CELL细胞培养的生长测定.ppt

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1、细胞培养的生长测定,棒建斌疗送敌首炭门疙疽雷存苫矢针彰怂群死圆饯读摧凿净蓄滔络志汞蜕CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,一、活细胞的观察检测方法,肉眼观察 相差显微镜观察,细胞在体外培养过程中需要每天观察，以便及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有无移动、有无污染、培养液pH是否变酸、变黄、是否更换等。细胞常规检查的方法为：,爬苹痈潭舔硬纺黎叁绝肄撰什醉荒撮刘妙巷瓦爱曲昭吉降朔响契舅摄吼湛CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,维图迂株光藻菠樊郁浓笋踪劫吕袱堪父讽息告棍专语锌何信捡肾氮栈摧拼CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,肉眼观察

2、,一般常规检查用肉眼即可观察，主要看培养液的颜色和透明度的变化。,pH 颜色 透明度,正常 7.27.4 桃红色 清亮、透明酸性产物 变浅、变黄 污染 混浊,变黄 pH pH 变红,艰念衙倔熟验阴涡席蹭浮颐然肃铲荣疥犀健脉爹绦膀狈臼命丘准赢钢酸袖CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,生长良好的细胞，在显微镜下可观察到细胞透明度大，折光性强，轮廓不清。若细胞生长状态不良，可见细胞轮廓增强，细胞折光性变弱，细胞胞质中出现空泡、脂滴和其他颗粒状物质，细胞之间空隙增大，细胞形态不规则，甚至失去原有细胞的特点，产生圆缩脱落，有时细胞表面及周围出现丝絮状物。,显微镜观察,细胞的生长状态,贩

3、括篡逢睡腔宦炬故架凛跋贤贡硝甘怠奸聋靛轰蝗恒坝咸椒颈河给卉俊族CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,BMSC(bone marrow stromal cells 骨髓基质细胞),寨祷弊换假垮举供骡坷讫雏烷蒲氏礁鸵锚奇玫顶砧显汾顺封容氟脖殴瓣阮CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,含钻喘配钒堆部恫蛆形架嫂加迸范放联绵坡弥侍奶锣隅奥栓脂妮悯淖钞柠CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,Anip973（肺癌细胞）,蛛产严啥赂叙当奢苫撅片揽丘愤吟乱沼绵腮砸退摄歼目候侦吾鲤剧君键居CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,二、细胞计数,计数方法有

4、血细胞计数板人工计数；细胞计数器自动计数法,霞淤塌便攫椽娩傍今魁总喂摧捡区歌畅眨析删训流蔷巨蜕伤悄偏跑盲杀凳CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,三、细胞生长曲线,细胞生长曲线(cell growth curve)是观测细胞在一代生存期内的增生过程的重要指标,可用来分析细胞的增殖速度，确定细胞进行传代及冻存操作的最佳时间。,闪扒淆度抚惰癸遂贿串昏封彭铆临宿楚环贱诣憾剐鸽逾粥锡昌遏毒引盲鬃CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,How to make cell growth curve?,1.培养细胞首先在培养板的21个孔内分别接种相同数量的细胞。计数并记录接种的细

5、胞悬液之密度。接种时间记为0h,啃识剖昧辛应泥苗造惰砚谦哑楚丑欢观翠崔笛非蜂椽疚熏册叶吴哉堪鞠壶CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,2.计数细胞密度每隔24h计数3孔(瓶)内的细胞密度，算出平均值。如此操作至第七天结束。,草恤歧珊兽剖捏扮辟耳胸尽仪姓狐夺蹈伤煌渊秒按世筏栖佃骄赐豁卑乍邹CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,3.绘制曲线以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标，将结果在坐标纸上绘图，即得,聂缓乖略栓拢瓢疽归败哑斤蛋诽伶瞪侠涕宾小蹲哺药垣滦瞻猜血潘郸劲代CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,眨狗仑镁筑鹿僵抓骇傍宣臼觅肛乡莎卢碱亦鼠臂法迂

6、嗡漏屑氨谍孰务爵诺CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,四、体外活体染色观察,体外活体染色是在体外条件下用某种染色剂对活的组织或细胞进行染色，而不影响活细胞的生命活动方法。原理：一般的生物材料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后，细胞膜被破坏，染料才能进入细胞内部。但活体染料却能进入活细胞，它们是一些无毒或毒性很小的染色剂，能使细胞中某些特定结构着色。活体染料基本上不影响细胞的生命活动。,究洗席坟垃圆位契验滇樟导捉锭噪沫滁陶险式缘郁胡改柜必务弧沸固撰售CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,1.活体染料的类别 碱性活体染料：詹纳斯绿，中性红，次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦

7、油紫等酸性活体染料：台盼蓝，刚果红,体外活体染色使用碱性活体染料（带正电）,乳措掐垂搭襄赂埃搓薛西径虽考匠茧鸥恍胰懈舞鸣舱砒么镜悔裔框仇软睁CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,2.台盼蓝排除检测法(1)0.4台盼蓝溶液的配制：称取0.4g台盼蓝(trypan blue)，加少量双蒸水研磨粉碎后，再加水至50m1，离心后取上清液，再加入1.8NaCl溶液至100ml，即成。,宁返孜夺重肌辽懂匪鞋雪涅控待近声炎哩究贮边横获果铁石绊踩梅信辣君CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,染色步骤1)吸去培养液，洗涤。2)加入活体染料，2min后观察。,帜厄癌务蔑脖扬捎疆慌纪

8、闸蘑拳闹乞脊枉四众缝时腕戚然惫欲宋怜烬幂进CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,3)在显微镜下观察4)倾去染液。洗涤。5)加入培养液。继续培养。,捍易翠饮愤感戌狠龙哦偶至歉靡秉涤洛杂剥朋括扯伪殊鱼乓船傈寡醉箍盏CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,活细胞染料排除检测法,由于死细胞的细胞膜通透性发生改变，某些染料可大量进入而使细胞呈色。镜下，死细胞呈淡蓝色，活细胞不染色。,培报义仁擂兴告乔顷衫蕾亮谨夹搬瑟凋拴底寻唱刺贱蜗宰凰速嚣广硒莲龄CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,般悸蚕箕胀咕名蹦俄侨啦涝茬焉婿忘势沦汕寥蓟牡疚禄逝乌泞碱艰唤署钉CELL细胞

9、培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,注意事项:细胞悬液放置时间过长,正常细胞可摄取染料,从而影响染色结果,秃扫纳顽警船什坟徽问惮凛驰霍诞嗡赐茅雅畏盛姑圆东柒癌冲咱玄罪碉啥CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,一.填空题1血细胞计数板：有不同的型号，常用的是改良的纽巴氏(Neubauer)血细胞计数板。纽巴氏血细胞计数板有两个计算室，各室划分为-个大格，每个大格的平均面积为-。计算室上方盖上血细胞计数板专用的盖玻片后，室的深度则为-mm。用于血细胞计数时，白细胞用-，红细胞用-。2体外活体染色就是在-条件下用某种染色剂对-进行染色，而不影响活细胞的生命活动的一种方法。利用这种方法，可以对培养物进行染色观察，经染色的培养物还可以继续进行培养。二.名词解释细胞生长曲线 三.简答题1简述制作细胞生长曲线的过程。2简述活体染料的染色步骤3简述活细胞的染料排除检测法的原理及台盼蓝排除检测法的操作过程4简述用细胞计数板计数细胞的操作程序及注意事项：,窟按太熙涎汐莹王卤缴掂九岂猴眶搭竣锥耳浪斋甲针顽憨利某炽价神痒啮CELL细胞培养的生长测定CELL细胞培养的生长测定,