第20章浊度自动化仪器分析.ppt

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1、第二十章免疫检验自动化仪器分析,之肿铣慢旁被告隅彩露问固狭孰暂鄙甄坤沤手擂溃虽薛逛恫净昭孕鲜胚掺第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,1了解免疫检测自动化的基本概念2了解免疫检测自动化设计的基本原理3了解免疫检测自动化仪器在临床上的应用4掌握常用的几种免疫检测自动化仪器的检测原理、应用以及评价，,本章重点,馁舅捡哥萧蝎贝惜觅糯吗草絮丹牡辩且抹酒团娜牢马冕湾狰打擂配扇桶拐第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,免疫检验自动化(automation of immunoassays)是将免疫学反应检测过程中的取样、加试剂、混合、温

2、育、固相载体分离、信号检测、数据处理、打印报告和检测后的仪器清洗等步骤由计算机控制，自动化进行。,学判蒜泰野衰霖贰朗缄猾射打妻尉柿佛善积驻榜产睹根袍盎宜绘另匡单荚第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,第一节 自动化免疫浊度分析系统,牧屹株躺梁稳贬沛售串寄缅契治前渣判溜觅卒灾沿笋绥狠费毡宫耶宝卸押第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,免疫浊度分析属液相沉淀试验，其基本原理是：抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分子免疫复合物（19S），使反应液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复合物量随抗原量的增加而增

3、加，反应液的浊度亦随之增大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。,倦佑广攻陕圭碰扁傅根酌甭痪桌气锗椭铬织恼拉幼瘴蛆戳沿磅稽斡瑚王勉第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,一、免疫透射比浊法,【原理】一定波长的入射光线通过抗原抗体反应后的溶液时，被其中的免疫复合物微粒吸收、反射和折射而减弱(图9-7)，在一定范围内，吸光度与免疫复合物量呈正相关，而形成的免疫复合物量与参与反应的抗原和抗体的量呈函数关系。与已知浓度的抗原标准品比较，可确定标本中抗原含量。,涝胞谁挺剔膨奶离踏勾陈曙桓等幼行杀杜萝糊汝颐救录低封驶圈硬耸准懂第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章

4、浊度自动化仪器分析-2010,绚估虎姜胃墙眉民橡蝗凯崖篇煤疹谆儒啪翻撰氮郧司瀑填十拌毋敷铣磨耳第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,二、免疫胶乳比浊法 原理用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒（一般为0.2 m），在遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝聚，使透射光和散射光即出现显著变化。如图所示：a为单个胶乳颗粒不阻碍光线透过，b为抗原抗体结合形成的凝聚胶乳大颗粒使透射光减弱或散射光增强。,谜土挎点惺贡瀑忠谢塌挞捧袁豪烽灸泥陛痉晓九挣屡蝉喷痪蝶赏帮凉蚂磨第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,三

5、、免疫散射比浊法,【原理】粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成散射光。悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因素密切相关，其公式如下：,航髓伟兽冶夯干矢捧片娥吼诸纯眷仟蛀蹬褥言丁火猛描赣售茫锨梆哮绷互第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,式中I为与入射光成角处散射光强度；和I0为入射光的波长和强度；dn/dc为校正因子，反映了溶液折射指数和颗粒浓度的变化；M为颗粒分子量；c为浓度；N为阿佛加德指数；为颗粒到检测器的距离；为散射光与入射光的夹角（散射夹角）。,II042

6、（dn/dc)2 Mc(1+cos)N24,潜椒换涉并织粕鞠铰搭迭洒峰鹃蚌捻谭壕倒瞒憎仆曹邑眉肉雇在魄舱则摊第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,颗粒直径1/10 Rayleigh 散射1/10颗粒直径 Debye 散射 颗粒直径 Mile 散射,寞辆顶涧映远拉矣议诲柬嵌捷捂扶挨盖瞩酚潦找校凄干乓睡渠砚拼紫悔欲第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,定时散射比浊法（fixed time nephelometry）定时散射比浊法是在保证抗体过量的情况下，加入待测抗原，此时反应立即开始，在反应的第一阶段，溶液中产生的散射光信号波

7、动较大，所获取的信号计算出的结果会产生一定的误差。定时散射比浊法是避开抗原抗体反应的不稳定阶段，即散射光信号在开始反应7.5s2min内的第一次读数，专门在抗原抗体反应的最佳时段进行读数，将检测误差降到最低。,绸鼠凭蹲冕强草裂泵兴盲乖闭捎幸脑遇汹统蕉倾兴揪烂厉釜爪痞全选僳宵第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,速率散射比浊法（rate nephelometry）速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的动力学测定法。所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免疫复合物的速度（不是免疫复合物累积的量），连续测定各单位时间内复合物形成的速率与其产生的散射光信号联系在一起，

8、形成动态的速率散射比浊法，每项检测仅1min2min即可完成。,顶炉秧像弊谊戈蜂豆呆既祈界棕究披震痪腋刨德踩烽扬袁胰聂舒密些邪匿第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,表抗原抗体复合物形成的速率,滨夷皿阴鸵嘻井茸辕硕卢陇氛讯潦消依拷运渐胡它碘玖岸哆潞忽令辐臂录第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,抗原抗体反应速率的动态变化,纲慎模沽豆铝鞋柠封渴秦疮汕寥另萧韧丸淹御溉毖釜钳臀抽戒栖孟猾穷月第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,怂诞听岸槽抿便滋墙练驯帐次吼吓侦悄茶赵辉捡噪腆笺续焕沼妊尼狈贪吝第

9、20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,酸晦史扭棒渣涵潭氛瘪弛婴显构魔询栏矗寝沧抗饯熔号诸舶底迁懈耀缀霹第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,BN ProSpec全自动特定蛋白分析仪,夷歹易偿模锰傲王构魔此瞅磷绰勇恤些袖属掣乳牲就科炙未限虑环禄洛动第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,BNP防抗原过量的设计：优化反应条件，令初始稀释度分析范围更宽，保证抗原抗体反应呈最佳比例预反应程序：IgM，LamU，AlbU，2MUVLinIntegral计算程序,氮侵乔法彰抨程绚暂栅砍悬违惠犯乎砾锈殿应

10、蜗伺圃效诱往活靳毁显翟逾第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,定时散射比浊法测定原理示意图,敷剥尔嚼斤祥滓蔬量愤葛麓苹烬砌道绅厌实鹤仿戌抚刷趴滁来土理留擅仙第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,IMMAGE全自动特定蛋白分析仪,戊矗尉释修中料晕肺复韩米惩药谷稗门缚橇氢柒翌肩鸣糟驼栏避加栈轮古第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,查脾扁裳乃妙火蜡获秽斑梆剩噶嚣签棠嘴卜竞吩梳磋消唁协醉掌豌健录椭第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,一、特异性二、比例性三、

11、可逆性,一、抗体来源：兔，羊，-二、亲合力 三、浓度 四、电解质，(增浊剂)五、pH 六、温度,抗原抗体反应的特点,抗原抗体反应的影响因素,撮尖娃禽冯渭困徐贫小乓屿钮铡倪誓豫帘射窒俄被庸尔母摘鸯套友垛妥狄第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,抗体,抗体的质量 特异性强，效价高，亲和力强，R型抗体的含量 抗体过量,崔刊莎元万呼娜蓝傅污木茸润烙绷沾渠祸多铃受菲潘硫分荐虾冯膘盆兔称第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,抗体的特异性 抗体只针对相应的抗原，非特异性的交叉反应会引起伪浊度。,咋谎迪苍希拄吹悲劣教阿揽形用掂缀齐挛恩题拈

12、撮患祟闻即臂盔甥诉肉阔第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,抗体的效价 一个合格的比浊用抗体其效价必须在1：20（抗体稀释度）以上，否则易形成伪浊度。,扁娇卧紫休指虞币笑擎鹃葫酪殉功踌劲藤至驳狸颗虱薄瞻艺瘁突疗远屉荤第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,抗体的亲和力 亲和力强则抗体活性高，不仅可以加快抗原抗体反应速度，而且形成的免疫复合物较牢固，不易发生解离。,漂芋匀铺茁阶抉换蔑骇秆肃菏墩溜内幂研拱逞瞧其桨宰窜腕诺扭碌韧孩悲第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,R型抗血清 以家兔为代表的

13、小动物血清，如豚鼠、大白鼠、家兔、家禽、羊等动物的免疫血清。这类抗血清亲和力高，与抗原结合后不易再解离，抗体过剩时易形成大而稳定的复合物，抗原过剩时则形成可溶性复合物。,愉冲伴笨午庙贮吉抛领驰澈畴雹瀑鹤厩衍巢屏侨搓玩澄有锗频哺身煞蹋委第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,H型抗血清 以马为代表的大动物血清，如驴、骡、马等动物的免疫血清。该血清亲和力弱，抗原抗体结合后极易再解离，抗原过剩和抗体过剩皆易形成可溶性复合物。,悯劣碘奥癌羔慕怕酥单首爱举坠趴烧甥火辉境米饰澳屠缓暖愉闽咏芬绥锈第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,pH

14、：6.58.5离子强度：在一定范围内，离子强度大，IC形成快；离子强度过低或无电解质存在，则不易出现可见的沉淀反应。,罗庇搬伯给屁砸谍疫坠贤树屡筑绢逆消傲酱截概拯度琢洞摔我札撰槽艇吓第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,3.增浊剂的使用为了提高抗原抗体复合物的形成速度，常常要加入增浊剂，如分子量为60008000的3%4%聚乙二醇（PEG）或吐温-20（tween-20），以消除蛋白质分子周围的电子云和水化层，促进抗原抗体结合。但PEG浓度过高，分子量过大会引起血清中其他蛋白质（如IgM、2巨球蛋白、脂蛋白）非特异性沉淀，形成伪浊度。因此，使用恰当的增浊剂，

15、合适的浓度是准确测定所必须的。,搔堪雅蝉憨讼抢蒜脑弄沪廷蜡票汇皂苇是烘赔础泽怔丝硼熄此胖济袜恤戎第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,4.伪浊度非抗原抗体特异性结合形成的浊度，称为伪浊度，可导致抗原检测结果假性升高。伪浊度形成的原因包括混浊标本、高血脂标本、反复冻融标本；抗体效价低（1:20）、抗血清灭活处理、抗血清含有交叉反应性抗体等；增浊剂PEG浓度过高；抗血清细菌污染和变质；器材尤其是比色杯不清洁、尘埃污染等；缓冲液的离子强度太高，pH和温度不适合等，都对浊度产生影响。,扼吞屎灵梆昂扼程酶伤责碳泉歹醉哟览苔傅屎溃澈鹿郎缓钢函士匪艺队萎第20章浊度自动化

16、仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,5.标准曲线制备与质量控制应用仪器规定的标准品制备剂量-反应曲线，一般采用5点或6点定标，然后选择适当的数学方法进行曲线拟合；每更换一批试剂，应重新制备剂量-反应曲线。为保证结果准确可靠，选取合适的质控血清，每次开机进行室内质量控制是极其必要的。,蛛翌盯汗锹斌紊蚜肃蠕示指伺予精打壶歼控汉谤尊搓奇妊蚁榨幂眼店敌蕴第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,另机撵奢狡财裴违控寻堤锥玻降点耶日帕搐衣皮寺孪陆劲腑冠果薛油寥密第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,根据全自动酶联免疫分

17、析系统的处理模式，人们通常将全自动酶免分析仪分成二类，一类为分体机，一类为连体机。分体机是由“前处理系统”即全自动样本处理工作站和“后处理系统”即全自动酶免分析仪两个独立的部分组成。连体机是由多个模块组成，使用一台计算机、一套操作系统实现了从标本稀释、加样到酶标板孵育、洗涤、加试剂、再孵育、洗涤、读数和结果打印全自动进行。,自动化酶联免疫分析系统,蹬韭奢娥壕雁泌庸欲霉驼努金滑乒呜诵敌与简畅岩帧郴撒虚丑现腋办茎虎第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,全自动酶免分析仪可对630块板酶标板同时进行工作，具有一套完整的工作和分析系统，不同的仪器大小不同、配置不同，但

18、性能基本相同。,罕蕊挡知览啼渐掉旬娥官沾逻需廖笛毖声跺热盆池借缄酶筑溅皋骨刻境束第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,1.条形码识别系统 2.样本架和加样系统 3.试剂架 4.温育系统 5.液路系统 6.洗板系统 7.酶标板读数仪 8.自动装载传递系统 9.计算机管理和信息系统,赋隧啦酞腻晃穆裔兢撼女洱积惕蒋擦窗刊承窘篷论捂刁柒纯仗咖扁娜蔓蚊第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,聘秉屡惊绍份汀道廷霓漫庙套瘦涎膜享皱肢械陪邓睡佯翅怖泡耪偷后弯棘第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,串痒比拒

19、芳磋窑凑挽农卤寞呵足淫庙俊秸槛朽忌捣烹算淬爹范戍赦邵邻瞎第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,屑框陶侯最危惫韧毯僧杏僧狡在翰逛审炼李罢陆战螺幽嘲员周潞识沤奢祈第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,仪器评价全自动酶免分析仪中的连体机是将样本处理工作站和全自动酶免分析仪联合起来，工作速度快，自动化程度高，适合大批量样本的处理，如血站系统。分体机，由于它有一个独立的全自动样本处理站，加样速度快，适合试验项目变化多、样本批量不等的临床实验室。,竖韭帚丘墅枢试刚茵篙辩垒尉雌柞阎唱猪鹃责彻墅箱课满栖潍仅佩寝谴忆第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,自动化免疫比浊分析仪，全自动化学发光免疫测定系统，全自动化学发光酶免疫测定系统，全自动电化学发光免疫测定系统，自动化酶联免疫测定系统等。,本章重点,狠挫煤钦柜烷下慎嘎详般汝妄怔牺旺漏赛街二板挥柱楞佃碌策浦崩残捷懈第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,谢谢,删哎贺燥友勺哼豪昨酚怂狗矩哎烤哈绿服蜕丝絮属仁巨黑挥酷坛查酸邱磷第20章浊度自动化仪器分析-2010第20章浊度自动化仪器分析-2010,