、(2*,14+15)的材 料有14种,占23.73;同时含有三个位点编码的优质亚基如(1 ,14 + 15 ,5 + 10)和(2*,14+15,5+10)的材料没有。另外,还检测出一些特殊组合,如(1,9*,2+10)、(1,7+18,12)、(1,16,3+10)、(2*,6+7+9,10)、(2*,7+8,12)、(2*,14+15,5+12*)、(2*,14+15,10)、(Null,6+9,2+10+12*)、(Null,7+9*,2+10)、(Null,14+15+9,2+12)、(Null,15+8,2+5+12)、(Null,7+15+9*,12*),但他们出现频率都很
19、低。综合的 看,CIMMYT春小麦的优质亚基出现频率很高,说明在培育优质小麦时,可以很好的利用 CIMMYT春小麦。表4 供试品种Glu-1位点编码的HMW GS组合类型及频率序号亚基组合品种数频率()No.SubunitcombinationsNo.ofVarietyFrequency序号亚基组合品种数频率()No. Subunit combinations No. of VarietyFrequency11,6+8,3+12117Null,6+9,2+1058.471.7018Null,6+9,2+12*11.7021,6+8,12219Null,6+9,5+12*11.703.3920N
20、ull,6+9,2+10+12*35.0931,6+9,10521Null,6+9,2.2+1011.708.4722Null,7+8,2+1223.3941,6+9,12223Null,7+8,2+12*11.703.3924Null,7+9*,2+1011.7051,7+8,12325Null,14+15,2+1021.705.0926Null,14+15,2+1213.3961,7+9,10227Null,14+15,5+1023.393.3928Null,14+15,2.2+1011.7071,9*,2+10129Null,14+15,2+12*35.o91.7030Null,7+15
21、+9*,12*11.7081,14+5,10631Null,14+15+9,2+1211.7010.1732Null,15+8,2+5+1211.7091,14+15,1211.70101,7+18,1211.70111,16,3+1011.70122*,6+7+9,1011.70132*,7+8,1211.70142*,14+15,1011.70152*,14+15,5+12*11.7016Null,6+8,2+1211.703.2 品质分析结果表 5 为 59 个供试品种各品质指标分析结果,具体分析如下:从表 5 中可以看出变异系数为 9.83,说明供试品种间的千粒重的差异不大,变异幅度
22、为 30.76-56.86g,平均千粒重为 47.69g。与对照永良 4 号相比较,59 个材料中大于永良 4 号 的有 52 个品种,占 92.86。其中最大的是 53 号品种 CIGM93.300,千粒重为 56.86g,说 明该品种籽粒较大,可以作为选育大粒型品种的亲本材料。容重是单位体积小麦籽粒的重量,是商品小麦定等分级的一个重要指标,受籽粒形状及 饱满程度影响,与出粉率呈正显著相关,容重越大出粉率越高12。从表 5 中可以看出容重 间差异小,变异系数只有 3.04,变异幅度为 722-868 g/L,平均容重为 778g/L,较大,但略低 于对照的 806g/L;与永良 4 号相比,
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