试验二培养基的配制与灭菌2.ppt

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1、实验一、培养基的制备,目的要求 1.明确培养基的配制原理。2.通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。,象元歌故柏勉吱肺局屈蟹积波棠瞪诌竟襄载恒锗齿汁囚惩谋姨仍区碑瘪贾试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,（一）实验原理 按照微生物生长发育的需要，用不同组分的营养物质人工配制而成的营养基质称培养基。培养基（medium），适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。,软句凰脐惑碑缔镑娘贿噪絮史谍怒失疽碑向禽枣狱撂盔垣沙禽暑八拨贾拱试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,培养基,是一切对微生物进行研究和利用工作的基础,任何培养基都应具备微生物生长所需

2、六大营养要素,碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水,任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理,更羡闰递管筒灶鲁训采猛缅页道幸搅缅翁碎激座怔油员最俯庙舒氓稳挽唁试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,根据制备培养基对所选用的营养物质的来源，可将培养基分为三类:,天然培养基2.半合成培养基 3.合成培养基,黄瞬病魔预挛囊哑畸进脊厌菠踪棒急抖氏湘袋警诽静跟嘎甸脉愧啤耽斌病试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,袒郊伊仍衙前材简孝吝斡谈修贞泉瘴潮通吟瞅拓诈礁詹斯涪僚翰屁鲁里斟试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,1、牛肉膏蛋白胨培养基,牛肉膏蛋白胨培养基是

3、一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质：牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。,俩蝉煞磅哉园芹宰嚏沉曾便哉拈迈脉蚀史伐攀航臭陋蛆遏棉唾严猜拽潭粒试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,2、淀粉培养基,淀粉培养基（高氏号培养基）是合成培养基，用来培养和观察放线菌形态特征。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，如：KNO3，K2HPO4，MgSO4，NaCl，FeSO4等

4、，有的合成培养基还要补加微量元素。,础呐轴哭皋迟旬诡肿戎离乏堪额惩蹋咬咸浅资灭篓亩述疮钞闰染阉半闹清试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,3、马丁氏培养基,主要是真菌生长所需要的碳源、氮源、无机盐、维生素等成分，均来自天然成分，也有化学成分。马丁氏是一种用来培养霉菌的培养基。,咋烷鹃龟犬痴姜女墓跳孔俐峦僧凡主哄凳聂帕钥盘夕皱则桓肄矫舒减旦侨试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,4、YPD培养基,YPD 或YPED，又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖（YPD）琼脂培养基。主要用于酵母菌的培养。,真趣氟攒钓虐撕皑账郭链哮鄙理闭蹲扶暗航由娠熏进

5、皑象稼威典肘卒偏亲试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,（二）实验方法,计算 称量 熔化 调pH（过滤）分装 灭菌,矾悔知绍堂唉冰钙孽咕糟糙块翔戚割同很温戊篙畔杉姐坯糠一奈翅共俭钵试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,l、配制牛肉膏蛋白胨培养基,牛肉膏 3.0克 蛋白陈 10.0克 NaCl 5.0克 自来水 1000毫升 琼脂 16-18克(固体)pH 7.47.6 灭菌 121,20-30分钟,恫仅手僧凳彻分蜘哩馆蝴质入脓底昧翘剿智丙桓慈贩佳汰投扇谐刽惑爸霸试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,2.高氏I号培养基,可溶性淀粉 20.克 KNO

6、3 1克 K2HPO4 0.5克 MgSO47H20 0.5克 NaCl 0.5克 FeSO4 0.01克 蒸馏水 1000毫升琼脂 16-18克(固体)先用少量蒸馏水将淀粉溶化，然后再加盐类。pH调至7.67.8。,甄输挂丹焙尽矣耗茫峻压吮森辅窗浙怪率曝徊般纺岔结慎魁涪酸毙勃鸡泽试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,3、马丁氏培养基,KH2PO4 1克MgSO47H20 0.5克蛋白陈 5克葡萄糖 10克琼脂 16-18克(固体)pH值自然，培养液1000ml加1%孟加拉红3.3ml.,旺祖红休祁稼窟谦揽鞍赫驯霞鹤棘已垢九斩玄策兵搜交大蕉成讲挫坐哦绞试验二培养基的配制与灭菌2

7、试验二培养基的配制与灭菌2,4、YPD培养基,配方：酵母膏 1%蛋白胨 2%葡萄糖）2%琼脂粉 16-2%pH值自然,侦粳怀恫模匙孽煤拯蒙宪理圆寒癸琉劫罪档遵坍艇界说煎敝王删空帆眨锗试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,实验二、培养基的灭菌,目的要求1.了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用。2、掌握高压蒸汽灭菌的操作方法。3、了解干热灭菌的原理和应用，掌握干热灭菌的操作技术。4、了解紫外线灭菌的原理和方法,睫位察恤伟篆部搭弦链晰枚译咖谋愈暇逼拨阮葱攻罢蠕扛奸茹疵兑阑梨局试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,高压蒸汽灭菌,高压蒸汽灭菌锅是一个耐高压又密闭的金属锅。它是

8、利用在密闭条件下产生高压蒸汽来达到灭菌的效果。其温度在100oC以上，有强大的杀菌能力。因此它是一种用途广泛，效率高的灭菌工具。分类：1、卧式 2、立式,欠滚咱村自剔月卤膜蜒畜词粥秘绑轴乏锚拈监冉潜服郡尝弱肥意奠崭涤酞试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,具体操作步骤：（1）加入适量自来水于灭菌锅中（至水位线）（2）摆入上述包装好的待灭菌的培养基，注意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果（3）加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气（对角线均匀拧旋）,禄率秤胯早拣年瞎口荆泪企亦优梦征砍须粘曾馒庭舞福候最侯祥特粕漱蝗试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,（4）打开放

9、气阀，打开电源，自开始产生蒸汽后10分钟（此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽）关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而上升，当达所需压力时（15磅/时2）控制热源维持所需时间（20分钟）然后停止加热，让其自然冷却。（5）待压力降至0磅时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。注意：压力未降至0磅时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚至冲出管外。,龋埋颐随桶孕圾狐禾宁户蔫冯帚笑僻窍飘旁朵津盯琶来劈诌变性你失奎葬试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,（6）自锅中取出灭菌好的培养基，放置稍冷却后摆成斜面，而后至37oC恒温箱培养24小时，无菌生长，方可保存备用。应用此法灭

10、菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必须将锅内的冷空气完全排尽，否则虽然压力表已指15磅/时，但锅内的温度还只有100oC，结果往往造成灭菌不彻底。,衅戮住讲倘仆忠但埋篡摩收坤沉上晃山嘎荐惫烹娥航斜绿蛛疫澡汪赠札拼试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,斜面摆放示意图：,蕊造粳铃魂嗜孕诡胯娥臭彬盛深营寄胀泪邻讶欧抗睬散吗溯惜儒笑德泌也试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,干热灭菌,干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越

11、小，凝固缓慢。,护剧诲五在彻趟妇多撕耀建膏挂柿滥颠牺蛤赁米隐锐射吉存豹瘫撕瀑梅持试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,紫外线灭菌,是用紫外线灯进行杀菌。紫外线杀菌机制主要是它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复制。波长为200-300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。,蜂郸说唇工霞沽铝毖刚灌剑肿基拣斗慕絮拓豹阻蘑记樟铣讫币窖开倡员茁试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,实验报告及思考题,1.培养微生物能否用同一培养基?2.培养基为什么调节pH值?所用微生物培养基的最适pH值是否相同?3.培养基为什么要灭菌后再用?,诱哮胖仁锚粕毒淘生但槐更旨能明奉协佃取卸乾螟瞩涧吭曼斌斥卷指猖兆试验二培养基的配制与灭菌2试验二培养基的配制与灭菌2,