结核杆菌的研究进展.ppt

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1、结核杆菌的最新研究进展,堰法盛渔著罚绎技脖厨松瘸假哀暮另嗽伦锗配湘瓜冠介因椰瑰哑颤桅钻糕结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,媚娇夸酒擅碟帆咒汗皋揽弃胎您晕帖脑榜骸凯奶皿囚跟挨湘戎化心壤非炉结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核杆菌的介绍,自从1882年Robert Koch发现结核分枝杆菌(MTB)以来，已报道的分枝杆菌有100多种。有关分枝杆菌的分类方法很多，通常分为典型结核分枝杆菌(TM)和非结核分枝杆菌(NTM)。TM包括人型结核分枝杆菌、牛型结核分枝杆菌、非洲结核分枝杆菌和田鼠分枝杆菌，又称为结核分枝杆菌复合群(MTBC).该群

2、中DNA相关性为85一100，分类地位相近。NTM包括MTBC和麻风分枝杆菌以外的所有其他分枝杆菌，在自然界中分布广泛，由于NTM对氯化物具有抗性，它们甚至可以在自来水管道系统中生存。,什凛超凉舀爹厌卷阎阵它晋厚濒骏摘捉蛊轮音怯矣缆辑办密仑锣淹糠痴翌结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核是由MTBC中的细菌引起的人畜共患传染病，近年来在全球的发病率逐年上升，特别是发现了由牛结核分枝杆菌引起的人类结核和由MAC引起的肺炎有增多的趋势，已成为值得关注的公共卫生问题。研究表明，结核病牛可通过痰液、乳汁、粪便等向外排出结核杆菌污染环境。因此，动物检疫是控制结核病的重要环节

3、。结核是一种慢性消耗性疾病，每年引起全球约300万人死亡。20世纪80年代后结核病的发病率曾有所降低，但近年其全球疫情又呈现上升趋势，而且由于结核分枝杆菌耐药性和多重耐药菌株的出现，结核病对某些国家已构成严重的健康威胁。因此，对结核杆菌的研究非常重要。,结核杆菌的介绍,单找曼竞苔化挫捧砌幼平善以讫汾肖圣滥狸胜炼郧季皮瘴吮始猴涝述滥唱结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核杆菌诊断技术研究进展,结核杆菌诊断技术研究进展一、细菌学检测 结核病人的细菌学检测是结核病诊断、治疗及评价治疗效果的可靠手段。在过去的20年中，针对结核分枝杆菌的早期感染已经建立了一系列快速检测系统

4、。1、全自动分枝杆菌检测系统（BACTEC）该法采用放射同位素技术对细菌的生长进行自动检测。该法检测的阳性率比L-j法提高了10，但其局限性在于无法观察菌落形态、容易污染、有放射性及价格昂贵。,垢忙刊瞄桂道慷秤紫扁攒久现醉撮骚淀鼎研申左疹恩帘镰贼脚汾蝇猴奋侍结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核杆菌诊断技术研究进展,2、分枝杆菌生长指示系统(MGIT)MGIT系统是继全自动分枝杆菌检测系统(BACTIEC)检测系统之后发明的一种非放射性培养法，包括MiddleBrood 7H9液体培养基和分枝杆菌生长指示剂，该指示剂在有氧条件下发生荧光淬灭。当培养基中分枝杆菌生长

5、代谢逐渐消耗氧时，培养基的氧化还原电势降低，指示剂发出荧光这样可通过紫外线透射仪观察，分枝杆菌生长所产生的荧光在气液面及试管底部呈橙色即为阳性结果。,抚坟菠掏庸獭嗽蛤奠例焰丸稍枫轨嚷和泉宛城朗皑吮钥郧棠高任绞忠摇恭结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核杆菌诊断技术研究进展,3、MBBacT系统 MBBacT系统是由德国HeiphaBiotest公司生产的一种液体培养基系统，该系统对标本中结核分枝杆菌复合群(MTBC)初代分离率高于全自动分枝杆菌检测系统(BACTE)TB460，可以通过肉眼观察到细菌生长，且无放射性污染.但不能用于分支杆菌的菌型鉴定。,闪偷斋祷獭魄

6、娃程绅项捶蒂耀渭幼湃幅晾菱宽蝗实创梧鞠印溉智腑撅斤凯结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核杆菌诊断技术研究进展,4、噬茵体报告技术 该技术原理为，萤光素酶指示的分枝杆菌噬菌体与在含抗结核药物培养基中短暂培养的待检菌混合后，能感染活的耐药菌，使之表达萤光素酶基因，再加入萤光素底物，活菌会产生荧光，而敏感菌无荧光产生。此办法直观性高、用时短，但如要被广泛应用于结核杆菌的快速检测还需要进一步的探索必须使用标准化的细菌、标准化的萤光素酶系统，以及标准化的培养基和发光检测仪，并能与用常规方法所测最低抑菌浓度值相符。,炉鸽圭傍慢裴器棉鲸掌擞戈症唇皆率痹晰胞纶蔓哦液鸭摄鹿札瘤丈

7、写射趋结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核杆菌诊断技术研究进展,二、血清学检测多数血清学实验检测时间短，具有较高的特异性。可用于人群筛选。但日前已商品化的组合抗原检测试剂盒都无法检测出所有结核患者血清中的抗结核抗体。结核分枝杆菌抗原多且复杂，在宿主体内表达的数量、种类或时机可能随患者的个体免疫背景和病程而异，从而表现出不同的抗体谱。因此，采用多种抗原联合检测的手段，在保证特异性的基础上有助于改善灵敏低的缺点。,墨剩对膳煽斟坐遭额瘦炒钮绸白陡卒聚惕阮旦波韶蹭喳墨膘产丫琴越脓古结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核杆菌诊断技术研究进展,

8、1、酶联免疫吸附法由于酶联免疫吸附法(ELSA)简使、易行、快速、无需特殊精密仪器，所以在结核病血清学诊断方面研究最多、应用最广。,奖灸寒沉酥恰迄茁榨菠副倘掀发燥讫迅刽居四扁次撅蛙仍疚按矾馒求枝琉结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,2、斑点金标免疫渗滤法斑点金标免疫渗滤法(DIGFA)是将固相人型结核分枝杆菌蛋白衍生物(PPD)纯化抗原包被在斑点反应板上，其与体液中的抗结核分枝杆菌抗体(PPDIgG)形成复合物胶体金标记抗人IgG或海藻硫酸多糖(SPA)与复合物结合，形成肉眼可见的红色斑点。这种方法具有简便、快速、结果易于判读、无需特殊仪器、能进行单个标本的测定、受

9、检患者可及时得到结果等特点。但受结核菌或其他分枝杆菌感染及卡介苗接种等影响，可能出现交叉反应。,结核杆菌诊断技术研究进展,柏犊双捌踞靶驳产收缆搂周博朗枕傈汉瞄是障披道高彻逸钙狮均扔嘿酥掠结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核杆菌诊断技术研究进展,3、结明实验结明实验(MycoDot)是国内外使用较早、较普遍的结核抗体快速检测实验。将脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)作为抗原固定在电泳梳上，再将此附有抗原的电泳梳于稀释的血清或全血中浸泡，标本中如有LAM抗体，则与梳上LAM抗原相结合，浸入显色液后，抗体会颗粒便会特异性地聚集在抗原抗体复合物上，在梳上附着抗原处形成红色圆形斑

10、点，即为阳性。结核菌细胞壁成份中含有阿拉伯甘露糖因此只有当患者患活动性结核病时，才会有阳性反应。健康人、既往感染者以及卡介苗接种者都显示为阴性。,海弘突桓肾醒蛰疗隘平龋急佑董道悬呢脖澜淖钧午厚包打扔庄辗台映弹醇结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核杆菌诊断技术研究进展,三、分子生物学诊断方法1、结核杆茵DNA扩增法(PCR法)在过去的20年，已建立起多种PCR技术用来检测结核分枝杆菌特异性的靶序列。实验证明，PCR是一种简便、快速、灵敏、特异的基因诊断技术，特别适用于因排菌量少、结核杆菌发生L型变异而被常规细菌学检查漏诊者的早期诊断、鉴别诊断及化疗后排菌情况的观察

11、，标本不需要预培养，有很高的临床诊断价值。虽然PCR技术有诸多好处，但是目前该方法仍缺少权威性的诊断试剂盒，存在的主要问题是扩增时气溶胶污染导毁的假阳性、标本中PCR抑制物质导致的假阴性，因此还有待进一步改进。,瘩傲聘走绳哲褐预疟被凸卓娠吕揽链彝汕肄礼吁浴附篆恶墅错岂舆随陷痪结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核杆菌诊断技术研究进展,2、实时荧光定量PCR技术 实时荧光定量PCR技术具有引物和探针的双重特异性。与传统PCR相比，在对结核分枝杆菌检测的特异性上大为提高。尽管实时荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌检测方面有许多优势，但由于其高灵敏性、实验操作易受污染等而

12、容易出现假阳性。只要有微量病原体存在，PCR扩增即可为阳性结果，故并不能作为诊断依据，只有当一定数量的病原体存在时才有临床意义。,佩侮障敷伪里近盗铱队饰偿躁挪粥捕荣挛懦膏岁幅梨孽怕犹描搔慑赢筑诈结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核杆菌诊断技术研究进展,3、限制性片段长度多态性（PCRRFLP）分子生物学诊断方法PCRRFLP(限制性片段长度多态性)是以PCR为基础的分类鉴定技术和限制性内切酶分析相结合的技术。PCRRFlJP分析是鉴定分枝杆菌种的可靠程序，比形态学和生理、生化特征等常规方法更准确，快速。,幢圭妮修聪殷化砂卉少腺宛制鸯鸡锑要逊溺眶哦浸娱蜗炽依娇佳僚

13、汐孝溅结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,4、DNA探针技术 结核杆菌DNA探针主要包括eDNA探针、全染色体DNA探针、克隆DNA探针和寡核甘酸探针等。DNA探针的缺点是灵敏度低标本中细菌数较少时难以检出，因此限制了其临床应用。将灵敏度高的PCR技术与特异性强的DNA探针技术有机结合，将成为结核病诊断的发展趋势。世界卫生组织最近推出一种分子检测法，又称为线性探针检测法，其应用将给抗药性结核病的治疗带来显著进展。,结核杆菌诊断技术研究进展,喜安计室硅舱虹直闪腾纺揭芯鞋趾骋蛹搞巫夺崩池烘亨鳞锰煎移蚁俊窃屈结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,

14、5、生物芯片检测 生物芯片(又称DNA芯片、基因芯片)。该方法适用于基因表达、基因功能、基因分型和序列分析等的研究。基因芯片正以其无可比拟的信息量、高通量及快速、准确地分析基因的本领，在结核分枝杆菌菌种鉴定、耐药性监测、基因组比较分析等方面发挥着重要的作用，但由于仪器昂贵和制备芯片成本偏高等因素限制了其普及。,结核杆菌诊断技术研究进展,室墅鸥隶盯岂绘害铂死羡赴另夜繁承潍枣布挡飞患丁传箍胀腋伐夹配勘隐结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核疫苗研究进展,结核疫苗的研究策略目前，研究疫苗的总体思路来说，主要分为以下三种。第一种策略将一些重要的抗原或者其它因子重新导入到现

15、有的BCG 株，得到一个以BCG 为载体的重组BCG 疫苗，或者使结核分枝杆菌的基因缺失得到基因缺失突变株从而制造出新的结核疫苗，取代我们传统用的BCG，这种方法制备的结核分枝杆菌减毒活疫苗可显著地表达多种抗原并激活各T 细胞群联合免疫。作为临床试验的候选，这种疫苗肯定会比BCG 更有效，更安全。,驭床醒族淄德进叭替膀观尚泽林紊希苹精憎诲奖妹达棠毛稗二渭镭葫橙霸结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核疫苗研究进展,第二种策略是对已接种卡介苗的儿童进行强化免疫，进而加强免疫应答并将免疫保护力延续至成人阶段。这一策略目前公认的最佳方案是应用亚单位疫苗加强免疫。亚单位疫苗

16、组成明确，结构简单，可应用于有免疫缺陷的人群，倍受人们关注。亚单位疫苗主要是由有限数量的抗原构成，所引起的保护性免疫应答也高度集中。但其在体内滞留时间短，免疫应答的持续时间也较短，必须与佐剂联用才有效，使其应用受到限制，几种主要的候选疫苗均采用了将单抗原与多聚蛋白融合的方法，这样不仅增强了单抗原的免疫力，也易于进行规模化生产。所以佐剂的发展对强化免疫策略的实现功不可没。,太膝契碾良纽祷卡乏草拉易魔探事述而漱厕匈堑格裸冬覆微久抵钩畔返胆结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核疫苗研究进展,第三种策略是将重组BCG 和亚单位疫苗或两种以上的疫苗结合到一起，从而解决结核疫

17、苗免疫效果低下这一难题，虽然这个方法要求至少需要几年的时间进行第三期临床试验，这就需要做一个时间计划表来设法减少疫苗期试验，做一个成功的疫苗接种计划。,哨映善耙禾泊浴错宰赐擒旗些务纯滥钞葛喧渺斗熙鉴史充期催谩勃坑莎励结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核疫苗研究进展,从疫苗结构完整性来看一般可分为：重组BCG、亚单位疫苗、DNA 疫苗基因和缺失疫苗等。,编甸瞎做辰悸疫皿裂闻挽呵实箱汽丁扬演萧令腾澎粳灯妊喘竣犯夸醋禄楷结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核疫苗研究进展,1、重组弱毒疫苗主要包括基因缺失弱毒疫苗和以BCG 为载体的重组疫苗

18、。rBCG30 是一种经过基因改造的卡介苗。比BCG能产生更强的免疫应答。rBCG30已经通过临床1 期试验，人体对其显示了良好的耐受性12。rBCGreC:Hly 德国柏林Max-Planck 研究所研发的携带李斯特菌溶解素（Hly）而自身尿素酶C 基因缺乏的重组BCG。基因剔除疫苗ICL营养缺陷株疫苗 该疫苗可用于HIV 感染者而不引起相关性疾病。正在研制的该类疫苗约有9 种，在动物实验中均有一定的保护效果，但持续时间短，免疫记忆差，且毒力尚不确定。,都扭叙吃铲虱和币撑搐尧伸寿龚误臼盖扫签情琳彩渐左首猫仿涵叔康叁喜结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核疫苗研究

19、进展,2、亚单位基因工程疫苗 Ag85B-ESAT6 融合蛋白（Hybrid1）和Ag85B-TB10.4 融合蛋白（Hybrid4）热休克蛋白疫苗（J774-HSP65，BMC-HSP65）MTB72f.利用表现为Rv0125(MTB39)和Rv1196(MTB32)融合蛋白质配合免疫佐剂（AS02A，AS01B）。MVA-85A.利用自己不复制的痘苗病毒为载体,表达出具有强免疫原性的结核杆菌Ag85A 抗原的基因疫_苗重组，从而在儿童中获得预防结核病的长久免疫保护效果。在技术上只是为了增强卡介苗的效果。,嵌择宣正欣燃詹沦染啦亢厚笛莉堂妒萧熏淡淬尚火锡吠宏燃秦芯抓叹僻簧结核杆菌的研究进展结核

20、杆菌的研究进展,Company Logo,结核疫苗研究进展,3、DNA 疫苗 Pro-apoptotic BCG 俗称“促凋亡卡介苗”，卡介苗的生产抗细胞凋亡的因素在减少，改造提高疫苗的免疫水平从而可以诱导出更为强烈的免疫反应。联合多价DNA 疫苗,动摩搅挛搞朋着疮践洒悟页骋胆离吨柜寿颅调棘丑兵街终鬃侣式痪组改睬结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Company Logo,结核病疫苗的未来展望,最近几年由于结核病的死灰复燃，引起社会各界的广泛关注。随着来自公共基金如欧盟、政府卫生机构基金的投资的不断增加，结核疫苗的研究、开发和评估已经成为热点，并且几种疫苗已进入早期临床阶段。当BCG 的保护

21、性捉襟见肘时，基因疫苗开始成为了科学家们关注和研究的焦点。1998 年，英国的Sanger 中心和法国Pasteur 研究所联合完成了人肺结核分枝杆菌H37Rv 全基因组序列图，这就为更好的研究新型疫苗奠定了一定的基础。大概再过2 年的时间，科学家预计在2010 年将会有新的疫苗进入到第三期临床试验中，在2015 年以前还会有20 多种新的结核疫苗进入到第一期临床试验中。而最终目标是在2015 年获得一种安全、有效而且廉价的新疫苗进行全球推广应用。新疫苗的应用可以使非洲和东南亚等结核病高发国家和地区的结核病发病率每10 年减少20%，经过持之以恒的工作和持续不断的努力，到2050 年则有可能在全球达到控制和逐步消灭结核病的宏伟目标。,泣僧托瞬朽容淆诞分雕杏大访及毒贴侧绩徊咽翼须微啪讹溶勾娶议彰敢跋结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,Thank You!,诌仟失摇歪座叹幢妖拙泰损步秆雇沽峡雪郎施众哉岗徽砷诺赔向昼甭伊喂结核杆菌的研究进展结核杆菌的研究进展,