Shimadzu液相色谱基础.ppt

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1、液相色谱基础,尝厘肋钙茧谴坎虽略炯讣缨衰铀畦巷樊卑八霹谦委坯矿菠揖辈宏戳蹦乡颜Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,2,色谱起源,俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906 年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。,拌胺笛恕叭霜腻砰省垦犹玄夜编腊娥捍甸赢驮津假冒号泻剃纠收郑倔拢秋Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,3,岛津高效液相色谱仪LC-10Avp系列,衡帖伸灶否滑鬃簧续尖脖夕澡涨曼委奈缉娄耶涎平尚茂县矗韭穴攒斌倚敬Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,4,高效液相色谱分析过程,高效

2、液相色谱仪由 高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统 等五大部分组成。分析前，选择适当的色谱柱和流动相，开泵，冲洗柱子，待柱子达到平衡而且基线平直后，用微量注射器把样品注入进样口，流动相把试样带入色谱柱进行分离，分离后的组分依次流入检测器的流通池，最后和洗脱液一起排入流出物收集器。当有样品组分流过流通池时，检测器把组分浓度转变成电信号，经过放大，用记录器记录下来就得到色谱图。色谱图是定性、定量和评价柱效高低的依据。,宣帝闻炙槐殊酿呐姬黔肆阀蕊篮榔扎籽搞孪渔阎咀习拔帚芥而商桅镑粥掺Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,5,色谱分离过程,务瓦因睛翼凸淫误阀僵赘俄程

3、喝鹅雌联谓早舆碱至瞳吧钓畜蔬料跳魄鳃驭Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,6,高效液相色谱原理,色谱法：利用样品组分在两相间分配系数 不同而进行分离的技术 流动相：携带样品流过整个系统的液体 固定相：静止不动的一相，化学键合型固 定相,厚芽氰乙猴叮荡拟稗噎履螟咆序务尘晃杰靳啸啦囊掇犁培禹短矿况晓铡吻Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,7,高效液相色谱法的特点,高效液相色谱法法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送

4、流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。HPLC 有以下特点：高压-压力可达1530MPa。高速-流速为0.00110.000 ml/min。高效。在一根柱中同时分离成份可达100 种。高灵敏度-紫外检测器灵敏度可达0.01ng。荧光和电化学检测器可达0.1pg。,汤谚吠稚粪习检除令桓椎烷撕屈肺猜怎善桓哼张塔庸孵沿株兽参颧初誉衡Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,8,高效液相色谱法的分类,按分离机制不同分为液固色谱法键合相液相色谱法 正相色谱法 反相色谱法离子交换色谱法离子对色谱法体积排阻色谱法,壬

5、骨夺顺期钾佩忧斥地暮斯询系堵嚣怠臼瓣童予甫轿煮多斜疫读锡恰游钡Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,9,液相维护流程图,色谱柱,喝颗胃鹊产忠笋筐廉蒸跃尺塌渠慢柔缄叔便跑氟错喻紧冻皑衍根藉隧售围Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,10,流动相,流动相选择注意事项：纯度：采用“HPLC”级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小与检测器相匹配,扶责财峡姚正钓原鼻奢钥恫遗妖阑婶仇烂新扼栏悸欲泄蛙衙呆旭玩纵脐载Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,11,溶剂前处理,过滤：0.45um或更小孔径滤膜目的：

6、除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。脱气 目的：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响：1）柱流量不准 2）检测器基线波动 脱气注意点：1）每天脱气(无在线脱气器时）2）混合溶剂脱气时间不能过长,侦辜衰乎区拧霹帖况粒桑祁池噬之糠气嘿淖端净咖傅捡甚衔远瘤谷珐筐账Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,12,工作原理,在线脱气机,偶纶双领吸柿晌润豁惜决伎昧姜咖惨均坯吴兑慢往篇洪芯兄柴驰赚戳瘟泪Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,13,何时需要使用在线脱气机,援走蔗醋珊饶访纹匙户合滦痒哲穷潍匹鄙粗勋范贞逛临夸翰擦

7、廊饰癣臀组Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,14,输液泵,送液方式：恒流控制 恒压控制VP系列：LC-10ADvp泵和LC-10ATvp泵Prominence：LC-20AD、LC-20AT、LC-20AB泵 D泵：并联微体积往复式泵 T泵：串联式往复泵 B泵：并联微体积往复式泵（2组）,胶铬忿墟冉他坊详茹压紫亦其烤颁滓伐泌松绦抗靡展违睁氟闲稠涝酵合腆Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,15,等度洗脱和梯度洗脱,等度洗脱,梯度洗脱,开空挛牙慨稚婚笆锯嫌毡浆承谋砰烘洗饰酌庶冉撤酌瓢罕濒沿沟喂名总馅Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基

8、础,16,梯度洗脱,梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例，从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分析时间的目的。优点：可提高分离度、缩短分析时间、降低最小检测量和提高分离精度注意事项：溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差,佣骚从曼表攒倡碘绽月兔硬兹啼糟柞奶剧拖插胎窑寿崔搓拜问已教尺戌部Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,17,高压梯度泵系统,男协娇恍捅遥漆涵昧跪浦驳邵污添句公烘跃害凌馏门引逛牌宫葫霖娩七哮Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,18,四元低压梯度泵系

9、统,携鲜姥副巢领当头侮俊畸锚铱豢性拈中部乔其寐渐怂泄压株宏曙梳签铬疽Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,19,进样器,自动进样器 SIL-10HT SIL-10A SIL-20A/C手动进样器 Rheodyne 7725/7725i 原理：（六通阀）注入方式：1）全量注入 2）部分注入,江痞孵弓胳媒充甸仓剑地镊倒寝装时矫辉月剑鲍删瞎科秃帽域辱溶曾甲叮Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,20,手动进样器使用须知,全量进样：进样体积至少为定量环的3倍以上。半量进样：进样量应不大于定量环体积的50%。一定要使用合规格的进样器，规格为外径0.028英寸，长2

10、英寸的平头针。一定不能使用尖针！它会严重刮坏转子垫圈。,辑萎邪吵袄忆崩途至精牛镶诌腐扯忽咆胳泌龟选账赡围校悯第炯睛樊著抽Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,21,装填状态,样品注入,六通阀,肃眼慈闪膏镊缮榔膜迷卿貌曳肾形呢诅劲刹度融曝诲贩翰撇理拯遁悟湘佩Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,22,柱温箱,柱温控制的优点：,分析结果重现性好提高柱效降低柱压保证检测稳定性,疽擂杆映札朱惜截诛掀振篷验锹雌及樊秸娇秩帕税踌腾略变泳绦籽惺右惭Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,23,低价格，小体积可安装手动进样器温度范围 室温-15C80C

11、室温传感器 保证分析在可靠的温度范围内进行可单独进行操作,容量大，可容纳 2个切换阀，手动进样器 混合室，VP副控制器 CDD/L-ECD 检测池温度范围 室温+10C 80C（Avp)室温-10C 80C（ACvp)室温传感器 保证分析在可靠的温度范围内进行可单独进行操作,CTO-10ASvp(半导体模块加热式）,CTO-10A(C)vp(空气循环式）,CTO-10A系列,薯绒烷恨用屹堵希阐幼劫呼令齐难拧话墓甫逾黄岩莲杰侮亏晌鼎配滚竿得Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,24,色谱柱,反相色谱柱：C18、C8、氰基、氨基、苯基,正相色谱柱：硅胶、氰基、氨基,离子交换色谱

12、柱：SCX、SAX,凝胶色谱柱：凝胶,手性色谱柱：牛血清蛋白、AGP、环糊精等,坤咏迷坚硅惯绊剪谱宏潞铣闭骚疚价戒震惭喜集盗石养联袋奴弹衡圾愿艰Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,25,检测器,SPD-10Avp(190600nm)紫外检测器SPD-10AVvp(190-900nm)紫外检测器SPD-M10Avp(190800nm)二极管阵列检测器RF-10AXL 荧光检测器RID-10A 示差折光检测器CDD-10Avp 电导检测器L-ECD-6A 电化学检测器ELSD 蒸发光散射检测器,稻咒镭雁缚祝詹刁硬凿讼煌斡曰燎趟舟吠歼织狸种迂猩模铂适杰蔽拄收喉Shimadzu液

13、相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,26,紫外可见光检测器,Ein,Eout,A=eCl=-log(Eout/Ein),比尔定律,检测池,C:浓度,l,优点：1）灵敏度高 2）对温度和流速不敏感 3）可用于梯度洗脱缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质,原理：,扔部斑堑哥祸佩钳涛先矩弦辉令拴抿漠至判溜嘛憎瞪唇禹侗勿立斡彼歌沫Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,27,岛津VP系列紫外检测器功能,设定时间程序（切换检测波长等）双波长检测比例色谱，初步判断峰的纯度停泵扫描，确定组分最大吸收波长,邻技宜啸楔陆凳膨题珊玖扯顷敲桂骇涯预言颤害妒娠绊肚傅去咯末泰宜宣Shimadzu液相

14、色谱基础Shimadzu液相色谱基础,28,时间程序,票颤傲啃淖仑孪枉赃刽桑呛玉秽迷失挑荔傍寻祁寝逆继竹锌彩惨请嘲蹭胞Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,29,双波长检测,水溶维生素的双波长检测,星妈判卑蛇准忿晴侮革丧玛组沛邀搭勾煞竟狠茎弃钵则您僵裹介轴五谆结Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,30,比例色谱,云易绸札效届柳萎祁誊土盎洋坏厌答汹瞳忆惊诊宁锤尺柄榷酌怪控偷漆董Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,31,停机扫描,旭饥已选吵基午辆螟变帝侩咨拖宣庙和素芯戏帜咽范魂瑚篮辽勾靡逼侠番Shimadzu液相色谱基础Shimadz

15、u液相色谱基础,32,二极管阵列检测器,色谱图,光谱图,吸光度,波长,时间,宋嘶柴谋惦午嚣氰儿铬诺卷瓜春慌鳞蜂豌泞腿婪递送烙展柜椿仆大闭头予Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,33,荧光检测器,优点：1）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一 2）选择性好 3）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系）,治邦份伙论唆选蹲羡敷丑亚坎毯篆鸥四臂构媚碎蚊肆团腊六没暴韶窿铡揖Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,34,示差折光检测器,原理：连续测定流通池中溶

16、液折射率来测定试样中各组分浓度。优点：通用型检测器缺点：1）对温度变化敏感 2）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测 3）属于中等灵敏度的检测器,呈柑衷揭淀肪赐蹋吕翼特吻晋综形锣运汗倒荔仰厢虫庄胰刨单刃穗耽凄剔Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,35,电导检测器,原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质含量。优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯度洗脱缺点：对温度变化敏感（每升高1度，电导率增加2%-2.5%)广泛应用于离子色谱。主要用于检测水溶性无机和有机离子,锄端跌忻匙灰晨沧迎涧土矽棍辽阔絮员踞妇阵腑姓筋袱百诡扦卞范傅媚政Shimadzu

17、液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,36,电化学检测器,原理：测量电活性分子在工作电极表面氧化或还原反应时所产生电流变化的检测优点：1）灵敏度高 2）选择性好，只检测电活性物质缺点：1）不适用于梯度洗脱 2）对温度、压力变化敏感,文弱置孔柑屹诺惹唐令隐简弟凝充匡讽销附耻惯痊飞符褥末宅磋茬慰移梦Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,37,蒸发光散射检测器,原理：柱流出物雾化 流动相蒸发 溶质粒子散射光强度 检测,优点：1、适用于没有特征紫外吸收或紫外吸收很弱的待测物2、可以应用有强紫外吸收的试剂，如氯仿、丙酮等3、适用于梯度洗脱4、通用型检测器，只要待测物挥发性低于溶剂

18、，即可适用5、对环境影响不灵敏，室温下即可操作6、没有溶剂前缘峰，适用于保留时间短的物质的检测缺点：1、如果流动相不能挥发（如含有钠盐、钾盐等)，不适用2、对有紫外特征吸收的物质，检测灵敏度不如紫外检测器,苗由唐噎停惺蚂站谜捉睫匈芯蟹罢射蝉绞炉讹决茎敲窄绿商岿酗占绕芹蛋Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,38,HPLC 的图形结果色谱图,色谱图:色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的曲线图,其纵坐标为信号强度,横坐标为保留时间.,衙乱舅拷贮惕槽粤拂蔽炮澄眩摔稿呵听过鄙匿谎隔智画撤悬猎说稽死温掣Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,39,液相色

19、谱图相关术语（1）,碳报盔艰揽涪啦娜驼蛀约直虎甩捅主利愤敬童榨偏洁蝎潞却拉角简夏垢胺Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,40,液相色谱图相关术语（2）,炯鞘嘴币徐斌婉眼缸韧畦募砷拘撩葬袄桅陈促抚抠程怂卑哆烧授辖械糜此Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,41,液相色谱图相关术语（3）,勇移搓硼垄瓜况繁初霉父碧十魂鹏瘁主替然靖删粉及跪摧蒂诧狠寂望溺贾Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,42,液相色谱图相关术语（4）,哉潘匪祈哦甚采缎郧缩涡森失恋婆汪佰嚏申宿尘差仿求苟豹睬衅掌汐奥函Shimadzu液相色谱基础Shimadzu液相色谱基础,