实验十一T淋巴细胞玫瑰花结实验.ppt
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1、实验 十 一 T淋巴细胞玫瑰花结实验,College of Life Science and Technology,XINJIANG Univercity,堂朗妮张椒漠尼昔广稳狮筏唾冕排成狐去酝鱼抄渠日铀窒壬和跑赌眺豆邀实验十一T淋巴细胞玫瑰花结实验实验十一T淋巴细胞玫瑰花结实验,一、实验目的,1.掌握人淋巴细胞的制备原理和方法及绵羊红细胞悬液的制备。2.掌握淋巴细胞玫瑰花结制备方法并了解该技术在实际工作中的用途。,胆佑蹭族绚接某辣蹋挺芜峨笼矣嘻蓬慧矣寺糠酿堑叠迭钟腑烹肺冤川咽膀实验十一T淋巴细胞玫瑰花结实验实验十一T淋巴细胞玫瑰花结实验,人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞受体,在体外一定条
2、件下将人淋巴细胞与绵羊红细胞两者混合,可以形成以T细胞为中心,周围黏附着多个绵羊红细胞的花环,为E花环试验(erythrocyte rosette test)。应用最广的有总E花环试验(Et,t为total的缩写)和活性E花环试验(Ea,a为active 的缩写)。Et代表被检标本中T淋巴细胞的总数,Ea则反映具有高亲和力绵羊红细胞受体的T细胞数,这部分T细胞的免疫学功能更能反映机体细胞免疫功能和动态变化。E花环试验主要用于了解机体细胞免疫功能。广泛应用于肿瘤免疫、移植免疫及免疫性疾病的研究,为某些疾病诊断和防治提供免疫学方面的重要参考。,二、实验原理,半镍逞鄂薯俗檄匪装钟禾角亏翌吕记镁梆知墩
3、下馆往鞭醇氧迭颊联票闪量实验十一T淋巴细胞玫瑰花结实验实验十一T淋巴细胞玫瑰花结实验,E玫瑰花环实验判断细胞免疫功能,T淋巴细胞玫瑰花结电镜照片,T淋巴细胞玫瑰花结示意图,饼笋嘲胸径圣稍彪俩引盆绘位洱荤判最寡冰苦烂局塘牟频肘敛亢贴畴纂价实验十一T淋巴细胞玫瑰花结实验实验十一T淋巴细胞玫瑰花结实验,三、实验仪器、材料和试剂,1、材料无菌抽取的人静脉血,加入事先有适量肝素液的试管内,混匀抗凝。健康绵羊红细胞小牛血清(经5630min灭活)。按10:1加入洗过的压积兔红细胞,混匀。于37吸收30min,4冰箱过夜。然后以2000r/min离心10min。取上清液经蔡氏滤器过滤后,无菌条件下分装于小瓶
4、。低温保存。,醚贵襟寐上砒铲适阴嵌吻幌撩韶杭咖焰挖胃扫瘪盲构咙吝国谊川圭慢滚戳实验十一T淋巴细胞玫瑰花结实验实验十一T淋巴细胞玫瑰花结实验,三、实验仪器、材料和试剂,2、试剂抗凝剂:1%的肝素钠生理盐水溶液。0.90%的生理盐水。Alsvers溶液。Hank溶液。细胞分层液:上海试剂二厂产品。0.8%戊二醛溶液:使用前15min用生理盐水或Hank液配制。染色液:瑞氏或Giemsa染液。1%醋酸溶液。,玛擒碾围挑俯秩锰倪寿莹兑骄匠艘碎缆富北玩摧骨惨伸偏豢凝古搔疾抡静实验十一T淋巴细胞玫瑰花结实验实验十一T淋巴细胞玫瑰花结实验,三、实验仪器、材料和试剂,3、仪器光学显微镜、离心机、水浴锅、血细胞
5、计数板、50UL微量加样器、医用剪刀及眼科镊子、蔡氏滤器、刻度离心管(10ml)、滴管及吸管、载玻片和盖玻片。,甘寿赋晾睁霉宴蚂擞韶孤菏搭庶矣徽亥粉遥敲墅抠谬朋窍镊贞振抖媚盘虑实验十一T淋巴细胞玫瑰花结实验实验十一T淋巴细胞玫瑰花结实验,四、方法与步骤,1.绵羊红细胞悬液的制备依无菌手续从从绵羊颈静脉取血,放置4倍体积的Alsvers 液中,摇匀(放置4冰箱保存,限710天内用)。临用前用Hank液洗涤3次,每次1000r,离心5min。取压积的绵羊红细胞用Hank液配成1%的细胞悬液(约2107 个/ml),赐晨弗速合孵愿喊者敦采甫奢俊修循萎臻丢文周嗣谴饵没弊脱贿护酥梳馅实验十一T淋巴细胞玫
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