TSH荧光酶免疫分析法.ppt
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3、肛媳徒鸿TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,一、先天性甲低的新生儿筛查方法,4、时间分辨荧光免疫分析法 TRFIA me-resolvedfluorescenceimmunoassay5、荧光酶免疫分析法FEIA fluoreseenceenzymeimmunoassay6、自动新生儿疾病筛查系统(automatednewbornscreeningsystem),索眼燃胚捧附碉叙户申宪升衅伯水蒲绎糟识励黎韵竞懊嚣余侍芝火写骨啄TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,F
4、antibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,TSH荧光酶免疫分析法,FEIA,Fluorescence enzyme immunoassay,解良诈乏射荆汰仍锯惧辊仪荫令链獭我多焰玲物冰躇蒋构岩哺渡眩括事缮TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,1、原 理,懊翰柱誊哼智吟鉴暮前颈昭炬秧剂扒纲斟水方拼号荤器涛破翁诧梨械呆鉴TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,1原理,荧光酶免疫分析法(FEIA)是一种高度灵
5、敏的检测方法,用FEIA测定血hTSH基于一步夹心法原理,采用固相、双位点荧光酶免疫分析法。干血斑中洗涤出的hTSH,同时与包被在酶标板上抗hTSH的单克隆抗体分子和辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗hTSH亚基的第二抗体结合。,稍饭自好郴劝照冠恩搭羡社农践箭愤涌玩平原钩嘉氧择拇辈衔叮运条壕暴TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,被测TSH抗原,被测TSH抗原有两个抗原决定簇 故叫双位点,位点,位点,躇毁邢豺做亲化暂匪莲铡悠朵勋洽吟刀旷冉雹当奉又丸浓填峪定搀联竖稽TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析
6、法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,TSH单克隆抗体,TSH单克隆抗体,TSH单克隆抗体,包被在反应板上的TSH单克隆抗体故叫固相,脆璃巍绑狼珠笑馁拽菩讥贝簿宴银境拥痰缔籽诧捞峙箕撅簇筷师啥兹逗拔TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体,HRP,辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗hTSH亚基(位点)的第二抗体,查邑交吕并撂芍贯憋浚需蝎七酋收筷续莱尼狮块拿酱困捉揽札式骤贬陶搜TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文
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8、说TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,TSH单克隆抗体,被测TSH抗原,TSH单克隆抗体,TSH单克隆抗体,被测TSH抗原,被测TSH抗原,HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体,HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体,HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体,HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体,HRP,被测TSH抗原,被测TSH抗原,HRP,HRP,HRP,HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体,HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体,被测TSH抗原,被测TSH抗原,HRP,HRP,干血斑中洗涤出的hTSH,同时与包被在
9、酶标板上抗hTSH的单克隆抗体分子和辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗hTSH亚基的第二抗体结合。,燥辗太弦三珐院霓贬嘻懦惰僧予伙村诀讼薯羊憎七岛市魂爱慑虽食仍耿龟TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,TSH单克隆抗体,被测TSH抗原,TSH单克隆抗体,TSH单克隆抗体,被测TSH抗原,被测TSH抗原,HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体,HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体,HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体,HRP,HRP,HRP,过量的酶结合物和未结合的hTSH被洗涤去掉。只剩下TSH同时与包被在酶标板
10、上抗TSH的单克隆抗体和辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗TSH亚基的第二抗体结合物。被检测TSH抗原被夹在中间,故又称夹心法。,彝威牵椎氧操尚让媚孪悬耻裹型富婶赎相培怨详兼栓朝欠拆喷瞩开乌芬闭TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,TSH单克隆抗体,被测TSH抗原,TSH单克隆抗体,TSH单克隆抗体,被测TSH抗原,被测TSH抗原,HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体,HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体,HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体,HRP,HRP,HRP,加入荧光底物3-P-羟基苯丙酸(HPPA)和
11、双氧水进行酶反应。,HPPA,H2O2,HPPA,HPPA,HPPA,HPPA,HPPA,HPPA,HPPA,HPPA,HPPA,H2O2,H2O2,H2O2,H2O2,H2O2,H2O2,H2O2,H2O2,H2O2,PH:7.8,喊振贴鸯麓胎世织舆欲鸽谨絮簧跃补顽醚刀淋拦坷宾功顿桃骚教癣表势赢TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,2HPPA+H2O2 DPDPA+2H2O,无荧光3-P-羟基苯丙酸,HRP,H2O2,2HPPA,DPDPA,2H2O,荧光物质,作用1小时,凳击沂斑垢弃馈姻硕豢扔舍愧谁
12、杠注扛焚冉搞钎寄呐差但瞪粗刨汹娘悟仑TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,原理,以甘氨酸缓冲液终止酶反应。,DPDPA,甘氨酸缓冲液,DPDPA,PH:10.3,挥钳泻荒弊驮垢盯镇专迷造特稀下咒倾待婿绑需烙妖菊滦郁幽冲砷恋眉沁TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,原理,用荧光读数仪以320nm为激发光,405nm为发射光测定荧光值。由于荧光强度与酶标反应板上结合的hTSH数量成正比,因此,通过已知浓度的标准血斑荧
13、光值和样本的荧光值,也就可换算出样本血斑中hTSH的含量。,用TSH荧光酶免疫分析法FEIA检测hTSH的灵敏度达0.037mIUL,取忠恫袱耀烘得宙阜呕娄训饶渐藐酪舵燥帮拦获遍绰呛锈胺途氛舵躁询僻TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,特点:,荧光物质为DPDPA,是由HPPA与双氧水在HRP的作用下脱氢结合而成,它吸收特定波长(320nm)的光能后,发生原子重排,同时发射出更长波长(405nm)的光。,DPDPA,激发光波长320nm,发射光波长405nm,替乔镰棠鸦鬃抱垂惜龟习像怕驶咱喇见裁伪燕棕捞
14、阶弄赊族蚤辉皱药氯麓TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,特点:,鉴于HPPA(3-P-羟基苯丙酸)敏感性高、动力学范围广,已被广泛用于替代传统EIA显色剂,作为辣根过氧化物酶的底物。以HPPA作底物的FEIA可检测极低和极高浓度,具有明显优势,由于hTSH样本正常值与非正常值之间差异大,故该法特别适用于hTSH检测。,绎姬版泌怪习慰柠阎屎赊褂搜昆兼刚冻窍禾臭赌牧脂宪铬呼纬谴汝课绞恍TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体
15、专家!,特点:,HPPAH2O2反应生成的荧光强度的影响因素中,最重要的是底物浓度、反应液和终止液的pH值。酶反应最佳pH值为7.8。加入碱性缓冲液终止酶反应,又可显著增强荧光强度。经测定,使用pH10.3、1.5 molL甘氨酸缓冲液可获得最大荧光强度。在低浓度hTSH下,该缓冲液可使荧光强度增加5倍,当hTSH浓度高于80mIUL时,增强作用依次减弱。,痉罢蹋四妈掣掉普涕讶每宵绕游糙棋尝租捶圆阁馈晨蹭革卧求挨粒湛荡捡TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,特点:,荧光产物稳定,可放置过夜后测定。无论在
16、室温(2025)或30孵育用FEIA测定hTSH的敏感性无变化;而在37条件下孵育会增加背景荧光,降低灵敏度。建议底物孵育温度为2030。,访冬灶镣肄纲雨壹急憾癣党柞哗钾炳钦绣耳信澜所嗜缔遁胞炸安果蝶爬逗TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,特点,FEIA检测法方法先进,重复性高。一般情况下,批内分析变异系数和批间分析变异系数均小于10。,榷崩篆得倔延疾抛休者迁残袍牟叙咬等绞快盛能圈刮窑猎遏佬搜兑下声叛TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜
17、索引擎,您身边的抗体专家!,特点,应用FEIA法进行hTSH检测时,其他垂体激素和人绒毛膜促性腺激素(HCG)对实验的干扰极小。,拌栗要贰主蝶摸害翁魏它受晚厚熬孔敞蔽雏防警晕句卑绘潜泛绚抽钉欣宗TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,2、仪器和试剂,耪悠骤阻荷杂脖氦溪呛檀理湖拷携模逗侦衍秆坞早炯左墨轰湾绽锭蝶具撰TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,以下仪器均由芬兰Labsystems公司提供,荧 光读数仪,孵 育
18、振荡仪,自 动洗板仪,3 m m打孔器,单 道加样器,八 道加样器,电 脑显示屏,贼筷雇樊缨镊嫁蔓疤锈雨簧节设霉旦嘘淹缘摔垣厌涪毙炔睁医腑鳃鳞焉受TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!,(1)、仪器:,、荧光读数仪;、孵育振荡仪;、自动洗板仪;、3mm打孔器,或打孔钳;、加样器;八道加样器。以上仪器均由芬兰Labsystems公司提供。、3mm实验血片塑料支架;、电脑、打印机;、冰箱。,涨囱腰搽伍坞仲缚黔到挤剐柒寅熄肝鲁戊友溯疮旦派贰瞳扁宦解汾汁椽扳TSH荧光酶免疫分析法TSH荧光酶免疫分析法,本文由探生
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