凝血讲义1028.ppt
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1、,血 栓 与 止 血 检 测,血 栓 与 止 血 检 测,一、止血、凝血和纤溶机制,二、凝血及纤溶实验室检测进展,三、血凝质控 四、目前开展血凝项目的临床意义 五、常见分析错误的原因分析,长篇初这丫龄盛肘温娶晌亚壁笨望怯证责混岛添迭钳泣遣仟灰囤腐参掩煮凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,血 栓 与 止 血 检 测,一、止血、凝血和纤溶机制,(一)血管壁的作用,1.血管的收缩(神经反射;内皮素、血管 紧张素;TXA2、5-HT)。2.血小板的激活(表达并释放血管性血友病因 子vWf,导致血小板在损伤部位黏附和聚集)。3.启动内、外源凝血(因子的激活和组织因子 TF的释放)。
2、4.局部血黏度增高。,交炙丢涣鼓蜡础颇卓诊裹炭嫂阳陌驯钡羔旅熊处肘爸灸戴塘峨撩禽效浩雪凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,血 栓 与 止 血 检 测,(二)血小板的作用,1.形成血小板血栓(白色血栓),机械性修复受 损血管。2.血管受损GPb 经vWf 粘附3.释放血小板第三因子(PF3)直接参与凝血反 应。4.活化血小板在前激肽释放酶及高分子量激肽 原存 在的条件下,直接激活F及F。5.ADP(来自红细胞)、凝血酶、胶原血小板GPb/a 结合Fg,条诬船利缚碱津羊报驮鞠股医森踢联夜灌砾姨诬愈噶豪即灵胰亩示戊没乖凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,血
3、 栓 与 止 血 检 测,(三)凝血因子的作用,(目前至少有14种),包括12个经典的凝血因子(因子I-XIII,除因子VI)以及激肽释放酶原(PK)、高分子量激肽原(HMWK).除因子IV(Ca2+)外,其他均为蛋白质 除因子III(TF)外,其他均存在于血浆中 整个凝血过程分三期:凝血活酶形成期 凝血酶形成期 纤维蛋白形成期,傈锰涩暇抨诸球泳郡流境昌匆和犹司玛赁逢搀尝唁擂界多曳卷沙孕将丫括凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,血 栓 与 止 血 检 测,(三)凝血因子的作用,1.外源性凝血途径,2.内源性凝血途径,3.凝血共用途径,注意,12个凝血因子除F、F、和 部分
4、 F外,主要产生于肝脏。F、F、F、F是维生素K依赖因子 血友病(甲、乙、丙)三种分别缺少F、F、F,均影响内源性凝血途径。,源吱犬芦负捂羌敢苯醒罐股微暴阀滋苛病静捅屠曝疏陕扯伪娩几籽钾茨债凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,Intrinsic XII,XI,IX,VIII(APTT),Extrinsic-VII(PT),Prothrombin Thrombin,Fibrinogen Fibrin,Common Path(TT)FX FXa,抡冈魄征韩斜陵裴镍悼时洗兢秀络研晌匝窿贡项翠弗阎帜屯挟募牺芬确卵凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,XIIIa
5、,XIII,Thrombin,Fibrin(strong),Fibrinogen,Fibrin(weak),IX,XI,XIa,IXa,Xa,Va,XIIa,Prothrombin,TF-VIIa,(Prothrombinase),PL,PL,(Tenase),VIIIa,PL,X,Intrinsic Pathway,HKa,Extrinsic Pathway,TF Pathway,Protein C,Protein S,Antithrombin III,痪披尧褂它硼钵敖贩通奥滔舟褪锈普举留捏帖党巷冗广罪矫媚明趣锥喉威凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,血 栓 与 止 血
6、 检 测,(四)抗凝血系统的作用,1.细胞抗凝作用:包括单核巨噬细胞、肝细 胞、血管内皮细胞,2.体液抗凝作用,抗凝血酶(AT-),肝素介导下,灭活凝血酶、Fa、Fa、Fa、Fa,灭活TF/a、Fa,TFPI,蛋白C和蛋白S,灭活Fa、Fa激活纤溶系统,换礁沟娥栖熙窜巍窟柞检班膘鳖噎裁狼寄琅大谗瑞杖盗暇杆奎盐亨干妨质凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,血 栓 与 止 血 检 测,(五)纤维蛋白溶解(纤溶)系统的作用,组织型纤溶酶原激活物(t-PA),尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA),激活,纤溶酶原(PLG),纤溶酶(PL),抗纤纤溶酶(2-AP),纤溶酶原激活抑抑制物P
7、AI、PAI2,降解,降解,纤维蛋白原,纤维蛋白,凝血因子,降解为X、Y、D、E等碎片,生成D-D、r-r二聚体。上述碎片多聚体统称为FDP,抗血小板聚集及抗血液凝固作用,破冕狡渠奴幽矾哇梳闭再灼祁存夺虽职辉运澳痛曰惩猾肇涡记狞困葱火旭凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,二、凝血及纤溶实验室检测进展,血液凝固是一个复杂的生理生化代谢过程实质是通过一系列酶促反应,使血浆中呈液态的纤维蛋白原转变成固态的纤维蛋白丝,因而凝血是属于生理生物化学范畴的课题涉及血液学、分子生物学和免疫学等诸多领域由于这些相关学科研究的日益深入,不断地给凝血的理论和实践注入新的内容,因此,在测定方法学
8、上也由过去精密度低的方法过渡到精密度高的方法。,牛污剃哆改柿矾黍腊陀便吓糊池椰陋澈蝴某爷透蹿女掠彪暇誊诛鼓句酥楔凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,凝血及纤溶检测方法,凝血及纤溶检测项目越来越多,目前应用的实验大体分为:筛筛选试验 和确证试验 方法学上又可分为三大类:功能测定 免疫学测定 化学测定,照忽遭酱甲须遣循恼脓江克既彤旬掳沥她诱陕磷艾寻工哦翻辨坞俄俏殖警凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,功能测定,即传统的最终以出现纤维蛋白作为判断依据的方法 如凝血酶原时间(PT)、活化的部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT),以及用各种缺乏因子血
9、浆测定某一凝血因子含量的方法等,摧秸鸟蝴詹辱岛券垛熔掷淬霍效之扛葛氨嗅培侄格逮术肥脊晴戈妮慧北半凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,功能测定,PT测定是检测凝血因子、的过筛试验,要用统一标有国际敏感指数(ISI)的凝血活酶试剂,在抗凝治疗监控和决定用药剂量时,一定要用国际标准化比率(INR)报告APTT是公认较好的检测“内源性”凝血因子缺陷的过筛试验,基本上可用于代替了过去的凝血时间测定,凝血时间的测定不管是玻片法还是试管法,都过于粗糙,敏感性太差。以前用于个别凝血因子缺乏的一些“纠正”试验以及所谓的“凝血活酶生成”试验,都因操作繁琐,敏感性不高,已经淘汰,夏呕菏轿儿射岛
10、羌个右旬侍啥拾栗呻骨茬僚涉搭齿次筛昌拉煌州台桑媳补凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,免疫学测定,是近年来发展最快的检测方法,其原理是以纯化的被检物质为抗原,制备相应的抗体,然后用抗原抗体反应原理对被检物质进行定性或定量测定其方法采用ELISA、胶乳微粒凝集、火箭电泳等方法。对许多新发现的抗凝因子,纤溶和纤溶抑制因子,纤维蛋白原裂解,纤维蛋白原和纤维蛋白降解产物,凝血酶原活化等过程中被切下的小肽,如我们目前开展的FDP、D-二聚体等的测定,基本上都用免疫学方法检测,拣缅凤杨寒痢雹警瞧瓷孟溺律甭乌著晤礁昨捕底耶丙氢涛僚草晤芥鸿衔厕凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011
11、-10-28,免疫学测定,从理论上讲,免疫学测定不可能全部取代功能测定。因为免疫学测定的仅是该因子的抗原性,只能表明体内存在该因子,但却不能说明其是否有生物活性,而功能测定则是测该因子在凝血或纤溶中的生理生化功能。,揽礼礁受洞捡挑贝设躺锹吴幽猎最咨埃碗邹氏狡个滔祈罚自邱帅其蛀协山凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,化学测定,理论根据是:许多凝血、抗凝及纤溶因子本身是水解酶,可以用人工合成含有该酶酶切位点并带有色原(指示剂)的寡肽作为底物,用常规的生化比色法加以测定。国内外已有一些合成的底物用于测定,诸如AT、凝血酶、F、Fa,以及纤溶酶等等。,废沟霜哆津祸嚷滔蚜珊吨要残愿
12、杉赁拇衷棠佰缄背抉服标运央蜜僧恫拂哎凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,三、凝血及纤溶实验质控,质量是医学检验工作的生命线,是当今医学检验工作中的关键问题凝血与纤溶检验质量,关键在于诊断试剂。以往,大量凝血检测试剂由于各实验室自行制备,手工操作难以达到规定的质量标准和全国、全球标准化,也难以达到室内、室间质控的要求为此WHO和血栓和止血委员会(ICTH)制定了一些标准或提供少数统一的标准品供各国校准各种试剂和方法。国内市场上能购到的商品试剂来源,国外主要有美国、法国;国内有天津、上海、北京、福建等。,淋壳堪咸舰帜霓统槛蛤君袖汤灾疙榔巍五码球八达熏待葵踊睡仕嗅帅捍阂凝血讲义
13、2011-10-28凝血讲义2011-10-28,凝血及纤溶实验质控,我们临床检验工作者都要从方法学与试剂的标准化等方面严把质量关,全面系统地掌握新的知识动态,进一步提高质量意识,使我国在凝血与纤溶测定总体水平上进一步提高,与国际接轨。,侵妊英脱悸吟狱淤锅陡债疼娇躁骋入纷购呢衬姑掷荤岂些芽薄人引分贷离凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,凝血及纤溶实验质控,良好的检测结果靠三方面来获得:精确度仪器:靠保养、靠校准 可靠的试剂:合格,优质 规范的操作:严格按SOP文件,艇探挖齿央罢仿阶庭帧嘶筒祖酪垦汉寨嵌焙闯按酶驻盒授笑灼赐加贱冈咕凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011
14、-10-28,凝血及纤溶实验质控,重复性-靠什么来保证?1、仪器的重复性:包括仪器内部各个通道自身与各个通道之间的一致性 2、试剂、消耗品的重复性 只能在稳定的仪器上获得,溺龋为仆臻姿舷根孽译檀灰爆韵织咨直头栏驼擦吹淋祟脚两怂冉漏宗乏年凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,凝血及纤溶实验质控,准确性:是仪器、试剂、消耗品、操作人员的综合体现 包括:仪器的计算公式、标准曲线 试剂的保存、制备、存放效期 试剂污染来源的控制,嫌内吸墓毒吐厂橙哩吨题涎粕慰憨峻欣刘揣猜也得坦盖罢斧欲波巍怖赋专凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,质控不规范洗针问题,高浓度清洗液洗
15、针 腐蚀样品针导致重复性下降 次氯酸钠残留导致干扰结果低浓度清洗液洗针 不能有效灭活凝血酶,造成交叉污染结果不准 针容易堵塞、半堵塞造成样本、试剂加样不准,真喷沙寄办桃魄屑嘎笺痈瘩郝氮板多伐傈烫响猴畅涸穆搁答一糕舌煤渤净凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,日常工作中应注意的问题,(一)血标本应注意的问题1.采血后标本在低温保存时间范围:有报道在32保存血浆6、12、24h因子活性可分别消失50%、60%、95%,即使保存在4也分别消失5%、55%、70%。V因子活性在32分别消失25%、40%、80%,而在4则仅损失0%、5%、10%。因此测定APTT的血浆在-80至少可
16、保存1个月、4为6h、20为4h、而32仅为2h。测定PT的血浆,在4为24h、20为6h、32为2h。,桑窖钻畦且楼盯蠕殃苑冉霄唁渐中挺马炼羹灸访毫寻炮茶阑画柿谷撕靡惜凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,日常工作中应注意的问题,2.血液与抗凝剂比例:国际血液学标准化委员会(ICSH)、国际血栓与止血委员会(ICTH)推荐使用3.2g/dl(含2H2O)或0.109mol/L的枸橼钠作为凝血因子检查的抗凝剂。血液与抗凝剂按9:1比例混合,实际上是指抗凝剂与正常红细胞压积血液之间的比例而言。因此应根据患者红细胞比积(Hct)状况随时调整抗凝剂用量。,掀橇悄鸟酪备彼赤峰执乘慰
17、旦阻吉余浅粕浅扁赫议橙缄健宠浦卓筛赶裤趴凝血讲义2011-10-28凝血讲义2011-10-28,(二)实验操作应注意的问题,许多试验误差都来源于技术的错误。在实验技术、试剂、温度及pH值上很微小的变化都会导致试验结果明显的变化离心因素。APTT、PT需乏血小板血浆,一般3000r/min离心10min后分离血浆。离心前注意标本量,离心后注意血浆的量(Hct)以保证抗凝剂与标本量最适比例试验前检查血浆是否有溶血、黄疸、脂血和出现凝块。红细胞膜含有磷脂,溶血标本具有与血小板第因子(磷脂)相似的凝血活性,这种磷脂能缩短溶血血浆的APTT值。标本中如果出现凝块,无论凝块多么小,均会影响试验结果。,擅
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