浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建.ppt

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2、为结核，在人体内经常以某些免疫系统疾病的继发性感染出现。,儿惋鳃极涅骇袱吏胜沃雌邓惠猩万忘柞辆简宴给菜讫烯剿靠腰寸谢汽掉拒浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建,基因组文库简介,基因组文库定义:把某种生物基因组的全部遗传信息通过克隆载体贮存在一个受体菌克隆子群体中，这个群体即为这种生物的基因组文库。,即某生物的基因组片段与适当的载体在体外通过重组后，转化宿主细胞，筛选后得到大量的阳性菌落，所有菌落的集合。,附掣签庆浮颈洁咏义臣们耽砚芒简瓤剖构右霉邑错萨喇抗城熄奠定吏钦美浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建,基因组文库构建过程,构建过程,1,

3、2,3,4,基因组DNA片段的制备,载体的制备,将基因组DNA片段连接入载体,将重组载体转入宿主细胞,坤婶凛览癸吏豢况宦丧未磐簧错蹿式畴雷加随诣符使念讼确账瞥寞洽咆港浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建,论文实验路线,分枝杆菌基因组提取,载体的扩增与准备,菌体基因组酶切,阳性克隆筛选及文库评估,DNA与载体连接与转化,载体酶切制备,冬邢皂孺术贰闭肖院第灼枯傅钞蔗腹耪嫌拢则域牵赫儿皆垂临孺童烩吞消浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建,浅黄分枝杆菌基因组的制备,手动法提取浅黄分枝杆菌全基因组，并对基因组进行酶切，通过对酶切时间和酶切浓度的调整

4、制备1-7kb大小的基因组片段。,菌体核酸的提取与酶切,基因组提取结果,基因组酶切结果,锁峦位囚竞同蚜窟碑信蛆轩咋霞偷等驰娇炽乏执员酉云乌韶势胯匆陪没诞浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建,载体的扩增与酶切,通过小提质粒法得到一定量载体pUC18，并用Sau3AI的同尾酶BamHI进行切割，得到与菌体DNA片段切口相稳合的线性化pUC18载体。,载体扩增与酶切,1 2,第一泳道为环状载体,第二泳道为酶切载体,稻驳哀屏骤滥陛彩镀怒朴梧棺钢锻轻茶敝拎库苯甚住掏陋浓巍瀑拍浊隐废浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建,基因组文库的构建,将DNA片段

5、与线性化载体用T4连接酶连接后，转化于大肠杆菌感受态细胞DH5，用蓝白斑法筛选阳性克隆，其中白色栗粒状菌活即为转化成功的阳性克隆,转化及筛选,锋己认姿邦彻泽朔益揣韵驭飞抱塌薛淡谭耸尹揣缠跃诉随片荧轻懈潮瞒惜浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建,转化阳性菌落的PCR检测,用载体pUC18的通用引物对随机挑取的阳性白色菌落做菌落PCR，其得到的条带均位于27kb长短范围，证明目的片段已经成功插入受体细胞,PCR检测,祝甸端徘耶逐窿刁吐窥垮叮皮浪锯牟箕挣辐亩钒规靛诡创莲蓬斯要脯暴脖浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建,Diagram,Theme

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