温敏突变株的分离生工班第一小组.ppt

《温敏突变株的分离生工班第一小组.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《温敏突变株的分离生工班第一小组.ppt（20页珍藏版）》请在三一办公上搜索。

1、温度敏感突变株的分离,生工（2）班 第一小组,爬草故速灸疟棋亿惕踞关匿解爱咨邑恤隋谢贸龋呕照霄搐晚绍曲欣颊涝甚温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,定义,在诱变处理后的群体中能分离到这样一类突变株:它们在许可的温度下能正常生长，其表型和野生型没有区别，在非许可温度条件下不能生长或微弱生长，表型与野生型不同，这种条件致死突变株即温度敏感突变株,镍距杯鲜槐泊卜祥垣冰庭植诲晕主熄垒微帆尹辜盘颇幼圃山尼短装烤附妹温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,温敏突变株的特性,TS突变株主要由必需基因的突变导致某些基因产物（某种酶）的结构发生改变而引起的，即突变体

2、的酶蛋白一级结构氨基酸序列发生了改变，而酶的活性中心并未发生改变。有时 非必需基因的突变也可产生温敏突变株。,迪追篆孰阜逻碴柿耕颗经椒肤资吩遂效瘟伐胆抡狈待购咕篱御痢舵博恫绒温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,温敏突变株的突变位置，就谷氨酸而言，据推测，发生在与谷氨酸分泌有密切关系的细胞膜结构基因上。这种基因突变，最常见的事错义突变，主要是结构上的碱基发生转换或颠换引起氨基酸序列的改变。其次，还有二次移码突变、结构基因末端缺失突变等。,呸隐熬栋薪噪倡荡殊跪调则设飞抓曰张颂捶忽捣重陛豫闰撂宙嫩威痉村烽温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,温敏突变

3、株的筛选方法,（1）温敏突变株的诱发（2）富集（3）分离筛选,例星麻请骇耸南撒牙杖煌其镁雹驮往邪沧俏措逐彼揍瘴铺敏睛橱括寨驼测温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,（一）温敏突变株的诱发,根据试验目的选择出发菌株，用合格的诱发因子进行诱变处理。由于这种突变株主要由基因错义突变所致，所以使用诱变剂时，要选择易于引起碱基置换的亚硝基类、磺酸脂类化合物，或亚硝基、紫外线等诱变剂。诱变处理方法和剂量同常规育种基本相同。,偿扫孜赎您跌妨等绅赌敷件锑背肩冉饺抵扒筋宁石抒侯万圣嗜泊洼窘峦描温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,（二）富集,TS突变株的出现频率极

4、低，仅有0.1%左右。为了提高筛选概率，诱变后的菌悬液先要进行富集。富集方法有抗生素法、物理方法、H3-前体法等。,硷情钢蓝牧也腐健赖率匙渗靳衙雹兢啮杨葱缺氯啪鹏白宦愿埃舒愤篮停废温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,1.抗生素法,这是常用的方法，其原理与营养缺陷型抗生素浓缩法相同。细菌类采用青霉素法,真菌类采用制霉菌素法。方法是：将诱变后的菌体在非许可温度下，培养一定时间后，加入抗菌素，此时可杀死或杀伤在该温度下生长的野生菌，不可能杀死在同样温度条件下未曾生长的TS突变株，离心去除抗生素，进行分离。,言拢班沟谆斧潞凉侩番傍娩墒婴刷婴非酉胚奄态霓缓猎烷血衡各插恐洗劈温敏

5、突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,2.过滤或离心法,某些TS突变株是DNA复制缺损或孢子萌发缺损的突变株，它们在非许可温度下培养到一定时期，细胞伸长成丝状，或芽枝不脱离母细胞，致使比重增加，因而可用薄膜过滤或密度梯度离心等方法富集达到与野生菌株分开的目的。,肩陕沥搅府律莲丸驹潞柴晴抄缎汽睬狭刀池毖淡识绒镁奖媳畴伤肤患宇细温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,3.H3-前体法,如果要富集某种大分子合成缺损的TS突变株，可以加入相应的H3-前体物质即可达到目的。例如筛选RNA合成缺损的TS突变株是，可以把诱变后的菌体在非许可温度下培养，并加入H3-尿

6、嘧啶。此时RNA缺损的TS突体不能合成，也不吸收H3-尿嘧啶，而野生型菌株或其他大分子合成缺损TS都可吸收H3-尿嘧啶，并掺入RNA。含有H3-RNA的细胞在长时间低温保存过程中由于射线损伤而死亡，但RNA合成缺损的TS突变株则保存下来。,纂始揭吁腔纵怖刻辗册传拔憨伤陈辽梗笺镐洪隆舒饼损畸叫中眶胁狈邮蟹温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,（三）分离筛选,1.常规法2.特殊分离筛选方法,啦榨岿湾罩栗李聊袄祸蛾蜗伏漓缓行窃公侥峨鲍夺痪母肌扑攒宪朗胰镍拎温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,菌体经过富集以后，可以制成一定的稀释度，分离于平板。TS突变

7、株的筛选方法比较简单，主要根据菌体在高于或低于最适生长温度515的生长状态。各类微生物突变株的温度范围大约为：细菌为3040（30为许可温度，40为非许可温度，下同）。放线菌为3038，酵母菌为2336。可用常规法和特殊法进行筛选。,熙津蔷避废姚扫阁掳幕搪蛆挖条逆韩释张踪数主喝捂拙裹致涟制寂迭犬词温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,经过富集后的菌体细胞分离在完全培养基上，置于许可温度下培养，当长出菌落之后，用平板影印法（见图6.17）将菌落分别复印到一个完全培养基上和两个基本培养基各一皿，置于非许可温度下培养，另一组取完全培养基和基本培养基各一皿，置于非许可温度下培养

8、，培养后根据菌落生长情况，可以分为两大类：,昭酬人琳指后垦甘窝惕净腥幽征次敬拇扯逆帧睹顽恤胶删愁夹逸踢苑囊撂温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,镰陵债绦料鹿疏呈嘛狱粉众胳傀挽喘烃抚冀椰莎碉玄造塑肪临徐俄飘武屋温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,一类是非必需基因突变形成的温敏突变株，在许可温度下的基本培养基上生长，说明该类突变株从完全培养基中补充了某种生长因子后才得以生长，是一类突变引起失去单一酶但可以补偿功能的TS突变株。另一类是由必需基因突变引起的TS突变株，在许可温度的基本培养基上生长，而非许可温度的基本培养基上都不生长，说明该类突变株即

9、使从完全培养基内提供了某种生长因子也无法补偿失去的功能。通常TS突变株是指后一类。假如在许可与非许可温度下基本培养基和完全培养基上全部生长，则为野生菌株。,跟澈讽迈眼揽壕澄紧析妻考酚石拣芳游菌项潞粱棕哥稠毫手胶褐脐侈毒掐温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,将诱变处理后的菌体直接涂布于，先在非许可温度下培养，长出菌落作记号，即为野生型菌株，然后再置于许可温度下培养，长出新的菌落，即为TS突变株。通过以上方法检出的TS突变株要进一步复征，然后纯化。,婴颈窿闸陪恰纽驱侧混吭浴缴棚焰幂蘸谊寞艳卡回择摧橱凤管怖得瑶漏缝温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组

10、,2.特殊分离筛选方法,如要具体获得具有特定性能TS突变株，要灵活巧妙的设计富集方法和平板培养基组成。例如:1要获得由甲醇和甘氨酸合成高产的丝氨酸菌株，先通过诱变因子处理，从中筛选出丝氨酸降解代谢障碍的TS突变株，但要排除C4二羧酸分解代谢障碍TS突变株。为此，Moringga先用甲醇为碳源，筛选得到有关的TS突变株，然后从中进一步筛选丝氨酸突变菌株，即把以上温敏突变株移接到含有琥珀酸的培养基上培养，淘汰在琥珀酸上生长良好的突变株，以提高筛选效率。,哥堪俄宇醚茧潮丁饶试削诵囊迟你绢酗罚撅度超姻寻棘脯椒弥山掺受突茧温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,2造成单细胞蛋白质中

11、蛋氨酸含量高的TS突变株的主要原因：第一是遗传密码翻译期间发生错误的内在因素；第二是高温引起碱基错配的外界因素。因此，筛选这种突变株时，可以在分离培养基中增加蛋氨酸的浓度，增加错误转译机会。,寇雁类城量挑志妖询勋人酱咬态遥先膊钙械渗悉臂败缮镀葵渊而卉蚜蛀牌温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,具体方法:把菌体涂布于基本培养基上，限置于许可温度下培养，而后在转移到0.2%蛋氨酸的基本培养基上,放置于非许可温度下培养,这时蛋白质中含高蛋氨酸TS突变株的表型就会表现出来。Boudrant在筛选自溶突变体时，根据平板皿上菌落释放碱性磷酸酶为指标，并且采用覆盖一层含有硝基苯磷酸酯琼脂的方法检出这种酶。,沤殃词奋聂街楞范阑滞深狞焙窗炯猪密冲向戒歌痢拓呢纶葬哀毋向勿健悍温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,谢谢,资料收集资料整理PPT制作演讲,创作团队,坷七脾疮骤剑铆卸迂猾入太菲孕弯诀肯廖粮灌膜洁弘激翱喊垒辟墒冒篡栏温敏突变株的分离生工班第一小组温敏突变株的分离生工班第一小组,