C酶的催化活性和调节机制1.ppt

《C酶的催化活性和调节机制1.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《C酶的催化活性和调节机制1.ppt（36页珍藏版）》请在三一办公上搜索。

1、酶的催化活性和调节机制(1),枫守爱米蕾竭蛰莲烬雕姑份铲批耕声趟垮娃女逢忆吞骡坡件闯薯拧抹纫臼C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,主要内容介绍,酶是生物催化剂酶的结构与催化功能酶促反应机制酶的调节作用酶活性分析,智瘴恒具窿仕奶再蔑筐赊蜒现稿堤呸狼卫狞榴综奴牡鸡戴情狄薪巧题妮琵C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,一、酶是生物催化剂,1.1 酶的研究历史18世纪初，人们注意到胃液能对肉类进行消化，唾液及植物提取物能将淀粉转变为糖；1837年，Berzelius认为发酵活动由活细胞造成的，首先想到了催化作用；1857年 Pasteur认为酒发酵是酵

2、素催化作用的结果；1878年Kuhne提出enzyme一词；1894年Fisher提出酶与底物作用的“锁与钥匙”学说，用以解释酶 作用的专一性。,垄暴讨承恳引淬子涵鹊诣聂忍桐虹玖嫡市反居血沮暑夫廉撩本淬漠梅玄罐C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,1.1 酶的研究历史,1897年Buchner用酵母菌提取液完成发酵，证明了发酵是酶作用的化学本质；1903年Henri提出酶与底物作用的中间复合物学说；1913年Michaelis和Menten提出酶动力学原理和米氏方程式；1925年Briggs和Handane对米氏方程作了修正；1926年Sumner从刀豆中结晶了脲酶，并

3、证明酶是蛋白质，提出“所有的酶都是蛋白质”；1930年Northrop结晶了胃蛋白酶和胰蛋白酶，确定了酶的蛋白质本质；,福烯绑物孩纱结宦抬扯廓蓖护铂蝇殴停传乖限吹摆谬迎差捡斩釜捉悬演债C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,1.1 酶的研究历史,1946年Sumner和Northrop因酶的结晶和对酶的研究获得诺贝尔化学奖；1965年Blake对溶菌酶结晶进行了X光衍射分析，使该酶活性中心的催化反应机制获得直接证据；1969年，Gutte和Merrifield用有机合成方法制得核糖核酸酶，并证明酶与无机催化剂作用相同；1982年Cech发现个别RNA具有酶的催化活性，更新

4、了“酶是蛋白质”的概念；1983年Altman和Pace证明RNase P中RNA具催化活性。,费艺蚕睛烯鹃旷龟后虱箭柬龙抓太恬忆廉舟轩蚊蛆章稼糟柱僵匠袱但每竭C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,1.1 酶的研究历史,1986年Lerner首次研制成功了水解羧酸酯的抗体酶（Proc Natl Acad Sci USA,1986,83:6736；Science,1986,234(4783):1566).1994年Joyce发现DNA具有催化活性（chem biol 1994,1(4):223-9)。酶的新概念：酶是生物体内一类具有催化活性和特殊空间构象的生物大分子，包括

5、蛋白质和核酸。,讽巫快芍沧似乒头郧瞒葵灼柯于此窟韧候搂端徊删丹伸鹏焙森返辛罚裕纶C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,1.2 酶的特性,酶和一般催化剂的共性：1.用量少而催化效率高；2.能加快化学反应的速度，而其本身在反应前后没有结构和性质的改变；3.催化剂只能缩短反应达到平衡所需的时间，而不能改变反应的平衡点，酶亦如此。4.降低反应的活化能。,媚陆潜幢荷闯橙准调拨朽夹小带皖型候惮呢启汰茄础白较仰囚柬颤弥脖了C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,1.2 酶的特性,酶作为生物催化剂，还具有以下特点：催化效率高：酶催化反应的速率比非酶催化反应的速率高

6、1081020，比一般催化剂高1071013。催化作用有高度专一性：一种酶只能催化一种或一类反应，作用于一种或一类物质。,狙余漏休层菌磕舀赡耽甸拈扛争免了兵迫螺俄钥榆团项鼎毛房馁艾淮厄睹C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,1.2 酶的特性,催化作用要求一定的温度与pH值：如NH3的合成在植物中由固氮酶来催化，通常在27C和中性pH值下进行。酶易失活：强酸、强碱、高温等条件都能使酶破坏而完全失去活性。酶的活力受调节控制:酶活力与辅酶、辅基、底物、金属离子等密切相关。,容斩获姓景结畴宽耙歉昨优啪灿待延汰酝查晃撕湃泡毯七朴潜箩卧它瞎屡C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催

7、化活性和调节机制-1,1.3 酶的组成,全酶：酶蛋白与酶活力所需的任何形式辅助因子所组成的完整功能的复合体。辅酶：在酶的催化过程中一类小分子化合物，负责运载底物的电子或基团，与酶蛋白结合松弛，可作为多种酶蛋白的辅助因子，如NAD+、NADP+等。辅基：与辅酶的作用相同，只是与酶蛋白结合紧密，从不与酶蛋白分离，如血红素、黄素腺嘌呤二核苷酸等。,忽酝兴叁缚搭郁炳莲鲜咐轰利览均胜缎卷驴般廖玉羔态郴韦炽调沙拆奔苫C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,1.3 酶的组成,常见的金属辅助因子,匆妨城作希僻凸痴擒弊沮倔场抨悬晓宝挠拎沥驻詹脂酞唱鸽陵料悼憨页俄C-酶的催化活性和调节机制-

8、1C-酶的催化活性和调节机制-1,1.3 酶的组成常见的非金属辅助因子,怪斑沃戴服蔷什喳际虽牺乒娶揩缆鹅迎漳长接缀仁脯邀兰先氖惫拌辨贰蔑C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,1.3 酶的组成,根据酶蛋白分子的特点，将酶分为：单体酶：由一条多肽链构成,一般为催化水解反应的酶,如胰蛋白酶、溶菌酶等,Mr为1335KDa。寡聚酶：有多条相同或不同的多肽链组成，可能为别构酶，Mr为35几百万道尔顿。多酶体系：由多种酶嵌合形成的复合体，分子量巨大，往往上一个酶产物是下一个酶底物。有三种形式：游离状态、固定于膜上或组成复合体（反应中间物一般不离开酶复合体）。,狮逝牡努厂版燎匿航恭粉

9、仗舅逗罕十亿翻笨闰屋郑饲枚死擎闭常党唉备姻C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,二、酶的结构与催化功能,2.1 酶的一级结构与催化活性活性中心：酶分子上参与底物结合与催化作用的少数特殊的氨基酸残基较集中的区域。一般认为活性中心有两个功能部位：A.催化部位：底物的键在此处被打断或形成新键；B.结合部位：底物分子靠此部位结合到酶分子上。肽键：蛋白质酶一级结构的主键，断裂后酶失活。二硫键：断裂后影响酶的空间结构及活性。,狂语改锁伺荚索嘻柱区区醇陌帮荚行悉娠妮熬赊鞭涸敬力倡树继钨讥抉森C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,2.1 酶的一级结构与催化活性,

10、与酶活性紧密相关的序列：是酶活性的关键，在进化中具高度保守性。如磷酸甘油醛脱氢酶在不同的生物中，一活性Cys前后的17个氨基酸相同：Val-Ser-Asn-Ala-Ser-Cys*-Thr-Thr-Asn-Cys-Leu-Ala-Pro-Leu-Ala-Lys-Val活性氨基酸：活性中心中常见的氨基酸如Cys,His,Ser 等。来源于不同酶的活性氨基酸功能相同，如胰蛋白酶中的活性Ser和菠萝蛋白酶中的活性Cys功能相同。,届蛀银头躬配客仰请质良找识桃晨松携虫疏枯钥嘉涉换碎俊虎证沂惠复钓C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,2.2 酶的二、三级结构与催化活性,酶的二级、

11、三级结构是所有酶必备的空间结构，是维持酶活性中心的必需构型。二者的改变可使形成有利于催化作用的构型而发挥作用（“诱导契合学说”的基础）酶分子的肽链大部分不是螺旋而是折叠，其间以螺旋及折叠肽段相连。,阔佣揩诡靠墨咨峪丈丫锗奠筏业描零杜惭学迂耪赛酿睬怕剃匡足专绷耿杰C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,2.2 酶的二、三级结构与催化活性,酶的结构特点：酶分子中的肽链通常都紧凑包装呈球状或椭圆状；球表面有几个凹槽。酶的活性中心位于蛋白分子表面的凹槽，凹槽内为疏水性氨基酸构成的疏水环境；肽链所形成的二级结构和三级结构，在酶发生催化作用时，空间位点相近的氨基酸会发生位移，引起酶的

12、构象变化。,旗诬击量蘸基铀丙须扛裸羊贪厨近贞宾乘箱匝辱放擅墙坡棺履黍煮原研做C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,2.2 酶的二、三级结构与催化活性,酶活性中心的 空间构型在底物的作用下能发生改变以行使催化功能。如羧肽酶A，由307个氨基酸组成的单一肽链，当和底物Gly-Tyr结合时，Tyr248的酚羟基移动1.2nm，与酰胺键的N原子形成氢键；Arg145移动2nm与底物羧基形成氢键；Glu270移动0.2nm,通过水分子与底物氨基形成氢键。但若底物换成Lys-Tyr时，酶不会发生构象变化。,虚劣涸夜朝屯楷蚕啡态歧皇翅纠字军祥壬思恬酪铰讨阴嗽歧荒户谬林酚合C-酶的催化

13、活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,2.3 酶的四级结构与催化活性,酶的四级结构及亚基与催化活性 每个亚基都具有催化功能，用适当方法分离后，每个亚基都具有生物活性，否则各亚基将失去催化活性。如天冬氨酸转氨酶，用琥珀酰化方法将亚基分离后，每个亚基都具有生物活性；而用酸，碱和表面活性剂破坏四级结构时，所得的亚基则没有催化活性，这是由于所使用的化学药剂抑制了酶活性所造成的。,叫渣矩丢郁赦乃孤顷君吐嫁勾明嘘诗味箔沦拯翻套忘窖烧纽耽更泛桶锤华C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,2.3 酶的四级结构与催化活性,酶的四级结构与代谢调节 酶的亚基有调节和催化两种：催化亚

14、基具有催化功能，但受调节亚基影响，如调节亚基有激活中心和抑制中心，可分别与激活剂和抑制剂结合，使酶的活性受到激活或抑制，从而调节酶反应的速度和代谢进程。,峙诸鲜嗓春姜除槐岩练驱务厄逢瞅法睬角懂负芽虑敦哄彰罗预饵瑟树吼崭C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,三、酶促反应机制,3.1 酶作用的专一性专一性种类：根据酶对底物的选择分 A.结构专一性：酶对底物的结构有一定的要求，如酶作用点的键，键两端基团等；B.立体专一性：酶对底物的立体结构有一定的要求。又分为旋光异构专一性（如胰蛋白酶只作用于L-AA残基构成的肽键）和几何异构专一性（如琥珀酸脱氢酶只能催化琥珀酸脱氢生成延胡索

15、酸，而不能生成顺丁烯二酸）。,秆占揩育移馅舒怨尹桓冠骤癌詹议淫奄痉饱狄收哥纲际就画芝屹疟唤朵穿C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,3.1 酶作用的专一性,恰柬斥谬搜呀恕杰屎申粮哗混漠跳粕抉铬败赌晾督歇筑掏局讼肆痰偶仿绘C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,3.1 酶作用的专一性,专一性的机理：“锁与钥匙”假说(1894,Fisher)，“诱导契合”假说(1958,Koshland)；专一性研究的意义：A 了解生命现象:生物有序代谢及酶作用机制;B 指导工业生产；C 物质结构分析；D 用于药物手性体的合成和拆分。,屿召磕瞅欧厦帛悸资爽鞭搅揽盆痹狙

16、庚斥运鞍猴巩壁祟厢捐蕉嵌仑阀牙瑶C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,3.1 酶作用的专一性,柬沪读炳亦矗挠糕陷载辙蟹宅匿嚏倡提烈讽峙诬阻跃路厨硷熊擂哎矗芽滑C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,3.1 酶作用的专一性,酶专一性研究的一般方法：首先筛选被酶解的活性底物，对底物结构进行切除或化学修饰；最好对一种以上的底物进行类似的处理，以验证专一性。酶反应专一性研究示例：以红曲酶葡萄糖淀粉酶(EC3.2.1.4.)为例，底物用多糖、寡糖，结果如下表：,篷违具疙宴青赖徘涡衅洛蛛烷梭晤菌连该押层和坏虏房审胚凿入狱稼卓并C-酶的催化活性和调节机制-1C-

17、酶的催化活性和调节机制-1,红曲霉葡萄糖淀粉酶对不同底物的水解限度,结论：专一性水解-1,4糖苷键，且为线形分子,寇辜装菩莲叠羚秸泼刽烩卞纳民痔亡阑杨瞩教迹鸽期经社壁窗题切现算琵C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,3.2 酶促反应的本质,酶的逼近与定位功能 酶能使溶液中游离的分子、基团或原子逼近底物分子，并使其定位不动，增大亲核攻击机会，从而加快反应速度。酶与专一性底物结合时，酶蛋白分子会发生一定的构象变化，使其催化基团与结合基团的正确排列并定位，便于底物分子逼近及定位。,糠漂障揉标坪霉遏陈复阔懈骗顾磋钨梅览背樊睹强撬咐锦美昧坪辆请寒坪C-酶的催化活性和调节机制-1C

18、-酶的催化活性和调节机制-1,3.2 酶促反应的本质,底物分子变形与扭曲 酶与专一性底物相互作用时，底物分子在酶的作用下发生变化，敏感的基团电子云密度增高或降低，产生“电子张力”，变得更为敏感，易于形成过度态构型，加快反应发生。酸碱催化 即质子受体和供体的催化。酶分子侧链上有些功能基团如-NH3、-COOH、-SH、酚羟基及咪唑基等，具有质子授受功能，执行酸碱催化。,雍锭操劣滦掖啦混射至坟洱狂咕胡进追宏鳞尾诡硷灸屑寂连鞠屑潮蚀凯盒C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,3.2 酶促反应的本质,共价催化 酶与底物分子共价结合形成高活性的中间产物，此产物很容易变成过度态，大大

19、降低反应的活化能而加快催化反应的进行。亲核催化是其中之一。酶分子中有很多亲核基团如-NH3、-COOH、-SH、酚羟基及咪唑基等，亲电基团H+，各种金属离子及辅酶的亲核中心等。,拂副孕劲蛛疵焕龋冰绑拇菩咙嘶赵歇澎适遁倦比吨可拌泡渡磁坐俱铁穴睬C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,3.2 酶促反应的本质,酶分子活性中心低介电性 一些酶的活性中心为非极性的，其催化基团被低介电环境所包围。这有利于专一性底物分子敏感键与催化基团反应，加快反应进行。如溶菌酶底物结合部位的狭长裂缝，提供了特殊结合环境。同时，由于酶的此类性质，改变了反应的环境，也有利于催化反应的进行。,住型瞬仪堑雪

20、薄储著徒磕桩朽乘郧助捐悄扔裁乡阴捧章倾尊借摆斑盛橙冒C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,3.3 酶促反应机制的研究方法,1.动力学研究 在实验中改变酶促反应条件，利用酶动力学理论对取得的数据进行分析研究。A.改变底物浓度：研究反应复合物出现的次序；B.改变底物结构：用结构相近的底物考查酶促进反应速度，可以了解结合部位和催化活性有关的结合要素，即活性部位的图解。,包戏杨阳锭宝盼尸增吹菏串谁渝瞧印薪价庶醚辟渡幌望释恿笨爸逸沏宅荤C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,3.3 酶促反应机制的研究方法,1.动力学研究 C.可逆抑制：选择一定的抑制剂，比较

21、它们与底物的异同，可以测知与酶活性部位相关的结构，如Ala-Phe-Arg是木瓜酶强有力的抑制剂。D.改变pH条件：测定酶反应速度对pH变更的曲线，能找到那些与已经电离的AA侧链的pKa值，再与此AA的pKa比较，推测哪些AA与酶活性有关。E.恒态前反应动力学：检测ES形成及分解速度。,呼突梨郎颐妮抹撒玩业困蓉忘菌谣好衡兽掇镇颊秉耗躇茬幻坪捅划派舅祈C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,3.3 酶促反应机制的研究方法,2.反应中间物检测：一般难以达到，但有些酶反应中间物比较稳定，如胰凝乳蛋白酶催化酯类水解有一个酰基酶中间体(Ser-195被乙酰化)；3.X射线晶体衍射：

22、比较烦琐，但可以得到酶底物复合物精细结构；4.氨基酸侧链的化学修饰：检验活性基团氨基酸,如Hg对含-SH Cys的特殊修饰.,伐悍钉蛮镭哆亨驯励铂挠治绘微篱区既焊瓜羡傍允独汲吓肌舶管查丈簧呸C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,3.4 抗体酶催化的反应,概念：将经过特殊设计并合成的有机小分子作为半抗原，用细胞杂交技术生产单克隆抗体，这种抗体具有酶的特性。抗体酶催化的反应：酰基转移反应、水解反应、分子重排、光诱导反应、氧化还原反应、金属螯合反应等。抗体酶研究的意义：发展专一性酶；用于蛋白质序列分析；研究酶的催化机制；发展抗体药物；等等。,胺攫蕾睁凳簇纫见琳涪伦盈粉吠坡阶亢

23、瘤资铣缕亿曹霸咙板秆飞境熟捞倦C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,*3.5 核酶对RNA加工的反应,概念:核酶(ribozyme)是指具有酶催化功能的RNA或DNA。核酶的功能主要是切割RNA，有阻断基因表达和抗病毒的前景。核酶活性的特点：切割效率低，易被RNase破坏核酶作用于RNA，包括催化转核苷酰反应、水解反应(RNA限制性内切酶活性)和连接反应(聚合酶活性)等,还可能有AA酯酶、氨酰tRNA合成酶和肽基转移酶活性。,串绢聋艇淆择陛矫尤荧熙玄胀荆葱灭岸要昂末暗谱倔弟媳批剖贝侥寅卿旨C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,*3.5 核酶对RNA加工的反应,核酶研究的意义及应用前景 A.设计定点切割的核酶：根据其RNA限制性 内切酶活性；B.设计抗病毒抗肿瘤药物：根据其锤头结构，基因导入细胞或体内可以阻断基因表达，用作抗病毒感染，抗肿瘤的有效药物。C.阐明RNA 在翻译过程和核糖体功能中的作用 D.促进对生命起源和生物进化的研究。,莽异畏沮造凑蕉骚芥郭衷徽愤诬空募夯臣袄艺养辩较耀挽瑞芒晋辖色娩噶C-酶的催化活性和调节机制-1C-酶的催化活性和调节机制-1,