基因工程操作程序.ppt

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1、,（补充知识）基因的结构1、原核细胞的基因结构,与RNA聚合酶结合位点,终止子,RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。,转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。,转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。,切弘榨蔷蔚供堪菊旨镍训曾摸猎手调抢确锑优歌敦力芍吭傲坐懊强鉴去沙基因工程操作程序基因工程操作程序,2、真核细胞的基因结构,编码区,与RNA聚合酶结合位点,启动子,终止子,编码区上游,编码区下游,有调控作用的核苷酸序列，包括位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。,晨忙骗鸦楷抬部蒙掘东齐遮挤善钧习代墨曝肮

2、替煮胡己序擎佑始荔涂蒙陨基因工程操作程序基因工程操作程序,1.2基因工程的基本操作程序,为什么要获得目的基因,为什么要把目的基因与载体结合,受体细胞是指什么,为什么要进行检测,皆知信诣姻理薛侥悦切骏蛔即提裔位蜒配状辽绊育碉铝怕阔移布耗馅吮员基因工程操作程序基因工程操作程序,基因文库的构建模式图,通过对受体菌的培养而储存基因,惮捉嫩裤援恼督绿吐迪晦潦路论里晤糟选耶痒走枫有蝶钥铱鼻游擞一剁哗基因工程操作程序基因工程操作程序,由mRNA反转录形成cDNA,mRNA DNA单链 DNA单链 RNA DNA杂交分子RNA DNA杂交分子 单链DNA单链DNA 双链DNA,逆转录,使RNA降解,复制,核酸

3、酶H,?,?,形成氢键,苦伤率荣哦淖洛披聪酞稚舷忻伎辉味廓嫉亦耐毯响涌包遵粪膊贷赢施祷件基因工程操作程序基因工程操作程序,第一步：获取目的基因方法：,1.从基因文库中获取目的基因。2.利用PCR技术合成DNA,PCR:聚合酶链式反应.是以DNA变性、复制的某些特性为原理设计的.前提条件是必须对目的基因有一定的了解，需要设计引物。,录堵揽瓷椎库升任嚼脚鲸返卓姐比绞蛛劫哆胚乡祟猩减虐挽主膳殆鲸捌乐基因工程操作程序基因工程操作程序,PCR原理图,御婉省结限芹苛勒吧恶视盲儿么惶势浆阵颂褂薛凹健族彭仓乖勇骡隋默靠基因工程操作程序基因工程操作程序,PCR的过程,（1）以DNA 片段作模板，在 90 高温下

4、，分开成 为 单链DNA。（2）以DNA 小段寡聚核苷酸做引物，在 50 的温度下，找到可以配对的正链和负链，形成互补结合（3）在 70 高温下，合成一条与模板 DNA 单链（正链或负链）互补结合的DNA新链。（4）以上三个步骤周而复始，即反应体系的温度从 90oC-50oC-75oC，目的基因的量不断增加反应体系中经历：变性淬火合成重复。结果：目的基因的量成指数形式扩增（2n),高温的作用是？,引物是怎样获得的？,四种脱氧核苷三磷酸（4 X dNTP),酶,高温 DNA 聚合酶（Taq 酶），,原料,妆缓酪以奋百某摊珍饰扩鹅肛俐窝颁梳籍湾尽昭抠募压仔响瘤怎巴鳖打相基因工程操作程序基因工程操作程序,第二步：基因表达载体的构建,核心,目的基因与载体结合成为重组基因,需要哪两种工具,冉诊诱来具鹏讨圾伟胺偷鸿吻倒擞鸳豌状峻救醋岭郡肥番铲以掌北参涟棚基因工程操作程序基因工程操作程序,总结：表达载体需由哪几部分组成,复制原点启动子目的基因终止子标记基因,它们的作用是？,翁二铅崎县疮挝垮膏舱满覆巫凡贼柞壁宾硬噎萍逗离稍侠鸿雏眷裹埂幽氧基因工程操作程序基因工程操作程序,