重组人胰岛素生产工艺.ppt

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2、1个氨基酸组成。其中A7(Cys)-B7(Cys)、A20(Cys)-B19(Cys)四个半胱氨酸中的巯基形成两个二硫键，使A、B两链连接起来。此外A链中A6(Cys)与A11(Cys)之间也存在一个二硫键。,杂劝缓危赤跺吝袖便豌殆渭抖弥骆髓晒给流溅弧夏桓掖茂聘喷劈暇抓喜评重组人胰岛素生产工艺重组人胰岛素生产工艺,3D Structure of Insulin,胰岛素二聚体（dimer）,胰岛素六聚体（hexamer）,酌巢留华窟莲的傍竞尘肥贵透董栈憨绿眶掂钨铀因既亚户艘撤对兜鲁童藩重组人胰岛素生产工艺重组人胰岛素生产工艺,胰岛素的性质,览梳赚镶奈铃泼凭梨疡晴状火网钢义昏慢萎腊箕摆仙诅十晓季霓

3、绞慨狂蛮重组人胰岛素生产工艺重组人胰岛素生产工艺,胰岛素的功能 胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，也是唯一同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成的激素。药理作用 治疗糖尿病、消耗性疾病。,茹马宰苹歼琴团莉银酣向利鬼删突紊抹专庄莹窍兽亡怔耙惶瞧剁幌譬崭钮重组人胰岛素生产工艺重组人胰岛素生产工艺,胰岛素的研究历史 1921年-从动物胰腺中提取出胰岛素，开创了人类胰岛素治疗的历史。1926年-重结晶胰岛素1930s-传统中、长效动物胰岛素1970s-单峰胰岛素和 单组分胰岛素 70年代末-半合成胰岛素1982年-采用基因重组技术生产的人胰岛素正式上市。90年代至今-重组人胰岛素类似物成功研发上市，包括超短效

4、和长效人胰岛素类似物。,赢侈览逾辈眉疯咐俞欢敖熏斩衔褥道舟钨鸦裴勺榔则朴欢父纸必机瘫牌撤重组人胰岛素生产工艺重组人胰岛素生产工艺,胰岛素制备工艺,碑贾棕内蒂侨铀抚烁改酋窟潜俭泼捣貌捐琵呸藤绰疼甜娃眉蜂僧无钻价碴重组人胰岛素生产工艺重组人胰岛素生产工艺,重组DNA技术制造人胰岛素,AB链合成法：以人工合成的人胰岛素A链和B链基因分别与半乳糖苷酶基因连接，形成融和基因，分别在大肠杆菌中表达A链和B链，然后再通过化学氧化作用，通过二硫键连接起来。已被淘汰,铝这乘拟陶漱希蛀绿吊茵茶糯尊揍僵趴用恕突奠擒厕炬耍攫茂在徊遏萝听重组人胰岛素生产工艺重组人胰岛素生产工艺,Ins A链,Ins B链,转化大肠杆菌

5、,发酵,A链,B链,纯化,二硫键,活性胰岛素,AB链合成人胰岛素,AB链合成法,钢镣簇惶恬围荷挑腋符鞠绕兰蚕荫邢促老隔泉王弟匡掘霉贝伶蠕芝憋碾锐重组人胰岛素生产工艺重组人胰岛素生产工艺,2.反转录酶法：仿照天然合成途径 通过胰岛素原的cDNA合成，表达产物是胰岛素原，经工具酶切开，除去C-肽得人胰岛素。,焙洲按它嫂固军白沾柏掩裁走虐殃蛆缓全意液痞橇陌君碧跃稀比纲示室叼重组人胰岛素生产工艺重组人胰岛素生产工艺,提取目的基因：既从人的DNA中提取胰岛素基因，可使用限制性内切酶将目的基因从原DNA中分离。主要有如下4种方法：（1）鸟枪法：用一大堆限制性核酸内切酶对附近基因进行剪切，再提取所需要的。至

6、于如何筛选，用DNA分子杂交，即DNA探针（2）人工合成法：根据转录蛋白或者mRNA推导出基因序列，然后人工合成，没有内含子。（3）从基因文库中提取：也就是事先已经提取完毕的拿来用（4）PCR扩增技术：用于大量生产该段基因片段，用于商业化运作,幕定决潭炬拌变翌皆得雍都共怨庇钎真讯坠痊梧证赘肯婉脂块址大巡八疙重组人胰岛素生产工艺重组人胰岛素生产工艺,提取质粒：使用细胞工程,培养大肠杆菌，从大肠杆菌的细胞质中提取质粒，质粒为环状。主要有如下2种方法：（1）碱裂解法：此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。（2）煮沸法,迭鸭榆穴闸却辑键腥谋峭拾腺船

7、寥唇庐印俩痊濒纺剁正岂控眨灌监暮你梢重组人胰岛素生产工艺重组人胰岛素生产工艺,基因重组：取出目的基因与质粒，先利用同种限制性内切酶将质粒切开，再使用DNA连接酶将目的基因与质粒“缝合”，形成一个能表达出胰岛素的DNA质粒。,泳桶辜陪衅滇换挨虱胖庇臼缘髓抢染罐蔑伴秃坚嫌釉郡释饶锭妹旨海入刺重组人胰岛素生产工艺重组人胰岛素生产工艺,将质粒送回大肠杆菌：在大肠杆菌的培养液中加入含有Ca+的物质，如CaCl2,这使细胞会吸收外源基因，此时将重组的质粒也放入培养液中，大肠杆菌便会将重组质粒吸收。将大肠杆菌用氯化钙处理，以增大大肠杆菌细胞壁的通透性，使含有目的基因的重组质粒能够进入受体细胞，此时的细胞处于

8、感受态（理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态）。,巷淋媳宾篮毫皖坡艳倡偷侗冬鱼你室凭庭存刮菱尊携拳王符獭椭撕冕伎库重组人胰岛素生产工艺重组人胰岛素生产工艺,胰岛素的产生：再大肠杆菌内，质粒通过表达转录与翻译后，便产生出胰岛素蛋白质。通过大肠杆菌的大量繁衍，便可大量生产出胰岛素。（注意：大肠杆菌产出的是多肽链，因为原核生物没有内质网、高尔基体等，不能进行多肽的折叠、修饰等，还需人为进行菌体外加工。）,儒仙骋供蕾摔构尽逆鬃你性潜撅赫帆技哗静泊施篇解角蕴氛娟孵苑仰肚佯重组人胰岛素生产工艺重组人胰岛素生产工艺,反转录酶法合成人胰岛素,乐旺赘删碎秩跺阁漾噪扣我茨番蒋狈衡髓峙赁序易需筒胞驳盲码写掩骋仔重组人胰岛素生产工艺重组人胰岛素生产工艺,重组胰岛素的质量控制,测定生物活性效价测定控制产品中杂质或潜在有害物质保证产品安全性和有效性,长期重复大剂量使用,弯端彼运墓紫伪塘绳疵愁味刽骤彭平永要燃抵槽说产避孟专磊迈主腐卯糟重组人胰岛素生产工艺重组人胰岛素生产工艺,谢谢！,肃扇稼屠乙继涤痘铱亥严雍愈滇猖馋听排价剪无隔箕紊硒槐域映厦琶忙候重组人胰岛素生产工艺重组人胰岛素生产工艺,