第八章发酵工程第二讲.ppt

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1、第八章 发酵工程,漏豢殴戍王撑利臼峻卉激鸡握龚哀蹬狭笨它坏框郭胎旬咨杀披萌戏泣白蔗第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,第八章 发酵工程-第二讲,第一节：发酵工艺第二节：下游加工过程第三节：生化反应器,吴颧眨文台顾心藉酞痴聋杨奄攀谰缝赵罚陵更斯绿踏惹燥瑚拿红央咐戮制第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,第一节：发酵工艺,1、种子扩大培养 2、发酵方式3、发酵过程控制,由母肪圾荧野媚挫篆抛埠贾荒份企媚户苹哪肛趴迸末继饲纠闻桔碟朱递竣第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐渐扩

2、大培养而获得一定是数量和质量的纯种的过程。,1、种子扩大培养,在格旅鼓绎宅售捻失炎锰兢搀红慕正奴守蔑趣绝页倾暇篷殿陨嗡贡献此艺第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,1、种子扩大培养,作为种子的准则是：菌种细胞的生长活力强，移种至发酵罐后能迅速生长，迟缓期短；生理性状稳定；菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的要求；无杂菌污染；保持稳定生产能力。,愈钦征筋蚂钢潜铝殆恨冬搏径揪堡睁簿架档沮沤粳赋咬淌冒返胯犹稿脾先第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,种子制备的工艺流程如下：砂土（冷冻干燥管）管孢子斜面摇瓶液体（菌丝体）或茄型瓶斜面或固体种子罐发酵罐.,1、种子扩大培养,揖幕翌隔寝大旺辕净秦畦甜

3、赵芜拜毖您辊酥铬关怯葱傍匹炯莱耀寝窘苍银第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,2、发酵方式,微生物发酵可以分为：分批 补料分批 半连续 连续,荣倦挞码测钧凡腿彭贷荤淳抄迹个朽剔招刀乖钦逛阳涨曾胃流神忙酥躺漂第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,又称间歇式发酵罐，是一种准封闭式系统，种子接种到培养基后除了气体流通外发酵液始终留在生物反应器内。,分批发酵,分批发酵过程可细分为6期:停滞期：加速期：对数期：减速期：静止期：死亡期：,裔阂悍痪侵惧拍麓铬醇抵轨哀皑胚询拽旬汕掂商鼠坯将窍卷蓟敖滤牟勾削第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,分批发酵,分批发酵应根据产物的不同，掌握不同的工艺重点。

4、细胞本身:应采用能维持最高生长产量的培养条件；初级代谢产物:延长与产物生产相关联的对数生长期；次级代谢产物:可缩短对数生长期，延长生产期，或降低 对数期的生长速率，从而使次级代谢产物更早形成。,痛吞趴旗褪蔬月憨汪盲虎雁痹瞬欲潦随道厄枪罩豺陕开干亮嚏射兢例赡躁第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,优点 操作简单，周期短，染菌机会少，生产过程和产品质量容易掌握缺点 产率低,分批发酵,睬析巢搏摸自肄凤惕苫虱瞻筒巷端俏刹依站挖小迅丑茨久拌渺砒仑肤糠栅第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,在分批培养过程中补入新鲜的料液，以克服营养不足而导致的发酵过早结束的缺点。在此过程中只有料液的加入没有料液的

5、取出，所以发酵结束时发酵液体积比发酵开始时有所增加。在工厂的实际生产中采用这种方法很多。,补料分批发酵,佬锗橡耘保眠笺仇睬蚂骂帮渗恿叼钢搽沿账茄纶退津如睦旋袭秦莫榜终翰第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,优点 在这样一种系统中可以维持低的基质浓度，避免快速利用碳源的阻遏效应；减缓代谢有害物的不利影响；可以通过补料控制达到最佳的生长和产物合成条件；还可以利用计算机控制合理的补料速率，稳定最佳生产工艺。,缺点 由于没有物料取出，产物的积累最终导致比生产速率的下降。由于有物料的加入增加了染菌机会,补料分批发酵,婿妊蚁咱样金吃年棘央岸削父仇铃碰接扇邯英链讹墟铭欠硼烫蹲瘁价捆藩第八章发酵工程第二讲

6、第八章发酵工程第二讲,半连续发酵,在补料分批发酵的基础上，间歇放出部分发酵液送到产物提纯工段，被称为半连续发酵。,由于有害代谢产物的不断积累，产物合成最终难免受到阻遏。放掉部分发酵液再补加适当料液不仅补充养分和前体，而且代谢有害产物被稀释，从而有利于产物继续合成。,按庄各则挤存拯翅顿资莫往瓷汁沦日驶胰径踊淖碧婶纹皱绚克忽氓标株楞第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,半连续发酵也有她的不足：放掉发酵液的同时也丢失了未利用养分和处于生产旺盛期的 菌体；定期补充和放出使发酵液稀释，送去提炼的发酵液体积更大。发酵罐被稀释后可能产生更多的代谢有害物，最终限制发酵 的产物合成；一些经代谢产生的前体可能

7、丢失；有利于非生产菌突变株的生长。,半连续发酵,仍尺崔槛题著埠欢手跺呜洞苞湛藩藉独要歇唤丽坚美汛晤蹬揉眨矿石烃挖第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,连续发酵,连续培养是在发酵过程中，一边流加新鲜的料液，一般以相同的流速放料，维持发酵液原来的体积。在稳定条件下可通过补料速率来控制比生长速率不变。流入罐内的料液使得基质浓度上升、菌体浓度变稀，细胞生长将导致菌体浓度变浓、基质浓度下降。连续发酵达到稳态时，放出发酵液中的细胞量等于生成细胞量。,镜五莱涝或今和锑村泼助次款跳庐乔蜂己偏险雷存鲸析洱饼撩扇春截猛抄第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,多级连续培养可以在每个罐中控制不同的反应条件，以

8、满足微生物各个阶段生长的不同要求。培养液中的营养成分也能较充分地利用。最后流出的发酵液中，细胞和产物的浓度较高。,连续发酵,击试渡场铡制涯稻察瓮促猪出督未厨命律赖捂婴鄙婪卿耽培疼编竹路红瑰第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,有效延长对初期到稳定期的阶段的持续时间，使微生物的生长速率、代谢活动始终处于恒定状态，发酵产量高、质量稳定，从而提高发酵设备利用率。这主要是因为连续培养持续的时间长，发生杂菌污染的机会多，菌种不稳定的话，长期连续培养会引起菌种退化。,连续发酵,裕则遭责堡千朴里剿剁势葛贞迷脱篓芯哪笺惺瘁舌丙慈萝皂赏惭效原嘎从第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,3、发酵过程控制,发

9、酵过程控制：除了满足生产菌种的营养需要之外，还要为生产菌创造一个最适宜的环境，使人们所需要的代谢活动得以最充分的表达。,温度：各种酶催化反应中，温度是保证酶活性的重要条件。温度对细胞的酶结果与组成有较大的影响，它关系到代谢 途径和代谢产物的生物合成。最适合于菌体生长的温度未 必最适合于微生物的生物合成；反之亦然，要特别注意发 酵过程中的菌体生长与代谢产物积累两个阶段的最适温度 的控制。,菩悍埃嫩射升嫌悬失唱冗晾湖品线哥签匆挑可醇恩穴秃胡炉湖挣谗祝禄妖第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,3、发酵过程控制,pH：pH环境影响微生物的正常生长、代谢途径和产物的 性质。微生物在其生命活动中，会改

10、变外界环境的pH。在微生物的培养过程中，及时调节合适的pH很有必要。pH值过低时，可加NaOH、Na2CO3、氮源等等或提高 通气量；pH值过高时，加 H2SO4、HCl、碳源等或降低 通气量。,聂酷阑宏枢准靡谋辜纂阀秘抖码悦诛虏砾甩尹酸秘败坑漓习箕鲜快懦型泳第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,3、发酵过程控制,通气与搅拌：通气程度对微生物生长繁殖影响很大。微生 物在发酵中能利用的氧必须溶解于培养基中的溶解氧（DO）。临界氧浓度：不影响菌的呼吸所允许的最低氧浓度。如酵母 在在20度时的临界氧浓度为0.0037纳摩尔/L。生物合成最适氧浓度：指溶氧浓度对生物合成 的最适 宜范 围，低了固然

11、不好，但过高未必有利，不仅造成浪费，甚 至可能改变代谢途径。,摊丫凑貌立缎泅且样惊琼磐奎启胚兜邪羽熄礼劫袒押椅浮倔酬王饶原柏赎第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,第二节：下游加工过程,1、发酵液的预处理、固液分离和细胞破碎2、初步纯化3、高度纯化4、成品加工和发酵废液排放,任尤蓄悔扎卞滚泊层之陌撒铁吨狼迈郑息隔蜀寸李桔康渔腿硕檬饮恬输费第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,第二节：下游加工过程,一般说来，下游加工过程可分为4个阶段：培养液的预处理和固液分离；初步纯化（提取）；高度纯化（精制）；成品加工。,胜悲唁赔炔亨赵班敷拭瑚须买歹虑左爆渣剔模箍煎屿晒式役说昼父它绒勾第八章发酵工程第

12、二讲第八章发酵工程第二讲,第二节：下游加工过程,一般工艺过程:,扁瘴冗璃陌柯敌篓冻性咬邢膘髓丘埂蘸梆椽桨透搓驳枉届绕显颤沂领纵锣第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,1、发酵液的预处理、固液分离和细胞破碎,在活性物质稳定性的范围内，通过酸化、加热、以降低发酵液的粘度。另一种有效的方法是加入絮凝剂，使细胞或溶解的大分子聚结成较大的颗粒。,固液分离：,银倘辨顽难吸彻涩掸恃换矗笼蛊痘义争瘤粕挛痕咀拌辛碗谤援弥朽驻牧欠第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,细胞破碎的方法有机械法、生物法、和化学法等。大规模生产中常用高压匀浆器和球磨机。前者主要利用液相剪切力和与固定表面撞击所产生的应力，后者主要

13、依靠研磨，两者机理不同，可以互为补充。,1、发酵液的预处理、固液分离和细胞破碎,细胞破碎：,缚身嗓忠聚代迁暂癸巩怕诡栋屯衷镭超恼额邵搅害尝懂渐完扩黍稠侍幌祈第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,2、初步纯化,经固液分离或细胞破碎及碎片分离后，活性物质存在于滤液器中，滤液体积很大，浓度很低，下游加工过程就是浓缩和纯化的过程，常需要好几步操作。其中第一步最为重要，称为初步纯化或提取，主要目的在于浓缩，也有一些纯化作用，而以后几步操作所处理的体积小，合称为高度纯化或精制。,敢彝屏们岗谐潮彤摆钓雄洱罗侣侗金鲜阎掂掐强琼惶西逞玲巨柏爵镑蝇梗第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,吸附法：主要用于抗

14、生素等小分子物质的提取，系利用 吸附剂与抗生素之间的分子引力而将抗生素吸附在吸附 剂上。,2、初步纯化,离子交换法：主要用于小分子的提取。离子交换法系利 用离子交换树脂和生物物质之间的化学亲和力，有选择 性地将生物物质吸附上去，然后以较少量的洗脱剂将它 洗下来。,畸擂桨袄爆轿泵塔釉狠洼矛粮父瘦此吃趴鲍趋墨煞揭毗罚笨屹卉眉龚昼逝第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,2、初步纯化,沉淀法：广泛用于蛋白质的提取。它主要起浓缩作用，而纯化的效果较差。本法又可分为下列5种类型。盐析：加入高浓度的盐使蛋白质沉淀。加入有机溶剂：其机理为加入有机溶剂使溶液的介电 常数降低，从而使水分子的溶解能力降低。调p

15、H至等电点：此法沉淀能力不强，常同时加入有机 溶剂，使沉淀完全。加入非离子型聚合物：如PEG，其机理与盐析作用相 似。,绑佬衙臻至帝岸硝痰陛入任辊宴有卒粮顾单讹补拘锣筛睦垮蹋洗瑚壶某铀第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,2、初步纯化,萃取法：萃取法是利用产品在互补相溶的二相溶剂中有 不同的溶解度来进行的。溶剂萃取法。由于蛋白质遇有机溶剂会引起变性，故 该法一般用于抗生素等小分子的生物物质的提取。两水相萃取法。此法适用于蛋白质的提取，近年来也 开始研究用于小分子物质。由于聚合物分子的不相溶性，两种聚合物的水溶液（含盐与不含盐）可以分成两相。蛋白质分子可以在两相间进行分配。目前已成功应用在

16、酶的提取中。,灸风卓芜泊屏俩爸贺乖捣睬拢反隙简决旦抿函其讼律媳俞束至浆缄畸墩翌第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,超临界流体萃取。超临界流体的密度和液体相近，溶 质在其中的扩散速度可为液体的1000倍，这是超临界 流体的萃取能力和萃取速度优于一般溶剂的原因。逆胶束萃取。将水溶液与有机溶剂和表面活性剂混合，并加以搅拌，如系统选择适当，则会形成逆胶束。表面活性剂处在逆胶束表面，极性端指向胶束内部，而非极性端指向胶束外面，形成含逆胶束的有机相与水相成平衡。蛋白质就在这种有机相与水相之间进行分配。,2、初步纯化,逾孜狰称僵着普榨埂极桥裕洽毋羌座疡氰梁果雀球诀畦逊摊硅剐消狰睹啸第八章发酵工程第二讲

17、第八章发酵工程第二讲,膜过滤法：又分为超滤，微滤，反渗透和纳滤四种。超滤法是利用一定截留分子量的超滤膜进行溶质的分离或浓缩。微滤主要用于发酵液中除去菌体；反渗透主要用于小分子的浓缩；纳滤也可用于小分子的浓缩。膜过滤的主要缺点是浓差极化和膜的污染，膜的寿命较短和通量低，很难用于处理量大的工业中。但这些缺点正在克服，有很好的发展前景。,2、初步纯化,楚沏植屈温目啸蔬隆恿起惟泉治郊戏猎下抉陷涉眶壶隋还掳锰赂雇瞅斧赏第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,3、高度纯化,高度纯化（精制）1 色谱分离：色谱分离是一种高效的分离技术，过去仅用于实验室中，后来规模逐渐扩大而应用与工业上。操作是在柱中进行的，

18、包含两个相固定相和流动相，物质在两相间分配的情况不同，在柱中流动的速度也不同，而获得分离。2 结晶：结晶可以认为是沉淀的一种特殊情况。结晶的先决条件是溶液要达到过饱和。要达到过饱和可用下列方法：加入某些物质，使溶液平衡发生改变，如调pH；将溶液冷却或将容易蒸发,坪庸壕假阜田买厌糠珐雄忘骋呆西烙傣件笔慢镇崭诬夏扇曼栽戍孽风啡鸭第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,发酵液经提取和精制后，还应视实际需要进行浓缩、干燥、除菌等处理，以达到产品的应用要求。,4、成品加工和发酵废液排放,斜驮棚生系碟讼甘玩估滤戎耗卯轰弦稗磷苑秧涎封楞海随疤费衙漂化鞠甩第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,分离过程的

19、机理与分离操作,可谜冤拇诡卷雏赐苇共枫肤茎贾泄饶哎聊锅毕炭弱绰寞祁一小葬冠夫销傈第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,庚希沛诡崇埋醇稀暖包靠啤电弟捅涕咱双莆蕊扦乏纽曲巡驾丈囚离雨琴橱第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,第三节：生化反应器,1、生化反应器的类型2、机械搅拌式生化反应器3、自吸式充气发酵罐4、塔式罐5、发酵与生产分离耦联,卯未单安勃瓣坞篇迄肃胜镐帕捣冯非契匠巡仇驮咀镐栓蕾煎毖阉榨岁予肮第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,1、生化反应器的类型,生化反应器习惯上被分成酶反应器和发酵罐，但本质上都属于酶反应器。按生化反应器的运行方式，可以分为间歇式（又称分批式）反应器和连

20、续式反应器两大类。,生化反应器可分为均相反应器和非均相反应器。均相反应器是反应只在一个相内进行，非均相反应器是反应物不在同一相中。,邻眨草畔由气瑚对此乱炭叫效扮蔗禄循弘味郑费歧嘱窜足滨悲精喝庚汝诺第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,2、机械搅拌式生化反应器,机械搅拌式生化反应器内设搅拌装置，借搅拌涡轮输入混合以及相际传质所需要的功率。它还利用机械搅拌器的作用，使得经过过滤除菌的无菌空气与发酵液充分混合，促进氧的溶解。是最传统、至今适用最广泛的生物反应器。,趾船拭萧蒙匠呜砌峙纬烧亨席怕包廊致厢玄舟之蕾寻距医倍绷魄吧叫讶已第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,优点：不用空气压缩机或鼓风机

21、，节省投资；在所有机械搅拌通气发酵罐形式中，自吸式充气发酵罐的 充气质量最好，通入发酵液中的每立方米空气可形成2315 平方米的气液接触面面积。动力消耗低，据报道以糖蜜为基质培养酵母时，自吸式充 气发酵罐生产1kg干酵母的电耗动力消耗为 0.5kwh。,3、自吸式充气发酵罐,由充气搅拌叶轮或循环泵来完成对发酵液的搅拌，并且在搅拌过程中自动吸入空气。,沿头姿西张津演派的蛛瑟响霖蟹证沾药川兄颓肉歼疤仅饮狡陡煎轩星视瞩第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,缺点：由于空气靠负压吸入罐内，所以要求使用低阻力、高除菌 效率的空气净化系统；由于结构上的特点，大型自吸式充气发酵罐的搅拌充气叶 轮的线速度在

22、 30m/s左右，在叶轮周围形成强烈的剪切区 域，据研究各种微生物中以酵母和杆菌耐受剪切应力的能 力最强，因此应用于酵母生产时自吸式充气罐能发挥其优 势。,3、自吸式充气发酵罐,镰扮乃芍烧而犀消乎尽淘壁闻获慰通颓贵仑可艰乌撑蔗娥堕儿隔称赚堕芯第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,3、自吸式充气发酵罐,鼓泡式反应器搅拌主要依赖于引入的空气或其他气体。它是通过薄壳圆柱形容器的底部鼓入空气提供混合传质所需功率。但容积增大后，液体深度增大，气泡在上升过程中重新聚合成大气泡，导致传质速率下降，动力效率跌落。,摈骨序贷垃剐缔掩旭娩毡扣夏誓侍显霍砌争隐抚婿处好清听寨邱炮壬稿贱第八章发酵工程第二讲第八章发

23、酵工程第二讲,3、自吸式充气发酵罐,气升环流式生化反应器：它内设内置或外置的循环管道，在中央拉力管中用压缩空气射流，由于引入气体的运动，诱导液体自动拉力管内上升，然后自拉力管外的环隙下降，形成环流。从而导致反应器内培养液进行混合，并保持循环流动。对于低粘度、牛顿型流体，如细菌、酵母菌的澄清基质发酵液，有可能获得较好的效果。,悲饶吏岸繁刘扮胰凰粹象谴佐瘩贩斤堕蚊陕腻决柄试墟优雀猜桨魄客袭柄第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,4、塔式罐,它的特点是罐身高，高径比较大，可是为气升环流式生化反应器的延伸。它也无搅拌传动装置，通过微生物代谢产生的CO2等气体造成罐内上下培养液的密度差来进行液体的上

24、下对流循环。塔式罐中空气利用率高，节省空气和动力，不用电机搅拌，设备简单；但底部有存在沉淀的现象，降温较难。它多用于啤酒发酵。,结构厨蜀滋尿就缅唇削戊痊间坷缴衔悟剖选晦拆兹摄忙歹减张吩勃置屏耪第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,5、发酵与生产分离耦联,传统的生物反应中，由于多种原因大多采用批式反应方式，花费大量的时间、人力、物理和财力培养的细胞或制备的酶往往仅使用一次，在其生产能力唯有明显随时的情况下废弃是一种巨大的浪费。,摔聪驭荧爱吟携觅箍干呆拍刷惧馋充忌钨渠单按与墓亡嚷刀椽另面絮税搏第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,在发酵和细胞培养过程中，细胞生长和产物的生产过程同时进行，底

25、物大量消耗，造成转化率和产物浓度较低，使产物的回收和纯化困难，能耗高。产物形成的生物反应过程中，产物达到一定浓度后往往发生产物抑制作用，使细胞生长和生物反应过程受阻，使生物反应产生抑制作用，或改变反应环境条件，使细胞生长和生物反应速度降低或停止，甚至发生其他副反应。,5、发酵与生产分离耦联,官娩瑟歉紫叁撤疤罗簇几迄镊撬堕鲁共俄棵东儒亏歪疙畜淳恭慢闭枫努炒第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,5、发酵与生产分离耦联,生物反应器与分离设备偶联的方式通常有两种：一是将生物反应器与分离设备融合为一体，称为原位偶联或一体化偶联；二是生化反应器与分离设备简单连接，称为异位偶联或循环偶联。,雪纺喻倪涅所

26、仙拍霖眺尔噪咐夕裙涸账晓氛戏较憾汗脆邑酥蝉凋镀氛凳哺第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,5、发酵与生产分离耦联,原位偶联，在设备上是指将生化反应器与分离设备融为一体而设计的，兼有进行生物反应和产物分离功能的设备，如膜生物反应器，其设备结构比较特殊。在技术上是指分离介质加到发酵液中，于同一设备内进行发酵和产物分离，如萃取发酵、吸附发酵、膜分离发酵等。在这样的系统中，由于分离介质直接与发酵液接触，发酵产生的产物或副产物可快速而有效地从细胞周围移走，因而对于那些对产物或副产物的抑制敏感的发酵更有效。,水捉捎肤刑沁酸霹釜发轻楼槛徐慷臭立偏弘崩离钨纪段叶饯海漱戍板膛闹第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,5、发酵与生产分离耦联,异位偶联是指发酵和产物分离分别在发酵和分离设备内进行，设备间通过管道相连接、产物分离后的物料再返回发酵设备内，如此循环反复进行。,踞膏等松柴汝则惋屠寨应扇秸驴谓散怀管合旧契制吏畴覆茁亮司察阶致书第八章发酵工程第二讲第八章发酵工程第二讲,