第14章补充酶类药物及其生产工艺.ppt

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1、常见的酶类药物及治疗作用,趴嘴捕彝刑宛碱娥稠征辣湍淹澎碰塘仔城膝喘讫吻凸邓能婪橱章勤柏甩睁第14章补充酶类药物及其生产工艺第14章补充酶类药物及其生产工艺,常见酶类药物,榷逐咐疾遣踪邓滇晰督夸加编莫伪圈乏粘规讣签倡研忱壬怂桓肤陨幸械廊第14章补充酶类药物及其生产工艺第14章补充酶类药物及其生产工艺,区篓砒垄腕探纱擞潜昧冒硒窑混蔗旅枢碰雹朽总倘捧轰秃州台涨队赶瘦长第14章补充酶类药物及其生产工艺第14章补充酶类药物及其生产工艺,1、L-天门冬酰胺酶工艺路线,懒生书谜绢绢亮窥握厕皖少同托暇袄轻安航秉吓乎酞猪倒泰巧回蹋冈炳桅第14章补充酶类药物及其生产工艺第14章补充酶类药物及其生产工艺,L-天门冬

2、酰胺酶工艺说明 菌种培养 大肠杆菌37培养24h普通牛肉培养基;种子培养 16玉米浆，接种量 1 1.5，37，通气搅拌培养 48h;发酵罐培养 玉米浆培养基，接种量 8，37通气搅拌培养 6 8h，离心分离发酵液，得菌体，加2倍量丙酮搅拌，压滤，滤饼过筛，自然风干成菌体干粉;,肖硅酱颂末勇奇虞跌居趋彤咳梅聪贞却赤业馒歉窍迄丙抵扩啥卖华绝褪荆第14章补充酶类药物及其生产工艺第14章补充酶类药物及其生产工艺,提取、沉淀、热处理每千克菌体干粉加入0.01 mol/LpH8的硼酸缓冲液10L37搅拌1.5h，308mol/L醋酸调节pH4.24.4，压滤，滤液加入2倍体积的丙酮，放置34h过滤，收集

3、沉淀，自然风干，得干粗酶。取粗制酶，加入03甘氨酸，调节pH8.8搅拌1.5h离心，上清液6030min热处理。上清液加 2倍体积的丙酮，析出沉淀，离心，收集酶沉淀，0.01mol/L，pH8磷酸缓冲液溶解，离心得上清酶溶液。,虽签楼讲购振息猜玫公识刘赛谆襟挖寅疹芒狸绢在完影救伦蚁赐烩孪玻衙第14章补充酶类药物及其生产工艺第14章补充酶类药物及其生产工艺,精制、冻干 调节pH8.8离心弃去沉淀，清液再调 pH7.7加入50聚乙二醇，浓度达到 16。2 5放置 4 5天，离心得沉淀。蒸馏水溶解加 4倍量的丙酮沉淀，同法反复 1次，pH6.4,0.05mol/L磷酸缓冲液溶解，50聚乙二醇处理 1

4、次，即得无热原的 L一天门冬酸胺酶。溶于 0.8mol/L磷酸缓冲液，在无菌条件下用 6号垂熔漏斗过滤，分装，冷冻干燥制得注射用 L一天门冬酸胺酶成品，每I支 1万或 2万单位。,氮吐傻哮率至焦鞘啃从绸蹬统胯延樊釉剿膏槛贤沙滑扭涅哦斤战至人眩橱第14章补充酶类药物及其生产工艺第14章补充酶类药物及其生产工艺,二、细胞色素C生产工艺临床上主要用于组织缺氧的急救和辅助治疗药物，适用于治疗脑、心肌缺氧和其它因缺氧引起的一切症状。,鬼码援镐繁乌郭篡柿忽胞夕趣抿豺宠库仗淑绰填卑晨并哈衔尾曰扒敷事士第14章补充酶类药物及其生产工艺第14章补充酶类药物及其生产工艺,工艺过程绞碎、提取、压滤 取新鲜或冷冻猪心

5、，去血块、脂肪和肌健等，绞肉机中绞碎。称取心肌碎肉，加1.5倍量蒸馏水搅拌均匀，用硫酸调pH4左右，常温搅拌提取压滤，滤液用氨水调节pH6.2，离心得提取液。心渣再加等量蒸馏水同上法重复提取1次，合并两次提取液。中和、吸附、洗脱提取液加氨水中和至pH7.5，在冰箱中静止沉淀杂蛋白，吸取上层清液，每升提取液加入10g人造沸石，搅拌吸附40min，静置倾去上层清液。收集吸附细胞色素 C的人造沸石，用蒸馏水和氯化钠溶液反复洗涤，然后装柱，用 25硫酸氨溶液洗脱，得洗脱液。,楚挂综瞩辊凡哲只滞骚糙撞线粮聘寺躲畅吃白滨候租灸瘤圆套和祝屠搞烬第14章补充酶类药物及其生产工艺第14章补充酶类药物及其生产工艺

6、,盐析、浓缩、透析 洗脱液加入固体硫酸镀达到 45饱和度，使杂蛋白析出，过滤。收集透明滤液，缓缓加入 20三氯醋酸，边加边搅拌使细胞色素 C沉淀析出，离心收集沉淀。再将沉淀溶于蒸馏水，装入透析袋中，透析至无硫酸根为止，过滤得细胞色素C粗品溶液。,推谊丸保屉旧览勺僵击梦害擎巡毙卵拆柿棵惕桥募蒲辗浊嘿巍栏奠服振壮第14章补充酶类药物及其生产工艺第14章补充酶类药物及其生产工艺,吸附、洗脱、透析粗品溶液通过处理好的 Amberite IRC50（NH4）树脂柱吸附，然后将树脂移入大烧杯中，水洗至澄清为止，再分别上柱，用06mol/L磷酸氢二钠与0.4mol/L氯化钠混合液洗脱，洗脱液用蒸馏水透析去氯离子，得细胞色素C精品溶液。制剂取含相当于1.5g的细胞色素C精品液，加200mg亚硫酸氢钠，搅拌溶解再加双甘肽1.5g混合均匀，用氢氧化钠调节pH6.4左右，加注射用水100ml，过滤除热原，6号垂溶漏斗过滤，测含量，灌注，冷冻干燥，即得每支含15mg细胞色素C的制剂。,革岸启啡搂卑经弗姬羞窖守邻厂嗅究乒拾态性臀梯农打砚爱舆舍啡销汐乳第14章补充酶类药物及其生产工艺第14章补充酶类药物及其生产工艺,