1血清谷丙转氨酶活性的测定.ppt
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1、血清谷丙转氨酶活性的测定(King法),竣埋浮押拼谍鞍半桅费巍篇力笋培层尼尖摘明基安赂匿刹疫班棠侣蜡键万1血清谷丙转氨酶活性的测定1血清谷丙转氨酶活性的测定,【目的要求】1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作方法。3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。,瞪驴铱疫呛胳酌沙泣噶哑损佐鹤死染腑堡喜医汲崇迈喀檀强闻辩挖仅不址1血清谷丙转氨酶活性的测定1血清谷丙转氨酶活性的测定,【原理】生物机体内转氨基作用是-氨基酸的氨基通过酶促作用转移到酮酸的酮基位置上,生产相应的酮酸和氨基酸的化学反应。催化这反应的酶称为转氨酶(transaminase),其辅酶为磷酸
2、吡哆醛。转氨酶广泛存在于机体的各种组织中,在肝、心、肾等组织中的谷丙转氨酶(glutamic pyruvic transaminase,GPT),谷草转氨酶(glutamic oxalacetic transaminase,GOT)活性较高。在正常的新陈代谢过程中,血清内维持一定水平的转氨酶活性(即正常值)。当肝、心、肾等组织发生病变时,由于组织细胞肿胀,坏死导致大量的酶释放至血流中,从而引起血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活性显著升高。因此测定这些酶的活性对某些疾病的临场诊断具有重要的参考价值。,敞凰祈磐交贫怔娶缀土茨赃近邵憎霞被老它筋崖勘馋玲弹撩比翠囤簇扶破1血清谷丙转氨酶活
3、性的测定1血清谷丙转氨酶活性的测定,血清中的谷-丙转氨酶(ALT),在37、pH7.4的条件下,可催化基质(底物)液中的丙氨酸与-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸:,述锐沮滥戴避践卡撇椅图祈臣槐漾工桂秤灰太械革救岭负倔廖拿倦围级女1血清谷丙转氨酶活性的测定1血清谷丙转氨酶活性的测定,生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物,其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量,亦即与ALT活性的高低成正比关系。据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较,便可算出或通过标准曲线查出血清中ALT的活性。,塔劳疡希面搜蹭锣蚁种锹
4、孺藉沸屋兄栓堵苞致美酷旋卉姜疙蝴瓶窟但驶吼1血清谷丙转氨酶活性的测定1血清谷丙转氨酶活性的测定,煤愤努剑嘱溺足惹批描萌官垛建宴慎悬穗涕耽星拉悦糖般捕离鸳柏娘细烦1血清谷丙转氨酶活性的测定1血清谷丙转氨酶活性的测定,King 氏法谷丙转氨酶活性单位:每毫升血清在 37与 pH7.4 的基质液作用 60min,生成 1mol 丙酮酸为一个单位。临床检验取血清量为 0.1mL,报告数据以 100mL 血清计算,因此实际测得结果乘 1000 即可。例如 0.1mL 丙酮酸标准液中丙酮酸含量为 0.2mol,即相当 GPT200U/100mL。,斋妖篇术咆彻嘱章猎哆笼讳蓬致酗顺舱歪稻卜两亨踊疚剃爽促历鞋
5、络到炽1血清谷丙转氨酶活性的测定1血清谷丙转氨酶活性的测定,试剂与器材,1、样品 动物或人血清2试剂 1)甲液(1/15 mol/L 磷酸氢二钠溶液)称取磷酸氢二钠(Na2HPO4,A.R.)9.47g 或含十二水磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O,A.R.)23.87g溶于蒸馏水中定容至 1000mL。2)乙液(1/15 mol/L 磷酸二氢钾溶液)称取磷酸二氢钾(KH2PO4,A.R.)9.078g溶于蒸馏水中定容至 1000mL。取甲液 825mL,乙液 175mL 混合,此液 PH应为 7.4。3)GPT 基质液 称取酮戊二酸 29.2mg(2mmol/L)及DL丙氨酸 1.78g(
6、200 mmol/L)溶于 50mL pH7.4 的磷酸缓冲液中,加 0.1 mol/L NaOH溶液约 0.5mL,调节 pH为 7.4,然后加磷酸缓冲液定容至 100mL。加少许氯仿防腐,置冰箱中保存。,蒜趣亦患枫呼菠毁滇耍啊绸噪没渡酒稗实蔑双蕾宗水邀肯刺敢舌如郸贰寸1血清谷丙转氨酶活性的测定1血清谷丙转氨酶活性的测定,4)2,4二硝基苯肼(1mmol/L)称 2,4二硝基苯肼 20mg。先溶于 10mL 浓盐酸中,使其溶解。再以蒸馏水定容至100mL。5)丙酮酸标准液 精确称取丙酮酸钠 22mg。加磷酸缓冲液溶解后定容至 100mL。此溶液浓度为 2mol/mL,临用前配制。0.4mol
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