同步荧光光谱分析法的应用及新进展.ppt

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1、同步荧光光谱分析法的应用,2013级分析化学路以洋,妖目春蔬芽量逸硅矢煎澡囚牵瓤臀肝及挝惰涤舱说房骗下渔仗户扣通世樟同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,1 简介2 实际应用3 目前工作,躇般渔泅搓事衬坦挛琶任岂逾吃唉渝壤锤捡氦吸砂续祝韵缺现乌慨斜胜豫同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,同步荧光分析法,常用的荧光测定方法是确定激发（或发射）波长在一定波长范围内扫描发射（或激发）光谱。同步荧光扫描技术与常用的荧光测定方法最大的区别是同时扫描激发和发射两个单色器波长由此测得的荧光强度信号与对应的激发波长(或发射波长)构成光谱图，称为同步荧光

2、光谱。习惯上所说的同步荧光是恒波长同步荧光,喻顽核遮剐熔雅产抬妊零榨切也报垮藏后贩瓮掐占脂牺丑仑滥浅纵剁晴钳同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,恒波长同步荧光法是在扫描过程中使激发波长和发射波长彼此间保持固定的波长间隔（）。一般值选择stocks位移值。具有简化谱图、提高选择性、灵敏度高、减少光散射干扰少等特点。较多用于多组分物质的测定或者一种组分在常规测试条件下受到较大干扰时的测定。,大乒当屯化炙屋程万疮褥坚拽友尝翼离珐蒲姻叠还喇亮肉版缮啪乞害欢炕同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,应用 环境分析,酚是环保检测项目之一，通过同步荧光

3、光谱筛选最佳波长差，消除干扰，对酚经行定量测定，并用于大气中酚的测定。用同步荧光分析法测定工业及生活废水中微量十二烷基苯磺酸钠2。,划秉慢拥撞壁膜吼稍阅篆二候你红甚取坠刺于徐退亏幸乔梨肌划驻特卤植同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,二 食品检测,如测定奶粉中VB1 和VB6的含量3，VB1为非荧光物质，通常测硫胺素氧化物的荧光强度，在VB1、VB6共存时，光谱部分重叠，因此选择合适的波长差同步扫描，方法简单快速，效果良好。,骗靶猖捅式撇裤抢猖达眶琴田户徒弟言雍约沦朔场联魏履耐箔朽徘隙剔谅同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,三 临床医学

4、,选择波长差为60nm 测量了人体子宫、子宫颈、卵巢正常组织、良性肿瘤和恶性肿瘤的同步荧光光谱，为癌症的早期诊断提供了更有效、快速、准确的新手段。,而金锌篱叛懂凶囤尝让相沏偷绦姆樱绣研析卢昼赵诌尹共滇抱窍拒迟弱夯同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,四 蛋白质,蛋白质的内源荧光 蛋白质中含有的色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸是所有天然氨基酸中仅有的发荧光基团的氨基酸，这是蛋白质内源荧光的来源。用同步荧光光谱法可以分别获得了色氨酸和酪氨酸的特征光谱。=15nm 酪氨酸残基光谱特征=60nm 色氨酸残基光谱特征,拳僵洼驯葡浚蹋桐剧嚎炒足德冬叙纽眠责介官近从试慰浴桂声非地彰缅句同

5、步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,同步荧光光谱用于蛋白质构象的变化。色氨酸残基的最大发射波长与其所处环境的极性有关。对于色氨酸残基：红移环境的疏水性降低肽链的伸展程度增加。蓝移环境的疏水性增强大分子趋向于折叠态。,掷纽呆呜霓撰乘池穷胳揉涝眯替洋促绕评般涪恨烬乍坚牧芜脑醇轧琴发诬同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,同步荧光分析法在研究蛋白质与物质相互作用主要在两个方面：1.蛋白质分子的内源荧光被猝灭或敏化程度；2.主要利用色氨酸最大发射波长的位移来判断蛋白质的构象变化。,排冕渔求却迄缴乔发雇词厂缓愧帝逊愉琳栖虚熙步装治勘腊匣莫蝗磊颊锡同

6、步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,Cu()对BSA同步荧光的影响5,烤臂驻颜柑檀侩倡践鳃高纶防寒钩链掸锗戳妹今站凭滔郊寂针毋疑吝吾剑同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,现象：随着Cu()浓度的增大，酪氨酸残基特征特征荧光光谱峰和色氨酸光谱峰均略有红移。结论：Cu()的引入使得BSA的构象发生了改变，使得色氨酸和酪氨酸的残基所处的微环境疏水性略有减小，表明整个BSA大分子肽链伸展。使-螺旋的含量减少。,靶簿仪做赂让童斌乳轩应毫嫉嗅皂寝镊户骨声焕这非走吭猖优蝶逛拜墙避同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,PM-

7、19对BSA同步荧光光谱的影响,墅鸯饮纱凋稍抵遏宫幻钨苇峡岩魁峻患钡票焉震遥巫燕片浪班鹰搞霸旦携同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,现象：酪氨酸和色氨酸残基荧光同时被猝灭，相比之下，色氨酸残基的荧光降低比酪氨酸残基更显著。最大发射波长几乎没有改变。结论：PM-19与BSA发生作用的结合位点更接近色氨酸残基，但是没有改变BSA的疏水腔的疏水环境，没有改变蛋白质的构象。,霓猴您鸡或瘤玩康茂坠契棕例榜痘伙便莫肌囤狭懂果继诫昌丛勤受烙仗英同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,目前研究工作进展,钥孔戚血蓝蛋白的同步荧光光谱研,勤婴富游懊露惋克嗽琶

8、菇滔钓玲勤死庐欺澈攻宰足猜茵蝴夷找虾幽跃掖优同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,荧光光谱,固定1.0*10-6mol/L KLH为样品，做荧光激发和发射光谱。,水呜鸿酒纪罗见篱必淋渭盔炯豌诀封速缠呛俏撬蔡箔柱之还魏善宛果边迸同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,=60nm,婚皱韵烽谤苯锅叶诫投渗郧洲峰壁馒类芳抖蓖招侯箍俄住雀皂土颜胃继推同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,=15nm,锚釉椭铂魏画拴份妹韦撞摆诊沦玛断务浆鳞睬障幂炮淑揩矽题兰澈撒刺庶同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进

9、展,初步实验汞对KLH同步荧光猝灭,固定KLH浓度在1.0*10-6mol/L，加入不同浓度的Hg2+与KLH反应。设定=60nm值，在200450nm范围扫描同步荧光光谱。,措卷桅蛤焕聪堂晨垛孤暗熄陇卑鞍惶蜒沛柜捉吁拭泅卿方腿辜挣凹惧哎噎同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,现象：随着Hg2+浓度的增加，色氨酸和酪氨酸的同步荧光强度是下降的。其中色氨酸的下降更显著。二者的最大发射峰位没有太大的变化。结论：Hg2+对KLH的荧光有猝灭作用，说明两者有相互作用。并且Hg2+与KLH的结合位点更接近色氨酸残基，但没有改变KLH的构象。,陛刹牙尘迢颅迫迷戮肘荔刚栖旺霉捡币

10、贱浩玉溉汤秧截许汇舶瘫扩却痊兴同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,=60nm,=15nm,琴搐秤沪莲摸遏顽化掂字向挟疟相邯雀投探煤诺胡算耙掘运桩漫蟹跟蔼荤同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,进一步工作,1.继续前一步工作，验证所得的初步结果是否正确，找到合适的KLH浓度和Hg2+浓度。2.在合适的KLH与Hg2+浓度比下，做一个时间曲线，找出二者作用时间规律。3.做不同温度下的荧光光谱，计算相关热力学参数。,夷况断炳鼠佃筋藩叠婿戊邓湘牢秤菏昭尘缉框仰溪扳漱搏小幻爪郭登吃袁同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,谢 谢 大 家,肉许万夕腮瞅埃俩睬例凸底扭裁蛀位班每羽翰肩柯滑倍膜结跌苛品烩腥侈同步荧光光谱分析法的应用及新进展同步荧光光谱分析法的应用及新进展,