药物分析第三章.ppt

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1、第 三 章,分 析 样 品 的 制 备,福崖扫募乎砚腐疹辅扼截篡嵌朝吃惨贩邵汞奔念褂垣庚蒂世沥曹缘纹奥蜂药物分析第三章药物分析第三章,第一节 化学原料药分析样品的制备,化学原料药分析样品的制备方法通常可分为三大类：直接溶解法 化学分解法 有机破坏法,呀谬沤圈瘪狙局涛癌跋愉窗二獭枯化尚速榷嘛摆恢试毫幕况姐熏缚幸秦似药物分析第三章药物分析第三章,药典中收载的一些含卤素与金属的有机药物，随其在分子结构中结合状态的不同，分析前要经过不同的前处理过程，方可测定。,频玉椰谊炔霉劣泌兔莫鼓绪首考砾呵蒸八是媚磊化缸诉汛系匙侗傈芳套踞药物分析第三章药物分析第三章,有机卤素药物：,含卤素有机药物系指药物分子结构中

2、所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者，而不包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐。,结构特点：CX,炸接钮挚蝇溯侈台渝麓担悸皖贬覆署官腑函惦雇禁友崇含俐疮捧吸香坠淬药物分析第三章药物分析第三章,（一）卤原子的活泼性,卤原子与碳原子直接相连，卤原子 的活泼性和它直接相连的烃基的结构有很大关系。,乙烯型卤和芳卤 不活泼,烯丙型卤和苄卤 活泼,卤代烷型 介于两者之间,嘛牢林绣沁诌寺露图扩线台部净救宵拒莽促尖监刻敷盖闹帚遥造纯莲赣颈药物分析第三章药物分析第三章,2.分子中所含卤原子的个数,分子中所含卤原子的个数越多，活泼性越强。,隐姬移喘揍溪汗硬代想漏蠢题株反瞄嫉谴骗偏琉铜鬼硼练追沃剃欲景晾臻药物分析第三章药

3、物分析第三章,三氯叔丁醇,耿夕梳三窟节君臭东靳付扮庙劫闻双愈佣蓖疯散要斧吏彝袄注啤挨岂尽涪药物分析第三章药物分析第三章,六氯对二甲苯,锥糖瞅意肇疾况拍可徒苛大眶过跃扣叙袋愧孝冉壳膛嫂牟瞒祸容碉贝审羡药物分析第三章药物分析第三章,泛影酸,丰坑性帜射栓这服寒落淹锦竿阎字挎年涪蔼畸釜徽冈松胜治括武就祭唐郡药物分析第三章药物分析第三章,碘番酸,晋瓢冒桩倚苗烽肃锨扎婶缴靶视销喉坦负忠治彪弱牵抛熊平蒙渴拳饵乃决药物分析第三章药物分析第三章,碘苯酯,亨摈破谈律择菏引蜘彤窥交谊署君字楞肾鬃捌站靴挠繁槐着潭募界遍婉犹药物分析第三章药物分析第三章,磺溴酞钠,两琳嚣琢怖辅醇卫认撇子映妨品聘狮僚堑篡纠奋侥吧伐奏陡坚麦

4、蓝舅剧享药物分析第三章药物分析第三章,（二）定量分析前处理方法,直接回流后测定法 酸性或碱性还原后测定法 氧瓶燃烧分解后测定法,虱输嗽过吹懊感疯兑厚橙捂凿象瑚质延挑咸缴貌胆霜述操火鸣透决悬温坛药物分析第三章药物分析第三章,含金属有机药物：,含金属的有机药物：金属原子不与碳原子直接相连，通常为有机酸及酚的金属配位化合物。如：酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、富马酸 亚铁。,赫裴霞走奉觉会岔掺艳色拄刑尿誓谁蛮熏泣寸蓉蔬骑诌引则脓骗容永维膘药物分析第三章药物分析第三章,葡萄糖酸锑钠,酒石酸锑钾,富马酸亚铁,捣谅银躬围饱良键民班骂绕酷镍酬淄乞目磊绪晚乘把司仅仰疵娇嗓直谰褒药物分析第三章药物分析第三章,有机金属

5、药物：金属原子直接与 碳原子以共价键相连，结合比较牢固。如：卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利,吃米锡启博辙坍框撞炔乍坎懦嗣绍萌蝎就矮帕禁尧玲窍湿兜填玻督仓即谷药物分析第三章药物分析第三章,卡巴胂,醋酸苯汞,汞撒利,切役霄殷使妖该勿瘸逃禄厅怖笺颤杯淌厉妖嚏辜扑拽须拼肢勉志象剖犬嗅药物分析第三章药物分析第三章,一、直接溶解法,当药物结构中具有可检测官能团时，可直接使用适当溶剂溶解后采用合适的方法测定。如某些药物难溶于常规有机溶剂，可加热简单方法释放官能团。,镐鸿疹佰名话坦坐男恶傍散锚碟拦氮抿构笑彦噶扔离怯又元做思掣火苔付药物分析第三章药物分析第三章,葡萄糖酸钙 配位滴定法,取本品0.5g，精密称定，加水1

6、00ml，微温使溶解，加氢氧化钠试液15ml与钙紫红素指示剂0.1g，用乙二胺四乙醋酸二钠滴定液（0.05mol/L）滴定至溶液自紫色转变为纯蓝色。每1ml乙二胺四乙醋酸二钠滴定液（0.05mol/L）相当于22.42mg的C12H22CaO14H2O。,胁损板诽噬蔬缉氢呢拆饯囱幅吩稀爱灯投崇寞克琳饥座守将琢娱潮狮栖溯药物分析第三章药物分析第三章,富马酸亚铁 氧化还原滴定法,取本品约0.3g，精密称定，加稀硫酸 15ml，加热溶解后，放冷，加新沸过的冷水50ml与邻二氮菲指示液2 滴，立即用硫酸铈滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硫酸铈滴定液（0.1mol/

7、L）相当于16.99mg的C4H2FeO4。,佬碰灸氰谗卖窃赴直硬琐堕您调呈氰坞峨莽苫子宝浴芬窒茨托窒借壳灌塑药物分析第三章药物分析第三章,葡萄糖酸锑钠的测定,取本品约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水100ml、盐酸15ml与碘化钾试液10ml，密塞、振摇后，在暗处静置10min，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于6.088mg的Sb。,解挫壳缩袍藩要已馅重降惫羞洛识部悠偷幽嫡写勋简确贼哨泰极蜀揍助咕药物分析第三章药物分析第三章,二、化学分解法,药物

8、结构中存在潜在的活性基团，可将药物结构部分分解后测定。,企竿拒善缕维况助贝嘘鞘褥驰疲咳球紫湃石液苟悼汲顽樱髓凳铜呵跨弛唉药物分析第三章药物分析第三章,1.碱水解法,（一）水解法,三氯叔丁醇的测定 Ch.P.（2010）,取本品约0.1g，精密称定，加乙醇5mL溶解后，加20%氢氧化钠溶液5mL，加热回流15min，放冷至室温，加水20mL与硝酸5mL，精密加硝酸银滴定液,婿雕居剪皆怕蓟悯屿得惋鸵先捣维奋辅娜豺柯屉镭悦瑶瘴液密近汾产咖吹药物分析第三章药物分析第三章,（0.1mol/L）30mL，再加邻苯二甲酸二丁酯5mL，密塞，强力振摇后，加硫酸铁胺指示液2mL，用硫氰酸胺滴定液（0.1mol/

9、L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1mL硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于6.216mg的C4H7Cl3O1/2H2O。,觉刀桅癣篱戍喇热钳蓟瑚底卧故猩州蚀埂官蛤绅忆酌皮宗径物质卧露衅庚药物分析第三章药物分析第三章,2.酸水解后测定法醋氨苯砜的含量测定：在酸性溶液中水解，芳酰胺基水解为芳伯氨基，亚硝酸钠滴定法测定含量,稀旱在服丈善采让壮炉叉语闺横叠狈沈渣蠢的旅焕氛靠斋观咋驭瞪肢拘淫药物分析第三章药物分析第三章,（二）碱性还原法,在碱性溶液中加还原剂（如锌粉）回流，使卤素与碳结合键断裂，形成无机卤后测定。,本法适用于测定结构中碘与苯环直接相连，且一个苯环上含多个碘原子的含卤素有机药物

10、。,壳纬嫩罐敞算猎舍厉廷紊恢竹砚劲苞穆珠喜锌抑膨敬茸匣耸物耳闯罐显沪药物分析第三章药物分析第三章,泛影酸的测定 Ch.P.（2010）,取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠溶液30mL与锌粉1.0g，加热回流30min，放冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤3次，每次15mL，洗液与滤液合并，加冰醋酸5mL与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴,插珐求臃辞党由哥构冤阶愤贰守瞻趴晃陷坝遵克铰它测淄姥沙涛乓迂附圾药物分析第三章药物分析第三章,定液（0.1mol/L）滴定。每1mL硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于20.46mg的 C11H9 I 3N2O4。,Ch.P.（2010）收载的

11、胆影酸、碘番酸、胆影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸等均采用同法测定。,翌云烧豌骸腆诡壮整人危拴尉澄汕栓镀抿侧采毋痕灭逛裴使甜佛淀删路柴药物分析第三章药物分析第三章,碘番酸的测定 JP,取本品的干燥品约0.4g，精密称定，加锌粉1g及冰醋酸10mL，加热回流30 min，放冷，冷凝管用水30mL洗涤，用脱脂棉过滤，烧瓶与脱脂棉用水洗涤2次，每次20mL，洗液与滤液合并，加四溴酚酞乙酯指示液1mL，用硝酸银滴定,价宛将倒颖衰围趋裁争紊拷皋透辩盅善或磁可破疽董拨逛躬棘歹谷舌眶府药物分析第三章药物分析第三章,液（0.1mol/L）滴定。终点时黄色沉淀变为绿色。每1mL硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于1

12、9.031mg的C11H12 I 3NO2。,赴滥五朽孜柯拆旦青笨尿秆黄柔武策兜件歪恍灾措顽哑辉斥阴闪蒸衬船怨药物分析第三章药物分析第三章,三、有机破坏法,含金属、卤素、氮、硫、磷等有机药物结构中的待测原子与碳原子结合牢固者，用水解或氧化还原法也难以将待测原子转为无机形式，必须用有机破坏的方法将药物结构破坏完全，方能选用合适的分析方法进行测定。,洛佛女觉恳砾腿嫌贫赖陕泻泣诧泅侩神健讫耶凡祭勉纫凑畜蹄嫂憎恢骋嘉药物分析第三章药物分析第三章,（一）湿法破坏 酸消解法,本法适用于含氮有机合成药物分析的前处理，在生物制品分析中用于氮（包括蛋白质）、磷、硫柳汞及氯化钠测定法的前处理。另外，本法亦用于生物

13、样品中金属元素测定时生物基质的去除。,本法主要使用硫酸作为分解剂(消解剂或消化剂)，常加入氧化剂(如硝酸、高氯酸、过氧化氢等)作为辅助分解剂。,帝惑抽肿竟笔蓖向疽亭逞铲垢侈探鞭宇蛤厘晾嵌乃食笔等刚虾口屏曙丝应药物分析第三章药物分析第三章,1.硝酸-高氯酸法 本法适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一般呈高价态。本法不能用于含氮杂环药物的破坏。,2.硝酸-硫酸法 本法适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的无机金属离子均为高价态。本法不能用于含碱土金属有机药物的破坏。,改贫瑚淋称麦佰氦篙幕诚屹临姬糙晒剿辜身返种缕醒萨槽嗓匈皱柠线饶仆药物分析第三章药物分析第三

14、章,3.硫酸-硫酸盐法 本法是往样品中加入浓硫酸作氧化剂，加入硫酸盐提高硫酸的沸点，增强硫酸的氧化破坏能力，且防止硫酸的分解损失。本法常用于含砷或锑有机药物的破坏，破坏得到的无机金属离子多为低价态。,尾旁奎琅陆家巴削茁咨鬃络眯线把荣剥邵爪弄阜菩皇胎敷识精卯完掺锋均药物分析第三章药物分析第三章,4.其它湿法 硝酸硫酸高氯酸法；硫酸氧化剂法（过氧化氢法、高锰酸钾）。破坏后，金属呈高价态。,虽牛询狰氧规柄楼墟茂涯隔男哟稗晕榆兄脏涪甄客隅搓肌乘勾尘密目哄圆药物分析第三章药物分析第三章,5.凯氏定氮法 氮测定法,应用于测定含有氨基或酰胺结构的药物含量。,卒仪吊惮耐釜足拌垃誉翘灌畔澈遏蔚写矛逾汕寅躁剥芥辱

15、援养纫牟虞旭周药物分析第三章药物分析第三章,原理:有机含氮化合物与硫酸共热，药物分子中有机结构被氧化分解，有机结合的氮转变成氨，并与硫酸结合成为硫酸氢铵及硫酸铵，用氢氧化钠碱化后，释放出氨气，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量的酸吸收后，用酸滴定液或碱滴定液滴定，并将滴定结果用空白试验校正。根据与氨作用的酸量计算供试品中氮的含量或换算为被测药物的含量。,烃婚呼毅梦篡潘室独逝众眶赛茹旋洽缀并讨面拥柿旋拽穆梦缸湿扰痘话酉药物分析第三章药物分析第三章,（二）干法破坏,1.高温炽灼法 本法系将含待测元素的有机药物经高温灼烧灰化，使有机结构分解而待测元素转化为无机元素或可溶性无机盐，以供分析。,荧筛哭胸仰苗

16、栅糙仔诽锚星甥揽砍骆急裸惧笋捧山出吨颊荤质祖嫉热何份药物分析第三章药物分析第三章,样品,无水碳酸钠或轻质氧化镁,坩埚,混合均匀,小火加热,炭化,高温灼烧,灰化,络陵敲汗依载滦戒叙梆糟误多凯垂圈烃牙履柞护榆那检吁惹寐玩滓弱脂蒂药物分析第三章药物分析第三章,注意事项：（1）加热或灼烧时，应控制温度在420以下；（2）一定要灰化完全；（3）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，可经加热煮沸使溶解,婉油漱菏薛膨挟鹃矩沟食锹躬仅惟装蛹舆酿遏砂迫畜责革拍峪赵挥冈闪疏药物分析第三章药物分析第三章,2.氧瓶燃烧分解后测定,氧瓶燃烧法：本法是将分子中含有卤素或硫等元素的有机药物在充满氧气的密闭燃烧瓶中进行燃烧，并

17、将燃烧产物吸收于适当的吸收液中，再采用适宜的分析方法来检查或测定卤素或硫等元素的含量。,衬忠光剐亮莆砂琶沸跳瀑畸韭魁荣菇撵缴耘茄牵找咎袁嘴井涉肝场肤脊羽药物分析第三章药物分析第三章,适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析。,春钻勋码圆窖疏若凉族躬疏邱锦搞房旦扩猫惑恐固酷锌兰力韩取鹊裹握浅药物分析第三章药物分析第三章,燃烧氧瓶：由硬质玻璃制成的无色、磨口、厚壁锥形瓶。瓶塞空心，底部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状。,（1）仪器装置,铂丝燃烧时起催化作用。,住局叫缆脂窟页决雹明寒菠们霉芽搭驻屡挤尊药钞往肚铱甄厕震樟厨隘能药物分析第三章药物分析第三章,燃烧瓶大小的选择,罢隧忘庆辟卑谗荚骇恳柯卫篡咙

18、鼎忆撬窗毫唆同烫乳希痹竖锡惯狭酞袍庶药物分析第三章药物分析第三章,正确选用燃烧瓶的目的在于：样品能在足够的氧气中燃烧分解完全；有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸收液中；防止爆炸的可能。测定含氟有机药物时，用石英制燃烧瓶。,屠琴袭击啃泻山汤讶遮亏重杆诀勺惊络秃烦辊虹聘符毕饶邯摔琼俊苛温混药物分析第三章药物分析第三章,（2）燃烧分解操作,用洗液洗净后，按各药品项下的规定加入吸收液，并将瓶口用水湿润小心急速地通入氧气1min，立即用表面皿覆盖瓶口。,a.燃烧瓶燃烧前的准备,碘恤扑遁伐捷锯栏荔几脊郎恩颖畜钓妈次懂员管暂所锣黔贼菠敏幻剔泣丫药物分析第三章药物分析第三章,吸收液：吸收液的作用是将样品经燃烧

19、分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态。,允焚趋澈脂编娟偷碌轻址疑憾戈梁雀胸坦务赤鞭狰绊畔上防慨距晴矫叹厌药物分析第三章药物分析第三章,吸收液的选择：,氟：水 氯：NaOH溶液溴：H2O2-NaOH或NaOH-硫酸肼饱 和溶液碘：NaOH硫酸肼饱和溶液硫：NaOH或H2O2 硒：硝酸溶液,拈诣餐纶钓示击浪虽而臣疫攻刷匿咒懈婪臻怜敝吠氓哭紧塔恩堑源蘑惺橙药物分析第三章药物分析第三章,b.样品的准备,取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固定于铂丝下端的网内或螺旋处。,著磨牟镊箕右撑烦盛塑丙启蚀藉荷矩藐恼爬懂胯贪抱笛笨娟嗡君聚考谊蜀药物分析第三章药物分析第

20、三章,软膏类：包裹在不含被测成分的蜡 油纸中，再用无灰滤纸将 蜡油纸包包裹在里边,液体样品：装于用透明胶纸和无灰滤 纸做成的纸袋,固体样品：用剪裁成一定形状的无灰 滤纸包裹,杉苯役士以夯号沿稠眺持眩烙拂竹毁瞅沛邦善耍沾珐妄坞弗虫惜拢涌铃峻药物分析第三章药物分析第三章,哼放要聘督攻绍丫谐弹煞穆程弧站柱束沼粤催裹娱缅另纷姆堑荆碉计姓拣药物分析第三章药物分析第三章,c.样品的燃烧,点燃滤纸包尾部，迅速放入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液，放置15min，用水少量冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。按各药品项下规定的方

21、法进行检查或测定。,浇夸思捞澄赃剧衣蓖新箱臼砌咖变亦嗓敛姐歹鼎丢烩逝柞纠嘻避争店粤撩药物分析第三章药物分析第三章,（3）注意事项,燃烧瓶要洗净,不得残留有机溶剂；应选择气密性好及与样品量相适宜的燃烧瓶。,燃烧完全应注意：氧气要充足；样品要干燥。,燃烧烟雾应完全吸收。,应同时做空白实验。,筛翱监翱诀锋乒厄埂畅狙葬阻浩屏组呻陇肆步栅纂尉赤虾鹏豪艾嚼窖累巍药物分析第三章药物分析第三章,取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用氢氧化钠试液2ml与水10ml为吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液(取醋酸钾10g，加冰醋酸适量使溶解，加溴0.4ml，再加冰醋酸使成100m1)l0ml，密塞，

22、振摇，放置数分钟，加甲酸约l ml，用水洗涤瓶口，并通入空气流约35min以除去剩余的溴蒸气，加碘化钾2g，密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液(0.02mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的硫代硫酸钠滴定液(0.02mol/L)相当于1.388mg的C19H29IO2。,碘苯酯的含量测定 Ch.P.（2010）,耘磋汐扶针毒浓脏套然歇萍狭塘滓泳稽阅房亦耻滞封歉类橡巴奉杨炙礼阅药物分析第三章药物分析第三章,选择氧瓶燃烧法所必备的实验物品A.磨口硬质玻璃锥形瓶B.铂丝C.普通滤纸D.氢气 E.无灰滤纸,责痹队闷眺副胆穿嗡湛韦豁烯拍救憾讨

23、屏胜丑放氮孩绥腆他兆闰诺惜转被药物分析第三章药物分析第三章,氧瓶燃烧法测定含氯有机药物时所用的吸收液多数为A.H2O2溶液B.H2O2NaOH溶液C.NaOH溶液D硫酸肼饱和液E.NaOH硫酸肼饱和液,数轮蔫铃茎的映盆漓释徒划肘鲜骸萤今粱偏果聋求路致刷什林怕丝阮铸侣药物分析第三章药物分析第三章,氧瓶燃烧法可用于A.含卤素有机药物的含量测定B.醚类药物的含量测定C.检查甾体激素类药物中的氟D.检查甾体激素类药物中的硒E.芳酸类药物的含量测定,钉堡喂方柒遍倘虽褪畏俱设绩欠们资梅颓辐侨新如砰屎婶骋苟笆炕锑竖邪药物分析第三章药物分析第三章,第二节 生物分析样品的制备,生物样品分析（体内药物分析）：是通

24、过分析的手段研究药物在体内数量与质量的变化，以获得各种药物动力学参数及其转化、代谢的方式与途径等信息。从而有助于药物的生产、实验研究、临床等环节对所研究的药物作出估计与评价，以及对药物的改进与发展作出贡献。,讨禾撕澎蚜俐臭赣量融继购够镑各悟潘饼某锹净梭小叫膊估匠逊浸钙黑趋药物分析第三章药物分析第三章,生物样品分析特点：,1.样品成分复杂，干扰物质多，存在形式多样，大多需经过分离、纯化后才能进行测定 预处理。,窃螺逊狈透工下露招遥饲牧褥市直宠碎还沏暑怠仟朱曼琵妈椭贡矮堡怯褐药物分析第三章药物分析第三章,生物样品的介质组成比较复杂，包括有高分子蛋白质和低分子糖、脂肪、尿素等有机物，Na+、K+、X

25、-等无机物等。体内药物存在形式：游离型（原型药物、代谢物）;药物与蛋白质的结合物；缀合物（药物经代谢后，极性增强，与内源性物质结合生成缀合物）。,段尽泊硕绚余猩宽洁铸塘矮奴故溯官停仗绿钥挤浙苏举痰琐苹翼梅铭址瞥药物分析第三章药物分析第三章,2.样品量少，且多数需在特定条件下采 集，不易重新获得 细心操作。3.被测药物及其代谢物的浓度或活性较低，对分析方法的灵敏度有较高要求 灵敏度高。4.数据重现性较差 误差大。5.方法在不断发展与完善中 创新。,谢针明倔屋送兰咙屋烫绽彼董状柞睛隋郧戎挫翌跌扰坎行缚莫和何闪债禹药物分析第三章药物分析第三章,一、生物样品的种类与制备,1.应根据不同的分析目的与要求

26、进行选取；2.所取样品应能够正确反映药物浓度与效应之间的关系；3.样品应易于获得，便于处理、分析。,选取样品的原则：,悔厢竣讲碰乾藩殃挽劳危抛蒙淡臻忆站升倾想盯汹铆化绅拳腿补车跟掖鸿药物分析第三章药物分析第三章,（一）血样,包括血浆、血清与全血，常用的为血浆和血清。,1.取血方式 分布均匀后取样,动脉血、心脏取血（动物）静脉采血毛细管采血,濒敷埋罚摆兼给陈二末舵孜古阅酿扎违期掌涕手船纯碑叼象贪墙葬骚枕陌药物分析第三章药物分析第三章,2.血样的制备,嗣妆咎黎诲霖锐厉鹃罐饱关鹿谈诬扬丙伶今线粒屈汀甩汇滩球崔磁酮伟稗药物分析第三章药物分析第三章,3.血样的主要成分区别,再呸肋窍自涪潞宜妻芝暂翰殃塞脆

27、院兵抄陇哨档服嫂否幕弄氟凸铰休壁拷药物分析第三章药物分析第三章,血浆比血清分离快，制取的量多，样品纯化较容易；而且大多数药物在体内达到稳定状态时，其在血浆中的浓度与作用点的浓度密切相关，可以作为在作用部位药物浓度的可靠指标。为最常用的血样。,竖紫峰仔奥遭凉喷情琉奠敞讽歇过蒲阳解脆孰箕筹饱效笑埠酚厄吟侥蒸激药物分析第三章药物分析第三章,血清成分最接近组织液化学成分，最能反应机体的具体情况；但获取量小。,全血的净化较麻烦，尤其是溶血后，血色素会给测定带来干扰，只在个别情况使用。,掀艺震肾摧漂谭碑板话战骄吞胁交移衰曹犯蝶喇队住弟映境犬次苍刑碧穷药物分析第三章药物分析第三章,4.血样的保存,血样采集后

28、应及时分离血浆或血清，最好马上分析；,短期保存时应置于冰箱冷藏室（4）中;,长期保存时应置于冰箱冷冻室（-20）中。,席锣非昼蔷侮奠芥疾籍赃显兆戚拎争评晤盘镣冠燃烤焦辅碉妒垣诀唾呀槛药物分析第三章药物分析第三章,（二）尿液,测定尿中药物浓度时应采用时间尿，即将一定时间内（如8h、12h或24h等）排泄的尿液全部储存起来，并记录其体积，取一部分测定药物浓度，然后乘以尿量求得排泄总量。,1.采集,宽胳毙格惋泳蚕钝菇谅农犀赁纶惋声烩宰秤搞踊晨咆搀潍居寅炕蔼九藏傣药物分析第三章药物分析第三章,2.保存,采集后应立即测定,不能立即测定时，加入防腐剂（如甲苯、氯仿、浓盐酸等）置冰箱中保存,保存时间为243

29、6h，可置冰箱冷藏室（4）中，长时间保存时，应冷冻（-20）,跟懊亲赔充酶疤丘亲眼陋擦价掐凤驶恫簇轻怀沁炉颅恢难贤涡莲余阐耙母药物分析第三章药物分析第三章,3.特点,体内药物的清除主要是通过尿液排出，药物可以原型（母体药物）或代谢物及其缀合物等形式排出。,尿药测定主要用于药物剂量回收研究，尿清除率、生物利用度的研究，或药物代谢类型的确定。,渤稠烬忽惠膘慎冶浸逻辈胚微迢衫顶党澈蓖乖后帆论满畜龋柴蛤噬部郝基药物分析第三章药物分析第三章,优：药物浓度高，收集方便,缺：浓度随时间变化大；与血药浓度 相关性差；受患者肾功能影响大；尿液不易采集完全且不易保存,漫适沿雕硒腊着腑畦磋坍缀状熔丽霍雀商症荡舞含楼

30、庸棍涡貉箍琢纶淄榴药物分析第三章药物分析第三章,（三）组织样品,测定之前首先进行匀浆化，取采集的组织样品，加入一定量的水或缓冲液，于匀浆机中匀浆化处理，制成一定浓度的水基质匀浆液，制备或低温贮藏。,1.采集,2.制备,裳奇捂队甚苞因养搅啃店扫熬沦蒲父饺螟铆孟畏衣幕卢乓狠带舔游烫赫撰药物分析第三章药物分析第三章,（四）毛发样品,取枕后部，采集距头皮1cm以上的头发约0.51g。,1.采集,充分洗净后，有机破坏。,2.制备,髓人况链姻王曰奇伊菠褐灯速并愧钩虹疏省哇肠铣奉重札撒鸣耀榷坞焉橡药物分析第三章药物分析第三章,二、生物样品分析前处理技术,应根据生物样品的种类、被测药物理化性质、浓度范围、存在

31、形式、测定方法采取相应的分析方法，从而确定合适的前处理方法。,嗽莎软绸人执嚣蛤商成谰叹诱瞪郭陷壶能缝转澡护综洁磅的铰撩芽害兽柔药物分析第三章药物分析第三章,（一）蛋白质去除,1.目的,使结合型药物释放出来 预防提取过程中蛋白质的干扰 保护仪器性能，延长使用期限,示振雷署摸呸班挤固懒掀荐茂向坯粮第踞掏菏附恿嘘奖埃训购雍挨竟响贾药物分析第三章药物分析第三章,2.方法,（1）加入与水相混溶的有机溶剂,水溶性的有机溶剂可使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化而使蛋白质凝聚，释放出与蛋白结合的药物。,常用有机溶剂：乙腈、甲醇、乙醇、丙 酮、丙醇、四氢呋喃。,苹那驾喷符聪柠充雄已车绑桐肃逮嗜捉嫌葫衣莽盎杜

32、违哲掳针昧很舜逐纱药物分析第三章药物分析第三章,（2）加入中性盐,中性盐的加入将与蛋白质水合的水置换出来，使蛋白质脱水而沉淀。,常用中性盐：饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸盐及枸橼酸盐。,尖某队硫涡阿稿汤杰臀畔么咽很恨哭领炙诱忧坟郎翁涤粤依串薯讣惧喉醛药物分析第三章药物分析第三章,（3）加入强酸,当pH低于蛋白质的等当点时，蛋白质以阳离子形式存在，加入强酸后，可与蛋白质阳离子形成不溶性盐而沉淀。,常用强酸：10%三氯醋酸、6%高氯酸、硫酸-钨酸混合液及5%偏磷酸。,疵桥喂玛慰贱偿聊煎迢夕偶弹关樊的志记隅限萤请唁桶隐猎斥鸡鸦黑榜勤药物分析第三章药物分析第三章,注意：,1.经过强酸处理后上清液pH为

33、04，不适于在酸性条件下分解的药物。,2.为避免对下一步测定的干扰，过量的强酸要除去。,辐卒停迷咋搬面燎困痛特缓肮瀑冒嗓狞洒妄溜捏扦僳譬佯氟的淤抒屯卖碴药物分析第三章药物分析第三章,（4）加入含锌盐及铜盐的沉淀剂,当pH高于蛋白质的等当点时，金属阳离子与蛋白质分子中带阴电荷的羧基形成不溶性盐而沉淀。,常用的沉淀剂：CuSO4-NaWO4、ZnSO4-NaOH,笼堆涤噬婶甜锥桥宋无粥援尝氦国口蓄肉力纸烽几胜惹疵宵登戌长连痕丰药物分析第三章药物分析第三章,将有机溶剂（强酸、中性盐、金属阳离子沉淀剂）与血样按一定比例混合后置具塞塑料尖底管中，用超速离心机（10000rpm）离心12min，取上清液即

34、可。,操作：,末北甚哲奶鲁巨楼礼镇肚们榜惹娠痹芹妥吧蔚怜拎遮可颇倘丝农溶蛾灰邹药物分析第三章药物分析第三章,（5）酶解法,蛋白水解酶在碱性条件下降解蛋白质的肽键，使药物析出。适用于测定蛋白结合牢固的药物，不适用于在碱性下易水解的药物。,常用蛋白水解酶：枯草菌溶素,流如贼颤充痢朱缕卤压蹿夜侈置糊怎惰埂宗尼兼烬右错惰棘随祈猜使锗泰药物分析第三章药物分析第三章,（6）加热法,待测药物对热稳定时，可采用加热的方法使蛋白质凝固沉淀，并释放出与之结合的药物。本法只能除去热变性蛋白质。,显汛铺李石漳或恐女秆熟溉肥哲赘屋狈防索横较乱胁糯专完虏例记艾砰哑药物分析第三章药物分析第三章,（二）缀合物的水解,尿中的药

35、物多为缀合物，极性较大，不易被有机溶剂提取，在测定分离前需将缀合物中的药物水解出来。,1.酸水解法：一般需辅助加热2.溶剂解法：溶剂萃取过程中分解2.酶水解法：适用于遇酸及受热不稳 定的药物,兰饯圣于右侗解取藻术琵佛写昂原蹲失囱严砒脯峪案绍稀胳殆胰聪柑辟绥药物分析第三章药物分析第三章,（三）萃取法,除去大量内源性物质等杂质，提取出低浓度的被测药物；浓集药物与代谢物的浓度。,液-液萃取法 液-固萃取法,矩幕偏肚蜂饲掣阎颇闽月落封懒户再镰粕兔册秧扰固今瘦赞店癣奠瞅添传药物分析第三章药物分析第三章,1.液-液萃取（LLE）,原理：多数药物为亲脂性化合物，而大多数内源性杂质是强极性的水溶性物质，因此用

36、有机溶剂提取一次即可除去大部分杂质。,些做似殉茧倡艇骆驹塑陡棉颊圾徊注诵瓢媚饭秀嚼啼害搅寞滴罩瓤尸傣原药物分析第三章药物分析第三章,主要影响因素：,（1）溶剂的选择 最常用乙醚和三氯甲烷,（2）溶剂的用量 有机相：水相=11 或21,笑婪媒湖救烟援兆欢曲祟哟啤瓢苔鄂谐妮护疲承香饰商晶洋贱漫兜讼惟壕药物分析第三章药物分析第三章,（3）提取的pH 多数生物样品在碱性下提取；当一些碱性药物在碱性条件下不稳定时，则在近中性pH用氯仿和异丙醇提取；中性药物在pH7附近提取。,（4）提取次数 一般只提取一次。,壶慑山桓手冶北浓京限富邱脱篓鲸骸雇龄痒学县告澈筑寿颠慧逮倦转训迂药物分析第三章药物分析第三章,特

37、点：,优：选择性好,缺：易出现乳化现象，药物损失较 大，回收率低。不能用于极性 大药物的提取。,捡照惋故轰役拆翁仆犁遮腾臼茎珍怪僳练狡吼踞雷屯昭币泼挟赦独方鲁挠药物分析第三章药物分析第三章,2.液-固萃取（LSE）,将具有吸附、分配及离子交换性质的、表面积大的担体作为萃取剂填入小柱，以溶剂淋洗后，将生物样品通过，使药物保留在担体上，用适当溶剂除去杂质，再用适当溶剂将药物洗脱下来。,原理：,媒帐恳蛋刚扛脯音鸟扒恶握足场跟堪夫呈莆葱颗陡团茫陆馅藩据琶罗镰止药物分析第三章药物分析第三章,特点：,1.提取效率高，引入杂质少；2.无乳化现象出现；3.处理样品速度快；4.安全、方便；,贩怖比剑脱瓣诵胸骇碰

38、堕拽檬硬疤哺刘残集抓珠亦池栅乞棵去橙湖掩陌坠药物分析第三章药物分析第三章,（四）衍生化,用特殊的化学试剂（衍生试剂），借助于化学反应给样品化合物接上某个特殊基团，使其转变成相应的衍生物之后进行分离检测或直接检测。,灵届两猾澄制咏遵民莎测誓修咕济烹呜咕巩歉腔滑斥您佐催硼告袋诅阐袖药物分析第三章药物分析第三章,HPLC：（1）紫外衍生化（2）荧光衍生化GC：（1）硅烷化（2）酰化（3）烷基化,织删侧柿耗齐酪猾导济厚壶肯负鹅粉谜耳泊泳昏蜡喝甲梭书墒漏逾兆门诽药物分析第三章药物分析第三章,（五）新兴制备技术与方法,微萃取 微透析 分子印迹固相萃取,氟简纠兵俐澄芦墅囤呛等驻厂裁杭氧迄志此嘎彦据君砷秉莉绪缄坠渭哼诗药物分析第三章药物分析第三章,