紫外分光光度法测定宁心益智胶囊中总皂苷含量.doc

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1、精品论文推荐紫外分光光度法测定宁心益智胶囊中总皂苷含量程贝，刘友平，石宇华，王继森，梁加贝成都中医药大学药学院，成都（611137）E-mail：chengbei0579摘要：目的：建立紫外分光光度法测定宁心益智胶囊中总皂苷含量的方法。方法：采用大 孔吸附树脂法除去干扰成分，以黄芪甲苷为对照品，用 5 %香草醛冰醋酸溶液和高氯酸为显色剂 ,测定波长为 544nm 。结果：在 9.05030.167 ug/ml 范围内黄芪甲苷吸收度 A 与浓度 线性关系良好，相关系数 r=0.9998 ；平均回收率为 99.48 % , RSD 为 2.61%( n = 6) 。结论：本法简便 ,准确 ,灵敏度

2、高 ,重复性好 ,可用于宁心益智胶囊的质量控制。 关键词：紫外分光光度法，宁心益智胶囊，总皂苷，含量测定，大孔吸附树脂宁心益智胶囊由人参、黄芪、五味子、龟甲、玉竹、远志、石菖蒲、益智、木香、甘松10 味中药组成，具有补气养阴，宁心益智功效，临床用于神经衰弱表现为健忘，多梦，心 烦，头晕，身倦乏力者。在处方中，黄芪、人参、远志、玉竹等多味主药的有效成分主要为 皂苷类成分，所以建立该制剂总皂苷含量的测定方法，能有效地控制本品的质量1。本文采用 D101 大孔吸附树脂除去干扰成分，以黄芪中有效成分黄芪甲苷为对照品，用5 %香草醛冰醋酸溶液和高氯酸为显色剂23，对宁心益智胶囊中总皂苷进行了含量测定，

3、结果表明，本法简便,准确,灵敏度高,重复性好,可用于宁心益智胶囊的质量控制。1. 仪器与材料UV1100 紫外可见分光光度计（上海天美科学仪器有限公司），BP211D 电子天平（十 万分之一，德国 Sartouris 股份有限公司）；宁心益智胶囊（重庆东方药业股份有限公司提供， 规格：0.45g/粒，批号：040501、040502、040503）；黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检 定所，供含量测定用，批号 0781-9503）；其他试剂均分析纯（成都化学试剂厂）。2. 大孔吸附树脂洗脱条件考察2.1 对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照适量，加甲醇制成每 1ml 含黄芪甲苷 1.8mg 的

4、溶液，即得。2.2 洗脱条件的考察取本品内容物，研细，取 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50ml，密塞， 称定重量，超声提取 30 分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足损失的重量，摇匀， 滤过，精密取续滤液 10ml，共 3 份，挥去甲醇，残渣加水 10ml 使溶解，通过 D101 大孔吸附 树脂柱（内径 1.5cm，长 20cm），以水 50ml 洗脱，弃去水液，再用 30%乙醇 50ml 洗脱，再 用 90%乙醇 50ml 洗脱，分别收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至 10ml 量瓶中， 加甲醇至刻度，摇匀。分别取 30、90%乙醇洗脱液及对照品溶液各 80 l

5、于具塞试管中，水浴蒸干，按“3.4” 项下自“精密加入 0.2ml 5%香草醛冰醋酸溶液”起，操作。测定这 4 种洗脱液中总皂苷含量（%） 分别为 0.04%、2.61%。结果表明，用 30%乙醇洗脱时总皂苷基本无损失，90%乙醇能洗脱 下总皂苷。故确定先用水、30%乙醇洗脱，除去对测定有干扰的成分；90%乙醇洗脱液进行 紫外测定。- 4 -3. 含量测定的考察3.1 供试品溶液的制备取本品内容物，研细，取 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50ml，密塞， 称定重量，超声提取 30 分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足损失的重量，摇匀， 滤过，精密取续滤液 10ml，挥去甲醇

6、，残渣水 10ml 使溶解，过 D101 大孔吸附树脂柱（内 径 1.5cm，长 20cm），以水 50ml 洗脱，弃去水液，再用 30%乙醇 50ml 洗脱，弃去 30%乙醇 洗脱液，继用 90%乙醇 50ml 洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至 10ml 量 瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。3.2 阴性供试品溶液的制备取除黄芪、人参、远志、玉竹、五味子外的龟甲、石菖蒲、益智、木香、甘松等药材， 按本品制备工艺制得阴性样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性供试品溶液。3.3 最大吸收波长的确定分别精密量取对照品溶液（1.81mg/ml）、供试品溶液、阴性供试品溶液各 80 l 于具

7、塞 试管中，水浴蒸干，加入 5%香草醛冰醋酸溶液 0.2ml，高氯酸 0.8ml，置 70水浴中分别加 热 15 分钟，取出放冰水浴中冷却 23 分钟，加入冰醋酸 5ml，摇匀，以相应试剂作空白， 照分光光度法（中国药典2005 年版一部附录 VA）项下试验，于 400nm700nm 范围内 进行光谱扫描，光谱扫描图见 1。结果对照品溶液及样品溶液的最大吸收波长均为 544nm， 阴性供试品溶液的吸收度小于 0.03，阴性无干扰。图 1 样品、对照及阴性样品的光谱图3.4 标准曲线的制备精密量取对照品溶液（1.81mg/ml）30、40、60、80、100l 于 5 支具塞试管中，水浴蒸 干，

8、分别精密加入 0.2ml 5%香草醛冰醋酸溶液、0.8ml 高氯酸，密塞，摇匀，于 70水浴恒 温加热 15 分钟，取出后立即用冰水浴冷却 23 分钟，加入冰醋酸 5ml，摇匀，以相应试剂 作空白，照比色法，在 544nm 的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标， 绘制标准曲线。回归方程为: Y=0.0304X-0.1186R =0.9998。结果表明，在 9.05030.167 ug/ml 范围内，吸收度 A 与黄芪甲苷浓度线性关系良好。3.5 精密度试验精密量取对照品溶液 80l，按照拟定的方法，测定重复测定 5 次，结果，对照品吸收度 的相对标准差（RSD）为 1.06%，表

9、明仪器精密度良好。3.6 重复性试验取同一样品 5 份，按照拟定的方法，测定总皂苷含量，结果其相对标准差（RSD）为 1.57%， 具有较好的重复性。3.7 稳定性试验取同一供试品溶液，按照拟定的方法，分别于 0、10、20、30 分钟时测定吸收度。结果 其相对标准差（RSD）为 0.95%，样品在显色后半小时内稳定。3.8 加样回收率试验取已知含量的同一批胶囊内容物1g，共取6份，精密称定，分别精密加入对照品溶液(26.43mg/ml)1ml，按照拟定的方法测定总皂苷含量，计算回收率，结果见表1。试验称样量(g)号样品含量(mg)表1 黄芪甲苷加样回收率试验测得量(mg)回收率(%)53.4

10、02299.7753.440496.1554.7288103.1755.9433101.2854.273097.0653.560699.45加入量(mg)平均回收 率(%)RSD(%)11.024021.061731.040241.105151.084161.033227.0326.4328.0326.4327.4626.4329.1826.4328.6226.4327.2826.433.9 样品的测定分别取3批样品，按照拟定的方法测定总皂苷含量，结果批号为040501、040502、040503样品中总皂苷含量分别为12.73mg/粒、11.86mg/粒、13.04mg/粒。4. 讨论4.1

11、 试验表明，制剂中其他成分对测定总皂苷条件下的显色干扰较大，D101 大孔吸附树 脂对本制剂所含皂苷类成分具有较好的吸附和解析性能，能除去其干扰成分，得到满意地测 定的结果。4.2 香草醛-高氯酸是皂苷常用的一类显色剂。本实验对总皂苷的显色条件进行了考察， 结果显色温度为 70，显色时间为 15 分钟时，对照品与样品吸收度均达到最大值，两者最 大吸收波长为 544nm。4.3 在处方中，人参、黄芪含四环三萜皂苷，远志含五环三萜皂苷，而玉竹含甾体皂苷， 它们所含的皂苷结构有较大的差异。选用黄芪甲苷为对照进行测定，能否完全代表本品的总 皂苷含量还需进一步探讨。4.4 笔者根据中药复方有效组分与有效

12、成分相结合的质量控制思路，测定了宁心益智胶 囊中总皂苷和五味子甲素的含量1，能较全面有效地控制复方制剂的质量。参考文献1 程贝，王继森，石宇华，等 . HPLC 法测定宁心益智胶囊中五味子甲 素含量 EB/OL. 2 过科家，文红梅，樊天宇，等. 固相萃取-比色法测定扶正注射剂中黄芪总皂苷的含量J. 南京中医药大学学报，2007，23（2）：1001023 江燕 ,晁若冰. 黄芪药材中黄芪甲苷和总皂苷含量的比较J. 华西药学杂志，2007 , 22 (3) : 322324Determination of the content of total saponins inNingxinyizhi

13、 capsules with UV spectrophotometryCheng Bei，Shi Yuhua，Wang Jisen, Liu Youping，Liang JiabeiChengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu（611137）AbstractObjective: To establish a method for the determination of the content of total saponins in Ningxinyizhicapsules by UV spectrophotometry

14、. Methods: The determination was performed using macroporousresin to remove interference ingredients, astragalosidestandard as control substance,andVanillin-perchloric acid as color-developing reagent, with the wavelength set at 544nm. Result: Astragaloside had a good linearity in the range of 9.050

15、30.167ug/ml (r=0.9998)，the average recovery rate was 99.48 %（RSD=2.61% ，n=6）.Conclucion: This method is simple，accurate，andreproducible, and can be used toeffectively control the content of total saponins in Ningxin yizhi capsules.Keywords：UV spectrophotometry，Ningxinyizhi capsules，Total saponins，Content determination，Macroporous resin