不同光质对毛脉酸模中蒽醌类成分的影响1.doc
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1、精品论文不同光质对毛脉酸模中蒽醌类成分的影响1马伟 1,王振月1,陈立超 1,2,王宗权 1,3,赵海鹏 1,王丹 11 黑龙江中医药大学药学院,黑龙江哈尔滨(150040)2 北京万全阳光医药有限公司,北京(100097)3河北以岭医药集团医药研究院,河北石家庄(050035)E-mail:wangzhen_yue摘要:目的:研究光质对毛脉酸模根次生代谢产物蒽醌类成分的影响。方法 通过红色、 黄色、绿色、蓝色滤光膜对毛脉酸模进行遮膜处理。采用高效液相色谱法对毛脉酸模根样品中的蒽醌类成分含量进行测定,进行了方差分析。结果:二年生黄膜处理中蒽醌类成分含量 显著性高于处理组及空白组。一年生空白组及
2、对照组中蒽醌类成分含量显著性高于处理组。结论:黄膜处理显著提高二年生毛脉酸模中中蒽醌类成分含量。 关键词:毛脉酸模;光质;蒽醌;HPLC植物生物活性成分绝大多数为植物的次生代谢产物。植物的次生代谢产物是植物在长期 进化中与环境相互作用的结果,在植物提高自身保护和生存竞争能力,协调与环境关系上起 着不可替代的重要作用,其产生和变化比初生代谢产物与环境有着更强的相关性和对应性 1。因此研究环境因素对植物生物活性成分的影响和调控规律具有理论基础和可行性。光是植物生命活动重要环境因子之一,植物通过光合作用把光能转化成为化学能贮存起 来,为其生长提供能量。同时光还以环境信息的形式作用于植物,调节植物的分
3、化、生长和 发育,使其更好地适应外界环境。许多研究工作表明光质的不同,不仅影响植物的初生代谢 和生长状态而且会影响植物的次生代谢过程2 -3 。近年来,随着天然药物的开发日渐兴起, 天然植物资源日渐匮乏,如何提高植物次生代谢产物的产量是关系到天然药物的开发能否应 用于实际生产的关键环节。毛脉酸模 Rumex gmelini Turcz.为蓼科酸模属多年生宿根草本植物,广泛分布于黑龙江省 大小兴安岭及张广才岭等地区,是黑龙江省、吉林长白山地区重要药用资源植物,以根 入药,味甘,性寒,有清热解毒、凉血止血、通便利尿之功,民间以治疗癣病或止血著称 4-5。 化学成分分析结果表明,根中含有白藜芦醇及白
4、藜芦醇苷等二苯乙烯类成分,酸模素,大黄 酚、大黄素等蒽醌类成分及黄酮类化合物6,7。1. 仪器与材料美国 Waters 高效液相色谱仪(Waters 2695 型泵,2996 型二极管阵列检测器,Empower 色谱工作站); Mettler 电子天平 AE 240;ZK-82B 型真空干燥箱(上海市实验仪器总厂)。 大黄素、大黄酚苷(大黄酚-1-O-D-葡萄糖苷)、大黄酚、大黄素甲醚均由中国药品生物制 品检定所提供。毛脉酸模根样品采于黑龙江中医药大学药用植物园。光质处理组中,红色、 黄色、绿色、蓝色滤光膜其相对光强为全光照的 53、60%、50、52,黄色滤光膜遮 透明膜后相对光强为全光照的
5、 53,对照组相对光强为全光照的 51。使处理组相对光强 在 5053之间。甲醇,色谱纯,美国 DIKMA 试剂公司提供;磷酸,分析纯,天津市天河化学试剂厂出 品;水,娃哈哈纯净水。2. 方法与结果1本课题得到国家自然科学基金项目(30270156)的资助。-10-2.1 样品处理:2004 年 7 月 1 日开始对当年生及一年生毛脉酸模植株进行遮膜处理。遮膜处理的在四 周靠近地面处留有通风空隙,并依照空白组的水分状况适时浇水。2.2 样品采集:每隔 15 天采样 1 次,每个处理组采样 9 株,采样 5 次。2.3 色谱条件:Planetsil C18 分析柱(5m,200 4.6 ),预柱
6、 Phenomenex ODS-C18(43.0 ); 流动相:流动相 A 为甲醇,流动相 B 为水(磷酸调 pH 为 2.0);线性梯度洗脱条件:流动 相从甲醇 30%到 100%甲醇,时间为 050 min;流速 1 mLmin-1;检测波长:254 nm ; 柱温:40;进样量:20L。2.4 对照品溶液的制备:精密称取大黄酚苷、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量,溶于甲醇配制成浓度依 次为 0.20,0.19,0.125,0.09mg/ml 的标准溶液,分别精密吸取标准溶液,注入高效液相色 谱仪,以进样量 X(g)为横坐标,峰面积 Y 为纵坐标绘制标准曲线,结果见表 1。表 1 样品
7、线性关系Tab1Calibration curves of references成分回 归 方 程相关系数线性范围(g)Activating Consistentregression equation(r)proportional band大黄酚苷ChrysophanY=3.1901042.205106X1.00000.01912.600大黄素EmodinY=8.0001043.328106X0.99980.0183.990大黄酚ChrysophanolY=7.0121033.992106X1.00000.0125.250大黄素甲醚PhyscionY=7.9731031.715106X0.99
8、990.0080.9452.5 供试品溶液的制备:毛脉酸模根部阴干后,粉碎过 80 目筛,在 50下从干燥至恒重。每个样品精密称取 0.5g, 置索氏提取器内加 50%乙醇 70ml 提取 4h,滤过,滤液置蒸发皿中蒸干。残渣用 25ml 甲醇 溶解并定容至刻度,此溶液再过 0.45m 的微孔滤膜,弃去初滤液取续滤液作为供试品溶液。2.6 精密度试验:取对照品溶液,连续进样 5 次,大黄酚苷、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚峰面积的积分 值,五次测定相对标准偏差1%。2.7 稳定性试验:取同一份供试品溶液,分别在 0h,2h,6h,18h 和 24h 进样测试,结果显示所检测的大 黄酚苷、大黄素、大
9、黄酚、大黄素甲醚,峰面积积分相对标准偏差3%。2.8 重复性试验:取同一样品粉末 5 份,每份精密称取 0.5g,按“2.5”制成供试品溶液,测定结果表明产物峰面积的积分值相对标准偏差3%,证明该方法重复性较好。2.9 加样回收率试验:精密称取已知大黄素含量的供试品粉末(80 目),定量加入大黄素对照品适量,制备供 试品溶液,每个处理进行 3 次,检测结果表明,回收率依次为 101.510.63%,99.33%,99.320.52%,99.400.31%,103.500.79%。2.10 样品含量测定:各供试样品按“2.5”制成供试品溶液,精密吸取各样品的供试液 20l 注入高效液相色谱 仪,
10、测得不同样品中的大黄酚苷、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量,见含量测定结果。3. 结果与分析分别对上述含量测定结果进行完全随机方差分析,结果如下见表 24。因素1(6水平)表 2 实验安排表Tab 2 Experiment arranging因素2(处理时间,5水平)Factor 2 ( days after treatment level 5)Factor 1 (level 6)15d30d45d60d75d红光 red lightT1T2T3T4T5蓝光 blun lightT6T7T8T9T10绿光 green lightT11T12T13T14T15黄光 yellow lightT16T
11、17T18T19T20对照 shadingT21T22T23T24T25空白 full sun-lightT26T27T28T29T30一年生根1-year-old roots表 3 均值及标准差结果表()Tab 3 Mean and standard deviation(%)大黄酚 Chrysophanol大黄素甲醚 大黄酚苷 Chrysophan大黄素 EmodinPhyscion空白 Fullsun-light对照 shading0.13790.0138a0.08870.0098ab0.02690.005a0.02370.0102ab0.21690.0493a0.1350.0199b0.
12、04210.0052a0.03480.0046ab红光 red light蓝光 blun light 绿光 green light 黄光 yellow light0.08080.0509b0.06910.0345b0.08860.0579ab0.07680.0517b0.01820.0037ab0.02250.0101ab0.01920.0042ab0.0140.0059b0.13190.0287b0.11320.0224b0.12220.0116b0.12340.0256b0.02580.0028b0.0340.0172ab0.03160.0153ab0.03250.0076ab表中数值为平
13、均值标准误差,不同字母代表有差异(P0.05)Datum are meansstandard deviation, different letters appear difference(P0.05)两年生根2-year-old roots表 4 均值及标准差结果表()Tab 4 Mean and standard deviation(%)大黄酚 Chrysophanol大黄素甲醚 大黄酚苷 Chrysophan大黄素 EmodinPhyscion空白 full sun-light对照 shading红光 red light0.27870.0523ab0.24680.0878ab0.16040
14、.0199b0.04730.0124a0.0360.0045a0.040.0094a0.37190.0675a0.29620.0827b0.36070.0812ab0.06030.0109b0.05570.0097ab0.05420.02ab蓝光 blun light绿光 green light0.23260.0462ab0.26780.0708ab0.03910.0117a0.03940.0165a0.32010.0535ab0.33050.0762ab0.05320.0114ab0.05020.0112ab黄光 yellow light0.2880.0823a0.04890.0059a0.
15、37670.05ab0.06310.0055a表中数值为平均值标准误差,不同字母代表有差异(P0.05)Datum are meansstandard deviation, different letters appear difference(P0.053.1 光质对一年生毛脉酸模根中蒽醌类成分含量的影响大黄酚苷含量(%)Content of Chrysophan0.220.180.140.1 0.060.02日光 0.25日光 遮荫遮荫 红膜 0.21蓝膜0.170.130.09 0.05 0.01大黄酚苷含量(%)Content of Chrysophan0.220.180.140 15
16、 30 45 6075 日光 遮荫绿膜0.20.160.120 15 30 45 60 75 日光 遮荫 黄膜0.10.080.060.040.020 15 30 456075 处理后天数(d)D ay s a f ter tr eat m en t ( d)00 15 30 456075 处理后天数(d)D ay s af te r tr e atm e n t ( d)图 1 不同滤光膜处理对一年生毛脉酸模根中大黄酚苷含量的影响Fig. 1 Effects of different films on the content of Chrysophan in roots of 1-year-
17、old Rumex gmelini T.大黄酚含量(%)Content of Chrysophanol0.4日光 遮荫0.35日光0.3遮荫0.3 红膜0.20.10015304560750.250.20.150.10.050蓝膜01530456075大黄酚含量(%)Content of Chrysophanol0.4日光 遮荫0.4日光遮荫0.3绿膜0.3 黄膜 0.20.20.10.1001530456075 处理后天数(d)D ays af ter tr eat m en t (d)001530456075 处理后天数(d)D ay s aft er t reat m en t ( d)
18、图 2 不同滤光膜处理对一年生毛脉酸模根中大黄酚含量的影响Fig. 2 Effects of different films on the content of Chrysophanol in roots of 1-year-old Rumex gmelini T.大黄素含量(%)Content of Emodin (%)0.050.04日光 0.045日光 遮荫遮荫 红膜 0.035蓝膜0.030.0250.020.0150.01大黄素含量(%)Content of Emodin (%)0.0601530456075 日光遮荫绿膜0.0050.0550.04501530456075 日光 遮
19、荫 黄膜0.04 0.0350.020.0250.015001530456075 处理后天数(d)Day s after treatm en t (d)0.00501530456075 处理后天数(d)Day s aft er t reat m en t (d)图 3 不同滤光膜处理对一年生毛脉酸模根中大黄素含量的影响Fig. 3 Effects of different films on the content of Emodin in roots of 1-year-old Rumex gmelini T.大黄素甲醚含量(%)Content of Physcion(%)0.060.045日
20、光 0.06日光 遮荫遮荫 红膜蓝膜0.0450.030.030.015大黄素甲醚含量(%)Content of Physcion(%)0.070.0550.040 15 30 45 6075 日光遮荫 绿膜0.0150.060.0450.030 15 30 45 6075 日光遮荫 黄膜0.025 0.010 15 30 456075 处理后天数(d)Day s af ter treat m en t (d)0.0150 15 30 456075 处理后天数(d)Day s after t reatm en t ( d)图 4 不同滤光膜处理对一年生毛脉酸模根中大黄素甲醚含量的影响Fig.
21、4 Effects of different films on the content of Physcion in roots of 1-year-old Rumex gmelini T.从图 1 可知遮荫和不同光质对一年生毛脉酸模根中蒽醌类成分的含量有一定的影响。遮 荫处理的毛脉酸模,在处理期内大黄酚苷含量均低于日光组(图 7)。红膜处理组使毛脉酸 模根中大黄酚苷含量随着处理组天数的增加含量下降越明显,处理 15、30d 其含量与日光 组相近(图 1)。蓝膜的整个处理过程中,毛脉酸模根中大黄酚苷含量都低于日光组,除15d 含量略高于遮荫组,其他处理时间含量均低于日光组(图 1)。绿膜处理与
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