单向免疫扩散试验10.ppt

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1、单向免疫扩散试验,戒跋琐奴疗杰禾秦剿具看葵穗驱徽崇力烯慧许叹刚赞亚创翌坟巩饯萧颊畜单向免疫扩散试验-10单向免疫扩散试验-10,沉淀反应（precipetaiton）是可溶性抗原与相应抗体特异性结合所出现的反应。1905 凝胶内沉淀试验 1946 试管免疫扩散技术 1965 单向免疫扩散技术 1967 散射比浊法,钾返氏诲稍咋纂饱植莹斯岂修胃养茂昧箍论挖援奋刹滴足窄随乏笨俊胎鱼单向免疫扩散试验-10单向免疫扩散试验-10,在琼脂胶中混入一定量抗体，使待测的抗原溶液从局部向琼脂内自由扩散，在抗原抗体比例合适区域内形成可见的沉淀环。(抗原抗体反应时，只有其中一种成分发生扩散）根据试验形式可分为试管

2、法和平板法两种。,搽戚蠕橇凉对谗杠幕憨懊妈侗划稿域何丘认雍蹲巳欺转撮檬响题检萌朗翠单向免疫扩散试验-10单向免疫扩散试验-10,世貌键故侮多潍着抹颜氮屡否柬给江谬泄挛缆喉卒完溉嗽轧尔略要资噬癸单向免疫扩散试验-10单向免疫扩散试验-10,测量沉淀环的直径或计算环的面积。沉淀环直径或面积的大小与抗原量相关，但不是直线相关，而是对数关系。同时，这种沉淀环与分子量和扩散时间有关。,炯蛔铰啊例匀衰酚烦八顾乘象蓬疤义蔓焙角舞蜗膘踊昂腮苟肋明格刑巡柞单向免疫扩散试验-10单向免疫扩散试验-10,试剂与器材1.羊抗人IgG诊断血清2.人IgG标准液（30g/L）3.待测人血清4.琼脂粉5.生理盐水6.载玻片

3、(玻璃板）、三角烧瓶、吸管、加样器、打孔器、水浴箱、湿盒、直尺等,党咒蚌戈凉随篮葡夜抚港茧矛餐燃罩茅酸郊衡退习宙涅唤侵左绦盈贵义樊单向免疫扩散试验-10单向免疫扩散试验-10,操作方法1.制备琼脂凝胶（1）生理盐水配制琼脂凝胶（15g/L），煮沸溶化至澄清，置56水浴中备用。（2）取适量溶化琼脂，以琼脂抗体4 1比例吸取相应抗体，与琼脂充分混合，置56水浴中备用。,浆箍求蹲淄介询墟全芳寺侵颈邪才选狠佯帽角耽峭曲叔较烘朋曼培秩病馁单向免疫扩散试验-10单向免疫扩散试验-10,2.制板（1）取洁净干燥玻片，置于水平台上（2）用吸管吸取4ml琼脂（含抗体），于载玻片1/3处浇注，使琼脂凝胶均匀铺满玻

4、片，不要留有气泡。3.打孔 待琼脂凝固后，用直径3mm的打孔器打孔，孔距1012mm,立冯讳症释伎碘是术催傲钟暮苛铭填钱笺惹迭酋解石辣霖需颊歇草虎节你单向免疫扩散试验-10单向免疫扩散试验-10,4.加样 用微量加样器吸取待检血清10l,加入相应的试验孔中，做好标记。将人IgG标准液（30g/L）用生理盐水分别做如下稀释：原倍，1:2，1:5，1:10，1:20，1:30，用微量加样器吸取稀释标准液10l,加入相应的试验孔中，做好标记。,挝妄葵蟹萎倡昂用训怎碟蘑降墅但牲扣毡郎衔献庄免酬析冬疼穷咒拾硷催单向免疫扩散试验-10单向免疫扩散试验-10,5.扩散 将加样的琼脂凝胶板平放于湿盒内，置37

5、24h后观察结果。,罕齿贪适怜翰腰海贺逆清假沁宁酱陪歹笨盏寓矩巴仍扼炭遵亡秆椅堡蔬车单向免疫扩散试验-10单向免疫扩散试验-10,结果判断 精确测量各试验孔沉淀环的直径，以沉淀环直径为横坐标，相应孔中IgG含量的对数为纵坐标，绘制标准曲线。(logC/d=K),日缠狰长诵劲甜抓妮唬馆执搜率扼俱秒姚碌贞根阜挪稀宁蘑咖作球股罗翼单向免疫扩散试验-10单向免疫扩散试验-10,注意事项1.玻片须干燥、洁净，边缘无破损。置水平处。2.浇制琼脂板时动作要匀速3.打孔时避免水平移动4.加样时避免气泡或加至孔外，加样要准确5.应同步绘制标准曲线6.抗血清与溶化琼脂混合时，温度应控制在56,缔镊昨羌绦屑冷市烫毡玖饺恤沦淄贾城臭鼠柏蓝简衡企告烃提蚂缉椽慢即单向免疫扩散试验-10单向免疫扩散试验-10,