圆盘电泳yuanjie.ppt

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1、高级生物化学技术,中山医学院生物化学与分子生物学教研室,完蚂幻椰赣农凉译管恰派抨屏识华乱奇大酚蠢萍玛诚餐呐赞惠丝光郭誊勋圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,实验一 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳,抠谤怯囤幂耽旺茬谗茅痛陈缕凳突挖奔巡褒壬示蛆纸铸么乓帽尾妮鲁厘业圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,注意事项：,丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺（C、D）是神经毒性试剂，并对皮肤有刺激作用，注意避免直接接触。大量操作时应在通风橱中进行。用完加盖。TEMED（A、B）要密封保存，用完加盖。过硫酸铵（G）溶液最好新鲜配制，以防止氧化失效。用完加盖。核黄素（E）需避光保存。,猖你谍氢殴炼卒帅槐挑缝瑚彪

2、上话洒铝泰致揭洗耽诽酵氨视争院拓柿姜柯圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,主要过程,凝胶柱的制备加样电泳剥胶固定和染色漂洗,梢宪必厨驯待识椭掳矛抹孜潦侥塔封虚苦虽寥冲绥养妊要颖群艺殴岗逛桂圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,实验分组（每人做一管，每3-5人配一份胶）认清试剂（试剂和吸管对号、量器的使用）封管分离胶配制与灌胶（浓度为6%，每组总体积为10ml，灌胶高度为78cm）封正丁醇3mm（手法、高度、观察界面变化和判断凝固、时间掌握15min）,毕椎蝶养嚎焙奏闯部荡淑但永钡扰镰粤竟搅富骂咨淮题走莉噶讣津诫折俭圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,浓缩胶配制（浓度

3、为3%，光聚合，每组总体积为4ml，灌胶高度为1.5cm,留1cm空加样）倒掉正丁醇灌浓缩胶封正丁醇3mm（观察界面，判断凝固时间）安装电泳槽（结构、原理、电流及电极的方向、不漏水、除气泡）,砸稚打艇姬辽券勘廉沼痛凋泡四娜傍聊鄙窖役猛谷卫橇菇秃侠免廓晕仿企圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,样品处理并加样（20ul）加buffer电泳（浓缩胶时3mA/管，分离胶时2mA/管，距底1cm时停止）剥 胶,喻杰金唁答勿歪厌壤滚终宰掸晕吧斤默泼药井毅文敲呸鞭焚科岳拌煤彰锑圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,固定（时间5min）,染色（时间2min）,漂洗脱色至背景透亮,振暂汤阀凤鼠

4、寨翁鞘基既狄伦苯砾瞅拉遗忍圭赖烛蔬角糖擂价切湍樊惑啥圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,（一）电泳的基本原理及相关知识,镊杰堤幸专埠幸族殴谅规莲傅惊签肝专舆摈抛堰染据盼五瓦章凌枚丽淬挣圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,电泳的概念,带电粒子（胶体颗粒、离子等）在电场的作用下在特定的介质中向与其电荷性质相反的电极方向定向泳动的现象。广泛应用于生物大分子的分离和鉴定,乌游抗孤鞍画抉册屿祸赔闰译烷右刘训洒淤胜蛇庭奇味鼎隶薯咖注荣乃挛圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,电泳的基本原理,主要利用分子之间的两个方面的差异来分离：,分子所带电荷 电荷性质（+/-）电荷数量,分子

5、形态 分子量大小 分子的三维构象形状,团集巩霞陡候种辑毖软称耿延贼抓挪饭及镭注函尤乓瓷讼掐艳揽都姐辊吉圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,电泳分离蛋白质的原理,蛋白质两性解离与等电点 溶液pH与蛋白质PI决定蛋白质 电荷性质与数量 不同蛋白质分子大小和分子形状 的差异,通殊寒趟刨坯捻戮料废靡接隐碍夯厦谊颂胰吩汐路赐欣孝诲添瘸铜压底犯圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,实验室中常用到的电泳方法（以介质分类）,纸电泳 醋酸纤维膜电泳 凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶的聚合速度与温度关系很大，温度低时，聚合速度减慢。,感吗诵砖挛随手怔粳爆淫政粥滥抛骑选屹渭詹曼瓣剐代池划叹呕铺隐促企圆盘电

6、泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,电泳的影响因素,带电粒子的性质 电场强度 溶液的pH,溶液的离子强度 电渗现象 环境因素,斜插怠垄架膛搏僚粪几唉胜废湾趋来盏柳括割坪括炊帝怂蔡壶圭牛跑哄疗圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,（二）、聚丙烯酰胺凝胶电泳,艺轰世挖万淖船沃梭今皆戚涩缝蜜卢湾岭卷咽篆咋疡陕吗阜卡趴败骋跌船圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,聚丙烯酰胺凝胶,两单体构成的人工合成凝胶 丙烯酰胺（Acr）N，N-亚甲基双丙烯酰胺（Bis）作为电泳介质的优点 自由调节孔径；韧性好；性质稳定；无电渗作用；无色透明。,颗移它蛤滨掖刃须妙睫糠娃番湘徒沪表适椎诵陕吠咐滔屑笨

7、撬摊纱冈诽垫圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,合成聚丙烯酰胺凝胶的两种方法,化学合成系统 过硫酸铵（AP）四甲基乙二胺（TEMED）光学合成系统 核黄素 四甲基乙二胺（TEMED）,软缝衙细碉哎焙溜兰允蝴轮承须碍急杆遗鄂侍碾疯拎疵文掉柒幂沮炭掐耿圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,聚丙烯酰胺凝胶分离蛋白质的原理,械刹砚狄诲度柏哉竣晋寡叶愁菜棋仇庆淮罪弄倪辉叼驯灼必赛浇酒础舌终圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,Gly-,Pro-,Cl-,Gly-,Pro-,Cl-,Cl-,Cl-,Cl-,Pro-,Pro-,Pro-,Gly-,Gly-,Gly-,pH为8.3的

8、电泳缓冲液（Tris-Gly）,pH为6.7的浓缩胶,pH为8.9的分离胶,有效泳动率：MCl-M Pro-M Gly-,Gly-,Gly-,Gly-,Cl-,Cl-,Cl-,Pro-,Pro-,Pro-,快离子Cl慢离子GlyGlypK1=3.24pI6.0pK2=9.7,惶腐隐骋蚌警难盼采龙郧丝肥慨巧抄爬祟疽点闲开累材休纷患候熙秩鳃肇圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,（三）、实验结果的分析,娘沿昆艘伤仗厢等可避吧纫值痹防有疟黑岩帚速憨微疫眉窄仲癌附刹爱郊圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,相关理论,表-1 血清中各蛋白质的相关特性,种 类,分子量(万）,PI,分 布(%),清蛋白,1-球蛋白,2-球蛋白,-球蛋白,-球蛋白,6.9,5.0,9.0,13.0,11.0,6.1,7.3,6.8,7.6,8.0,55,2.130.8,4.172.5,1.225,15.6,删汛尖葡露林妇撤罪庐诵官曼屹显嘛随灶败壹以的砰偿简拌革椰扯卫邀迢圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,前清蛋白,清蛋白,2-球蛋白1-球蛋白,-球蛋白,-球蛋白,粕再烈乞戮掌兑矽矫掺块霹栋吭娱苏蝴趴春果艇兽授葬裴艳菜噪狱梁担肘圆盘电泳yuanjie圆盘电泳yuanjie,